We would like to thank Pascal DuBois for proof-reading the article. The authors would also like to thank the personnel of the Animal Facility at Hunter College of The City University of New York. This work was supported by a NIH RCMI grant to Hunter College.

Ethics Statement Alle tierexperimentellen Studien wurden von der Institutional Animal Care und Verwenden Committee (IACUC) des Hunter College der City University of New York zugelassen. Anmerkung: acht BALB / c-Mäuse wurden in diesem experimentellen Verfahren verwendet. Fünf BALB / c-Mäuse wurden mit 5 × 10 6 BNL 1ME A.7R.1 Maus hepatozelluläre Karzinomzellen implantiert werden, um die primären Tumoren zu erzeugen. Drei BALB / c-Mäuse keine Implantationen wurden als Kontrollen verwendet. BNL 1ME A.7R.1 ist eine murine Leberzellkarzinom-Zelllinie, die durch chemische Umwandlung aus dem murinen nicht-tumor Hepatozyten-Zellinie BNL CL.2 abgeleitet wurde. BNL 1ME A.7R.1 wurde von der American Type Culture Collection (ATCC) erhalten. 1. Pre-Chirurgie <ol><li> Stellen Sie sicher, dass Mäuse, für alle Überlebens Operationen sind gesund. Um sicherzustellen, dass Mäusen gesund sind, inspizieren Anzeichen von Austrocknung durch Ausbeulung der Haut. Verwenden Sie keine Mäuse, die mit jedem Anzeichen von Krankheit oder distress in diesen Experimenten. </li><li> Wiegen Mäusen, um sicherzustellen, sie sind nicht untergewichtig. Sicherzustellen, dass das Gewicht mindestens 16-20 Gramm. </li><li> Vorbereitung 5 x 10 6 BNL 1ME A.7R.1 Maus HCC-Zellen für die Implantation per Maus: <ol><li> Saugen Sie Medien aus einem 10 ml 60% - 70% konfluente Zellkulturschale BNL 1ME A.7R.1 Maus HCC-Zellen. Waschen zweimal mit 5 ml PBS. 2 ml Trypsin, in die Schale und bei 37 ° C in einem befeuchteten Inkubator mit Luft und 5% CO 2 für 5 min. </li><li> Anschließend trypsiniert Pipette 10 ul Zellen in einer manuellen Zählkammer zur Zellzählung unter dem Mikroskop bei einer Vergrößerung von 10x. Zählen Sie die Gesamtzahl der Zellen in den vier großen Eckquadrate gefunden und multiplizieren Sie den Verdünnungsfaktor durch die Gesamtzahl der Zellen. Dann dividieren durch die Anzahl der Quadrate gezählt und mit 10 multiplizieren, 6 für die Zellkonzentration (Zellen pro ml). </li><li> Mit den Programmen, sammeln 5 Millionen Zellen pro Maus in sterile1,5 ml Mikrozentrifugenröhrchen. Beschriften von 1,5 ml Mikrozentrifugenröhrchen. </li></ol></li><li> Resuspendieren der 5 x 10 6 BNL 1ME A.7R.1 Maus HCC-Zellen in 100 ul phosphatgepufferter Salzlösung (PBS). Bewahren Sie diese Zellen auf Eis, bis die Implantation in der Chirurgie. </li><li> Führen Sie Aktivitäten für die Vorbereitung von Mäusen für die Operation, wie Narkose und Haarschneide weg vom sterilen Geräten und Materialien, um eine Kontamination zu vermeiden. </li><li> Induzieren Narkose bei Mäusen durch Inhalation von Isofluran mit einem Isofluran Verdampfer zusammen mit Sauerstoff bei einer konstanten Konzentration Flussrate von 1 l pro min (ca. 2,1%). Anmerkung: Das System ist selbstständig und enthält eine Präzisions-Verdampfer, eine Sauerstoffversorgung und einen Aktivkohlebehälter, die mit einem Atmungskreislauf für Gas / Anästhetikum Abfangen benötigte verknüpft ist. </li><li> Sicherzustellen, dass der Anästhesie geeignet ist, um das Tier unterzogen Schmerzen während der Operation zu verhindern. Führen Zehen Prise und beobachten Tier für nicht-Verantsiveness Anästhesie zu bestätigen. </li><li> Zu dieser Zeit, schalten Sie die Ventilleitung, Siegel an die Box und offen für die Nasenkegel. </li><li> Sobald die Maus betäubt, tragen Sie eine kleine Menge einer Augensalbe auf die Hornhaut als vorbeugende Maßnahme vor dem Austrocknen und Schäden. </li><li> Anschließend bewegen Sie den Tier zum Vorbereitungsbereich, mit dem Nasenkegel ordnungsgemäß aufgestellt und angeschlossen (zur Aufrechterhaltung der Narkose). Bereiten Sie die Website des chirurgischen Einschnitt für die Chirurgie durch Depilation an diesem Vorbereitungsbereich. </li><li> Sicherzustellen, dass der Bereich der Operation ist an einer Stelle frei von anderen Aktivitäten. </li><li> Stellen Sie sicher, dass die Arbeitsoberfläche stabil und angemessen desinfiziert, unverschmutzten und aufgeräumten vor der Operation ist. Legen Sie eine sterile Stück Leinen oder OP-Tray darüber. </li><li> Stellen Sie sicher, dass das Operationsfeld sind nur verfügbar für Personen, die Durchführung der Operation. Stellen Sie sicher, dass die chirurgische Raum wird gereinigt und mit einem geeigneten Reinigungsmittel gewischt und mit einem geeigneten Desi gesprühtctant. </li><li> Stellen Sie sicher, dass es auch von Türen und Fenstern, wie Luftströmungen positioniert kann Staub, was zu Kontamination der Website zu