We would like to thank Pascal DuBois for proof-reading the article. The authors would also like to thank the personnel of the Animal Facility at Hunter College of The City University of New York. This work was supported by a NIH RCMI grant to Hunter College.

Etica Dichiarazione Tutti gli studi sugli animali sono stati approvati dalla cura e l&#39;uso Comitato istituzionale animali (IACUC) di Hunter College della City University di New York. Nota: Otto topi BALB / c sono stati usati in questa procedura sperimentale. Cinque topi BALB / c sono stati impiantati con 5 x 10 6 BNL 1ME A.7R.1 topo cellule di carcinoma epatocellulare per produrre i tumori primari. Tre topi BALB / c senza implantologia sono stati utilizzati come controlli. BNL 1ME A.7R.1 è una linea di cellule murine carcinoma epatocellulare che è stato derivato per trasformazione chimica dal murino non tumorigeniche linea cellulare di epatociti BNL CL.2. BNL 1ME A.7R.1 è stato ottenuto dalla American Type Culture Collection (ATCC). 1. Pre-chirurgia <ol><li> Assicurarsi che i topi per tutti gli interventi chirurgici di sopravvivenza sono in buona salute. Per assicurare che i topi sono sani, ispezionare segni di disidratazione tenting della pelle. Non usare i topi con qualsiasi evidenza di malattia o distress in questi esperimenti. </li><li> Pesare topi per garantire che non siano sottopeso. Assicurarsi che il peso è di almeno 16-20 grammi. </li><li> Preparare 5 × 10 6 BNL 1ME A.7R.1 cellule del mouse HCC per l&#39;impianto per il mouse: <ol><li> Aspirare i media da 10 ml 60% - piatto di coltura di cellule confluenti il ​​70% delle cellule di carcinoma epatico di topo A.7R.1 BNL 1ME. Lavare due volte con 5 ml di PBS. Aggiungere 2 ml di tripsina al piatto e incubare a 37 ° C in un incubatore umidificato con aria e 5% di CO 2 per 5 min. </li><li> Successivamente, pipette 10 ml tripsinizzate cellule in un emocitometro manuale per il conteggio delle cellule al microscopio a ingrandimento di 10X. Contare il numero totale di cellule trovate nei quattro angoli piazzali e moltiplicare il fattore di diluizione per il numero totale di cellule. Poi, dividere per il numero di quadrati contati e moltiplicare per 10 6 per la concentrazione cellulare (cellule per ml). </li><li> Utilizzando il calcolo, raccogliere 5 milioni di cellule per topo in sterili1,5 ml microprovette. Etichettare provette da 1,5 ml microcentrifuga. </li></ol></li><li> Risospendere le 5 × 10 6 celle BNL 1ME A.7R.1 topo HCC in 100 ml di tampone fosfato salino (PBS). Tenere queste cellule in ghiaccio fino impianto in chirurgia. </li><li> Svolgere attività necessarie per la preparazione di topi per la chirurgia come l&#39;induzione dell&#39;anestesia e capelli clipping lontano da attrezzature e materiali sterili per evitare la contaminazione. </li><li> Un&#39;anestesia generale nei topi per inalazione di isoflurano utilizzando un vaporizzatore isoflurano con ossigeno ad un flusso costante concentrazione di 1 L per min (circa. 2,1%). Nota: Il sistema è autosufficiente, e comprende un vaporizzatore di precisione, un apporto di ossigeno e un contenitore di carbone che è collegato a un circuito di respirazione necessario per gas / anestetici scavenging. </li><li> Assicurarsi che l&#39;anestesia sia adeguata per evitare che l&#39;animale da subire dolore durante l&#39;intervento chirurgico. Eseguire toe-pinch e osservare animali per non responsiveness per confermare l&#39;anestesia. </li><li> A quel tempo, cambiare la linea di valvole, la guarnizione alla casella e aperto al cono. </li><li> Appena il mouse è anestetizzato, applicare una piccola quantità di una pomata oftalmica alle cornee come misura preventiva da essiccazione e danni. </li><li> Successivamente, spostare l&#39;animale alla zona di preparazione, con l&#39;ogiva correttamente posizionati e connessi (per anestesia di mantenimento). Preparare il sito della incisione chirurgica per la chirurgia depilatoria in questa zona di preparazione. </li><li> Assicurarsi che l&#39;area di chirurgia è in una posizione libera di ogni altra attività. </li><li> Assicurarsi che la superficie di lavoro è robusta e adeguatamente igienizzati, unsoiled e prima della chirurgia senza matasse di cavi. Posizionare un pezzo sterile lino o tray chirurgico su di esso. </li><li> Assicurarsi che il campo operatorio è disponibile solo per persone che effettuano l&#39;intervento chirurgico. Assicurarsi che la sala operatoria è pulita e spazzata con un detergente appropriato e spruzzato con un adeguato disinfectant. </li><li> Assicurarsi che sia posizionato anche lontano da porte e finestre, come le correnti d&#39;aria può diffondere la polvere che porta alla contaminazione del sito. </li><li> Eseguire