verbreiten. </li><li> Führen Sie die Überlebenszeit der Operation mit sterilen Instrumenten. Entweder genießen Instrumente in einem Desinfektionsmittel nach Empfehlung oder Autoklav-Herstellers. Verwenden Sie sterile Grundversorgung, die betriebsbereit sind. </li><li> Separate Instrumente nach Funktion, um zu verhindern Verunreinigung der sterilen Bereichen. </li><li> Rasur ungefähr 1 Zoll rund um die Seite des Einschnitts (Mittelschnitt), um die Leber des Tieres gelangen. Entfernen der Haare von dem Tier entfernt von der Stelle der Operation. </li><li> Nach der Rasur, reiben Sie die Fläche mit einem seifigen Desinfektionsmittel (betadine chirurgische Macchia) und waschen Sie die überschüssige Desinfektions weg mit sterilem PBS-Lösung. Führen Sie dies mehrmals, mit dem gesamten Prozess Peeling Dauer ca. 5 min. Entfernen und die verwendeten Handschuhe verworfen. </li><li> Danach, um Schutzkleidung zu ändern, wie Surgical Kleid, Gestrüpp top und Gesichtsmaske. Als nächstes desinfizieren Hände mit der richtigen Peeling-Lösung vor, die sich OP-Handschuhe. Anmerkung: Dies ist ein notwendiger Schritt Abwurf und Verunreinigung der Operationsstelle mit möglichen Verunreinigungen zu verhindern. </li></ol> 2. Chirurgie <ol><li> Geben Sie eine externe Wärmequelle für Wärme während der gesamten Dauer der Anästhesie. Das Tier kann eine Unterkühlung zu erleben, weil Anästhesie verursacht Störungen der Thermoregulation; Daher halten die Körpertemperatur. </li><li> Legen Sie die Maus auf dem Rücken in der gesamten Operation. </li><li> Befestigen Sie die Vorderbeine, Hinterbeine und der Schwanz der Maus auf dem OP-Tisch mit Stücken von chirurgische Bänder. </li><li> Stellen Sie eine gerade Linie Einschnitt unmittelbar schlechter als die xyphisternum. </li><li> Verwenden Sie eine sterile selbsthaltender Retraktor, die Leber zu schützen. </li><li> Mit einer Spritze mit einer 20G Nadel langsam und vorsichtig zu injizieren 100 ul PBS, enthaltend 5 × 10 6 BNL 1ME A.7R.1Maus HCC-Zellen in den rechten Leberlappen. </li><li> Nach dem Entfernen der Nadel, tragen Sie eine sterile Wattestäbchen für mindestens 1 min, um eine mögliche Blutung zu stoppen wegen der hohen Durchblutung der Leber. </li><li> Schließen Sie das subkutane Gewebe mit einer absorbierbaren Naht, gefolgt von Hautverschluss mit chirurgischen Klammern. Anschließend reinigen Sie die Wunde noch einmal mit Betadin-Peeling. Anmerkung: Dies wird den Verschluß der Operationswunde zu gewährleisten. </li><li> Subkutan geben 100 ul physiologischer Kochsalzlösung. </li></ol> 3. Post-Chirurgie <ol><li> Unmittelbar nach der Operation, übertragen Sie die Maus, um einen sauberen Käfig mit einem postoperativen Identifikationskarte, um Hausmeister des Maus-Zustand zu informieren. Geben Sie Nahrung und Wasser. Hinweis: Nach unserer Erfahrung, eine Maus, die gerade durchgemacht hat Chirurgie am besten abschneiden, wenn allein mit nassen Nahrung und Wasser für die erste 24-Stunden-Periode nach der Operation untergebracht. </li><li> Halten Sie das Tier warm mit einer Wärmelampe, die Hitze abstrahlen nicht übertraf 38 ºC. USE-Thermometer, um die Temperatur zu messen, bis die Maus vollständig wiederhergestellt wird. </li><li> Haus das Tier in einem Käfig vorzugsweise mit Papierbettwäsche, um Komfort zu gewährleisten. </li><li> Nach anfänglichen Erholung, überwachen das Tier Anzeichen von Unwohlsein, Blutungen, Schmerzen und Leiden. Geben Buprenorphin (0,05 -0,1 mg / kg), um Schmerzen zu lindern. Die Aktivität, Verhalten und Aussehen, sowie Wasser und der Nahrungsaufnahme für ca. 2 h genau zu überwachen. Wenn ambulante, bewegen Sie das Tier wieder in die Gegend für regelmäßige normale Gehäuse von Mäusen und weiterhin auf 6-12 h Intervalle für 24 Stunden nach der Operation zu überwachen. Führen Sie eine Gewichtskontrolle, falls gewünscht. </li><li> Allerdings, wenn das Tier ist mit Problemen erholt, geeignete unterstützende Behandlung Aktionen. Wenn Mäuse sind nicht in der Lage sich zu erholen, mit Menschlichkeit einschläfern Mäusen über CO 2 Ersticken und Genickbruch. Folgen Sie genehmigten Richtlinien des Instituts für die Euthanasie. </li><li> Nach der Operation, überprüfen Sie für die klinische Beweise für HCC in der Regel observab istle als signifikante Reduktion der Körperkondition. Anmerkung: An diesem Punkt wurde ein Primärtumor wahrscheinlich in der Leber entwickelt und metastatischen Ablagerungen wahrscheinlich in der Lunge entwickelt. </li><li> An dieser Stelle opfern alle Mäuse (Versuchs- und Kontroll) im Experiment durch humane Sterbehilfe beteiligt. Betreff die Mäuse zu Erstickung mit Kohlendioxid: sehr langsam setzen Kohlendioxid in die Kammer über einen Zeitraum von 5 bis 10 min. Dies führt dazu, Atemstillstand. </li></ol>