l&#39;intervento chirurgico di sopravvivenza con strumenti sterili. O immergere gli strumenti in un disinfettante secondo le raccomandazioni del fabbricante o in autoclave. Utilizzare materiali sterili di base che sono pronti per l&#39;uso. </li><li> Strumenti separati in base alla funzione per aiutare a prevenire la contaminazione delle aree sterili. </li><li> Shave circa 1 pollice intorno al sito di incisione (incisione mediana) per accedere al fegato dell&#39;animale. Rimuovere il pelo dall&#39;animale lontano dal sito chirurgico. </li><li> Dopo la rasatura, strofinare la zona con un disinfettante e sapone (betadine scrub chirurgico) e lavare il disinfettante in eccesso con la soluzione di PBS sterile. Eseguire questo più volte, con l&#39;intero processo di macchia della durata di circa 5 minuti. Rimuovere e scartato i guanti usati. </li><li> In seguito, cambiare per indumenti protettivi, come SurgicAl abito, top scrub e maschera. Avanti, disinfettare le mani con soluzione macchia adeguata prima di indossare guanti chirurgici. Nota: Questo è un passo necessario per evitare spargimento e contaminare il sito chirurgico con potenziali contaminanti. </li></ol> 2. Chirurgia <ol><li> Fornire una fonte di calore esterna per calore durante l&#39;intero periodo di anestesia. L&#39;animale può verificarsi alcuni ipotermia a causa dell&#39;anestesia provoca disturbi di termoregolazione; quindi, mantenere la temperatura corporea. </li><li> Posare il mouse sulla sua schiena per tutta la chirurgia. </li><li> Fissare gli arti anteriori, arti posteriori e la coda del mouse al tavolo operatorio con pezzi di nastri chirurgici. </li><li> Fare una linea di incisione retta immediatamente inferiore al xyphisternum. </li><li> Utilizzare uno sterile divaricatore chirurgica auto-mantenimento per esporre il fegato. </li><li> Con una siringa con un ago 20G, lentamente e con attenzione iniettare 100 ml di PBS contenente 5 × 10 6 BNL 1ME A.7R.1topo cellule HCC nel lobo destro del fegato. </li><li> Dopo aver rimosso l&#39;ago, applicare un tampone di cotone sterile per almeno 1 minuto per arrestare qualsiasi sanguinamento potenziale causa dell&#39;alta vascolarizzazione del fegato. </li><li> Chiudere il tessuto sottocutaneo con una sutura assorbibile seguita da chiusura pelle con clip chirurgiche. Successivamente, pulire la ferita ancora una volta con betadine scrub. Nota: Ciò garantirà la chiusura della ferita chirurgica. </li><li> Sottocutanea dare 100 ml di soluzione fisiologica. </li></ol> 3. Post-chirurgia <ol><li> Subito dopo l&#39;intervento chirurgico, trasferire il mouse in una gabbia pulita con una carta d&#39;identità post-operatorio per notificare custodi della condizione del mouse. Fornire cibo e acqua. Nota: Nella nostra esperienza, un mouse che ha appena subito un intervento chirurgico se la passeranno meglio se alloggiati solo con cibo umido e acqua per il periodo di 24 ore dopo il primo intervento chirurgico. </li><li> Tenere il caldo animale con una lampada di calore che genera calore non supera 38 ° C. USE un termometro per misurare la temperatura fino a quando il mouse è completamente recuperato. </li><li> Casa l&#39;animale in una gabbia, preferibilmente con biancheria da letto di carta per assicurare il comfort. </li><li> Dopo il recupero iniziale, monitorare l&#39;animale per segni di disagio, sanguinamento, dolore e angoscia. Dare buprenorfina (0,05 -0.1 mg / kg) per alleviare il dolore. Strettamente monitorare l&#39;attività, comportamento e l&#39;aspetto, così come l&#39;acqua e il consumo di cibo per circa 2 ore. Se ambulatoriale, spostare l&#39;animale torna alla zona per regolare un alloggio normale di topi e di continuare a monitorare a intervalli 6-12 hr per la post-operatorio 24 ore. Eseguire un controllo del peso se lo si desidera. </li><li> Tuttavia, se l&#39;animale sta avendo problemi recuperare, adottare le adeguate misure terapeutiche di supporto. Se i topi sono in grado di recuperare, umanamente eutanasia topi via di CO 2 asfissia e dislocazione cervicale. Seguire le linee guida istituzionali approvate per l&#39;eutanasia. </li><li> Post-operatorio, verificare la presenza di segni clinici di HCC che di solito è observable come significativa riduzione del body condition score. Nota: A questo punto, un tumore primario ha probabilmente sviluppato nel fegato e depositi metastatici hanno probabilmente sviluppata nei polmoni. </li><li> A questo punto, sacrifica tutti i topi (sperimentale e di controllo) coinvolti nella sperimentazione per eutanasia umana. Sottoporre i topi all&#39;anidride carbonica asfissia: molto lentamente rilasciare biossido di carbonio nella camera per un periodo di 5 -10 min. Ciò causerà arresto respiratorio. </li></ol>

<ol>
	<li>Sheng, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Capture,+release+and+culture+of+circulating+tumor+cells+from+pancreatic+cancer+patients+using+an+enhanced+mixing+chip.">Capture, release and culture of circulating tumor cells from pancreatic cancer patients using an enhanced mixing chip.</a> Lab on a Chip. 14, 89-98 (2014).</li><li>Ogunwobi, O. O., Liu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+and+prognostic+importance+of+epithelial-mesenchymal+transition+in+liver+cancers:+insights+from+experimental+models.">Therapeutic and prognostic importance of epithelial-mesenchymal transition in liver cancers: insights from experimental models.</a> Critical Reviews in Oncology/Hematology. 83, 319-328 (2012).</li><li>Ogunwobi, O. O., Puszyk, W., Dong, H. J., Liu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epigenetic+upregulation+of+HGF+and+c-Met+drives+metastasis+in+hepatocellular+carcinoma.">Epigenetic upregulation of HGF and c-Met drives metastasis in hepatocellular carcinoma.</a> PloS One. 8, e63765 (2013).</li><li>Ogunwobi, O. O., Liu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatocyte+growth+factor+upregulation+promotes+carcinogenesis+and+epithelial-mesenchymal+transition+in+hepatocellular+carcinoma+via+Akt+and+COX-2+pathways.">Hepatocyte growth factor upregulation promotes carcinogenesis and epithelial-mesenchymal transition in hepatocellular carcinoma via Akt and COX-2 pathways.</a> Clinical and Experimental Metastasis. 28, 721-731 (2011).</li><li>Fujiwara, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+animal+model+for+in+vivo+study+of+liver+cancer+metastasis.">A novel animal model for in vivo study of liver cancer metastasis.</a> World Journal of Gastroenterology : WJG. 18, 3875-3882 (2012).</li><li>Wirtz, D., Konstantopoulos, K., Searson, P. 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M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+tumor+cell+isolation+and+diagnostics:+toward+routine+clinical+use.">Circulating tumor cell isolation and diagnostics: toward routine clinical use.</a> Cancer Research. 71, 5955-5960 (2011).</li><li>Saad, F., Pantel, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+current+role+of+circulating+tumor+cells+in+the+diagnosis+and+management+of+bone+metastases+in+advanced+prostate+cancer.">The current role of circulating tumor cells in the diagnosis and management of bone metastases in advanced prostate cancer.</a> Future Oncology. 8, 321-331 (2012).</li></ol>

The authors declare that they have no competing financial interests.

In questo articolo viene fornita una descrizione approfondita del metodo che è stato recentemente riportato da Ogunwobi e colleghi di successo creazione di un modello di topo singenici ortotopico di HCC metastasi (Figura 2) 3. Il tasso di tumori per questa procedura è generalmente elevata. Abbiamo già osservato un tasso di tumore al 100% 3. Tuttavia, il tasso di utilizzo può essere variabile a seconda della competenza del ricercatore. In un recente esperimento condotto da un nu...