<ol>
	<li>Sheng, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Capture,+release+and+culture+of+circulating+tumor+cells+from+pancreatic+cancer+patients+using+an+enhanced+mixing+chip.">Capture, release and culture of circulating tumor cells from pancreatic cancer patients using an enhanced mixing chip.</a> Lab on a Chip. 14, 89-98 (2014).</li><li>Ogunwobi, O. O., Liu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+and+prognostic+importance+of+epithelial-mesenchymal+transition+in+liver+cancers:+insights+from+experimental+models.">Therapeutic and prognostic importance of epithelial-mesenchymal transition in liver cancers: insights from experimental models.</a> Critical Reviews in Oncology/Hematology. 83, 319-328 (2012).</li><li>Ogunwobi, O. O., Puszyk, W., Dong, H. 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C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+physics+of+cancer:+the+role+of+physical+interactions+and+mechanical+forces+in+metastasis.">The physics of cancer: the role of physical interactions and mechanical forces in metastasis.</a> Nature Reviews Cancer. 11, 512-522 (2011).</li><li>Heindryckx, F., Colle, I., Van Vlierberghe, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+mouse+models+for+hepatocellular+carcinoma+research.">Experimental mouse models for hepatocellular carcinoma research.</a> International Journal of Experimental Pathology. 90, 367-386 (2009).</li><li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+in+vivo+mouse+model+of+metastatic+human+thyroid+cancer.">An in vivo mouse model of metastatic human thyroid cancer.</a> Thyroid Official Journal of the American Thyroid Association. 24, 695-704 (2014).</li><li>Menezes, M. 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M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+tumor+cell+isolation+and+diagnostics:+toward+routine+clinical+use.">Circulating tumor cell isolation and diagnostics: toward routine clinical use.</a> Cancer Research. 71, 5955-5960 (2011).</li><li>Saad, F., Pantel, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+current+role+of+circulating+tumor+cells+in+the+diagnosis+and+management+of+bone+metastases+in+advanced+prostate+cancer.">The current role of circulating tumor cells in the diagnosis and management of bone metastases in advanced prostate cancer.</a> Future Oncology. 8, 321-331 (2012).</li></ol>

The authors declare that they have no competing financial interests.

In diesem Artikel eine ausführliche Beschreibung des Verfahrens gegeben, dass kürzlich von Ogunwobi und Kollegen der erfolgreichen Etablierung eines orthotopen syngenen Mausmodell der HCC Metastase berichtet (Abbildung 2) 3. Die Entnahmerate von Tumoren, für dieses Verfahren ist im Allgemeinen hoch. Wir haben früher beobachteten eine Tumoraufnahmerate von 100% 3. Allerdings kann die Aufnahmerate variabel, abhängig von der Kompetenz der Prüfer sein. In einer aktuellen Experime...

Hepatocellular carcinoma (HCC) is one of the most lethal cancers, with poor prognosis and low life expectancy. Nearly all cancer-related deaths are due to the metastatic spread of the disease from the originating organ to additional distant organs2-6.HCC progression is a complex process. Therefore, being able to model the tumor microenvironment that is naturally found in metastatic HCC in animal models can prove to be a successful and useful way to reveal relevant mechanisms in humans.7Unfortunately, the mechanisms of cancer metastasis are still largely unclear. Therefore, there is a need to establish animal models that will enable us to elucidate the underlying molecular mechanisms of metastases of cancers such as HCC3,5.
Mouse model systems are a very useful approach for delineating mechanisms and evaluating novel strategies for treatment of metastatic human cancers5,8. The various mouse model systems that presently exist are a testament to efforts of researchers to correctly depict the complexity of the disease5,8,9.
Ogunwobi and colleagues recently used a survival surgical approach to demonstrate establishment of a novel orthotopic syngeneic mouse model for the study of metastasis in HCC3. Their work established a &#8220;patient-like&#8221; mouse model that recapitulates features of aggressive and metastatic HCCs3. They further demonstrated that this mouse model system can be used to study the biology of circulating tumor cells, and that this holds potential for gaining novel insights into the mechanisms of cancer metastasis3.
The aim of this paper is to describe in detail the methodology used in establishing this &#8220;patient-like&#8221; orthotopic syngeneic mouse model of HCC metastasis3. The methodology of how to implant BNL 1ME A.7R.1 mouse HCC cells directly into the liver (the organ of origin) of the inbred wild-type immune competent laboratory mouse strain, BALB/c3 using survival surgery will be described. Unlike other mouse xenograft tumor models where human tumor cells are implanted into immune deficient mice, this system is syngeneic and is, therefore, suitable for studying the role of the immune system in tumor metastasis3,5,8. This approach will likely gain widespread use for studying the mechanisms of metastasis in solid organ cancers.

<table border="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Micro Dissecting Tweezer&#160;</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>(RS-5040)</td>
			<td>Tip .20 x .12mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graefe Micro Dissecting Forceps, serrated curved tip</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>(RS-5111)</td>
			<td>1 X 2 teeth, curved tip width 0.6mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Dissecting Retractor-Agricola (3 by 3 prongs)</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>(RS-6501)</td>
			<td>Blunt 3 X 3 prongs, depth 4mm, spread 25mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Dissecting Retractor-Goldstein (3 by 3 prongs)</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>(RS-6503)</td>
			<td>Blunt, 3 X 3 prongs, depth 4mm, spread 19mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Jameson Caliper (Measures tumors)</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>(RS-6466)</td>
			<td>80mm/3 inch scale, chrome plated&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Dissecting Scissors, large ring sissors, straight and sharp</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>(RS-5852)</td>
			<td>23mm blades, length 4 inches, flat shanks and large rings</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel with blades, for delicate dissecting procedures</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>(RS-9861-36)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel handle&#160;</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>(RS-9884)</td>
			<td>Solid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Littauer Stitch Sissors</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>(RS-7074)</td>
			<td>Length 4.5 inches</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brown needle holder, for easy suture tying</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>(RS-7960)</td>
			<td>Convex jaw, fine serrations</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reflex 7MM wound clips with reflex 7 clip applier</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>(RS-9262)</td>
			<td>safe, secure alternative method of wound closure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Instrument tray and lid</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RT-1350S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini-clipper with detachable blade</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>(RS-5903)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Germinator 500 (the Germ Terminator) Dry Sterilizer</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>Ds-400, Ds-401, DS-501</td>
			<td>For fast decontamination of micro-dissecting instruments.&#160;&#160; Instruments decontaminate within 15 seconds.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microinjection needles</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BD305125</td>
			<td>25G Needle</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a "patient-like" orthotopic syngeneic mouse model of hepatocellular carcinoma metastasis

The majority of cancer-related deaths are caused by the metastasis of the cancer rather than the primary tumor itself. Yet, the underlying mechanisms of cancer metastasis are still unclear. Animal models are essential for elucidating the mechanisms and for evaluating novel strategies for the treatment of metastatic cancers. Here, an in-depth description of a &#8220;patient-like&#8221; orthotopic syngeneic mouse model for exploring the mechanisms of metastasis of solid organ tumors is provided. The survival surgical implantation of BNL 1ME A.7R.1 mouse hepatocellular carcinoma cells directly into the liver (the organ of origin) of the inbred wild-type immune competent laboratory mouse strain, BALB/c is described. The success and reproducibility of this methodology recommends it for widespread use in elucidating the biological mechanisms of solid organ cancer metastasis.

Die Leber von Balb / c-Mäuse wurden mit 5 × 10 6 BNL 1ME A.7R.1 Maus HCC-Zellen implantiert. Klinische Beweise für HCC Entwicklung zu beobachten war 63 Tage nach der Operation. Demzufolge wurden die Mäuse auf humane Weise eingeschläfert. Autopsie wurde auf die eingeschläfert Mäusen durchgeführt. Die Lunge und Leber wurden reseziert und eine sorgfältige Brutto Prüfung durchgeführt, um makroskopischen Tumoren zu identifizieren. In einer Maus wurde ein oberflächlicher Tumor auf der Oberfläche der Le...

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A &quot;Patient-Like&quot; Orthotopic Syngeneic Mouse Model of Hepatocellular Carcinoma Metastasis

Die Metastasierung von Krebs ist die Hauptursache der durch Krebs verursachten Todesfälle. Wir bieten eine eingehende Beschreibung der unser Überleben Chirurgie Methodik für die Festlegung eines &quot;Patienten-like&quot; orthotopen syngenen Mausmodellsystem zur Untersuchung der Mechanismen der Metastasierung bei soliden Organtumoren.

Ein &quot;Patient-Like&quot; Orthotope Syngene Maus-Modell der Leberzellkarzinom Metastasen

The majority of cancer-related deaths are caused by the metastasis of the cancer rather than the primary tumor itself. Yet, the underlying mechanisms of ...

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JoVE Journal

Medicine

A "Patient-Like" Orthotopic Syngeneic Mouse Model of Hepatocellular Carcinoma Metastasis

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