Hepatocellular carcinoma (HCC) is one of the most lethal cancers, with poor prognosis and low life expectancy. Nearly all cancer-related deaths are due to the metastatic spread of the disease from the originating organ to additional distant organs2-6.HCC progression is a complex process. Therefore, being able to model the tumor microenvironment that is naturally found in metastatic HCC in animal models can prove to be a successful and useful way to reveal relevant mechanisms in humans.7Unfortunately, the mechanisms of cancer metastasis are still largely unclear. Therefore, there is a need to establish animal models that will enable us to elucidate the underlying molecular mechanisms of metastases of cancers such as HCC3,5.
Mouse model systems are a very useful approach for delineating mechanisms and evaluating novel strategies for treatment of metastatic human cancers5,8. The various mouse model systems that presently exist are a testament to efforts of researchers to correctly depict the complexity of the disease5,8,9.
Ogunwobi and colleagues recently used a survival surgical approach to demonstrate establishment of a novel orthotopic syngeneic mouse model for the study of metastasis in HCC3. Their work established a &#8220;patient-like&#8221; mouse model that recapitulates features of aggressive and metastatic HCCs3. They further demonstrated that this mouse model system can be used to study the biology of circulating tumor cells, and that this holds potential for gaining novel insights into the mechanisms of cancer metastasis3.
The aim of this paper is to describe in detail the methodology used in establishing this &#8220;patient-like&#8221; orthotopic syngeneic mouse model of HCC metastasis3. The methodology of how to implant BNL 1ME A.7R.1 mouse HCC cells directly into the liver (the organ of origin) of the inbred wild-type immune competent laboratory mouse strain, BALB/c3 using survival surgery will be described. Unlike other mouse xenograft tumor models where human tumor cells are implanted into immune deficient mice, this system is syngeneic and is, therefore, suitable for studying the role of the immune system in tumor metastasis3,5,8. This approach will likely gain widespread use for studying the mechanisms of metastasis in solid organ cancers.

<table border="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Micro Dissecting Tweezer&#160;</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>(RS-5040)</td>
			<td>Tip .20 x .12mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graefe Micro Dissecting Forceps, serrated curved tip</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>(RS-5111)</td>
			<td>1 X 2 teeth, curved tip width 0.6mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Dissecting Retractor-Agricola (3 by 3 prongs)</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>(RS-6501)</td>
			<td>Blunt 3 X 3 prongs, depth 4mm, spread 25mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Dissecting Retractor-Goldstein (3 by 3 prongs)</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>(RS-6503)</td>
			<td>Blunt, 3 X 3 prongs, depth 4mm, spread 19mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Jameson Caliper (Measures tumors)</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>(RS-6466)</td>
			<td>80mm/3 inch scale, chrome plated&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Dissecting Scissors, large ring sissors, straight and sharp</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>(RS-5852)</td>
			<td>23mm blades, length 4 inches, flat shanks and large rings</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel with blades, for delicate dissecting procedures</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>(RS-9861-36)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel handle&#160;</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>(RS-9884)</td>
			<td>Solid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Littauer Stitch Sissors</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>(RS-7074)</td>
			<td>Length 4.5 inches</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brown needle holder, for easy suture tying</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>(RS-7960)</td>
			<td>Convex jaw, fine serrations</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reflex 7MM wound clips with reflex 7 clip applier</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>(RS-9262)</td>
			<td>safe, secure alternative method of wound closure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Instrument tray and lid</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RT-1350S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini-clipper with detachable blade</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>(RS-5903)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Germinator 500 (the Germ Terminator) Dry Sterilizer</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>Ds-400, Ds-401, DS-501</td>
			<td>For fast decontamination of micro-dissecting instruments.&#160;&#160; Instruments decontaminate within 15 seconds.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microinjection needles</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BD305125</td>
			<td>25G Needle</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a "patient-like" orthotopic syngeneic mouse model of hepatocellular carcinoma metastasis

The majority of cancer-related deaths are caused by the metastasis of the cancer rather than the primary tumor itself. Yet, the underlying mechanisms of cancer metastasis are still unclear. Animal models are essential for elucidating the mechanisms and for evaluating novel strategies for the treatment of metastatic cancers. Here, an in-depth description of a &#8220;patient-like&#8221; orthotopic syngeneic mouse model for exploring the mechanisms of metastasis of solid organ tumors is provided. The survival surgical implantation of BNL 1ME A.7R.1 mouse hepatocellular carcinoma cells directly into the liver (the organ of origin) of the inbred wild-type immune competent laboratory mouse strain, BALB/c is described. The success and reproducibility of this methodology recommends it for widespread use in elucidating the biological mechanisms of solid organ cancer metastasis.

Il fegato dei topi Balb / c sono stati impiantati con 5 × 10 6 BNL 1ME A.7R.1 cellule del mouse HCC. L&#39;evidenza clinica di sviluppo HCC era osservabile 63 giorni dopo l&#39;intervento. Di conseguenza, i topi sono stati umanamente eutanasia. Necroscopia è stata effettuata su topi eutanasia. I polmoni e il fegato sono stati asportati e un esame attento lordo è stata effettuata per identificare i tumori macroscopiche. In un mouse, un tumore superficiale è stata osservata sulla superficie del fegato con q...

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A &quot;Patient-Like&quot; Orthotopic Syngeneic Mouse Model of Hepatocellular Carcinoma Metastasis

La diffusione metastatica del cancro è la principale causa di decessi correlati al cancro. Forniamo una descrizione approfondita della nostra metodologia chirurgia sopravvivenza per stabilire un modello di sistema ortotopico singenici mouse &quot;paziente-tipo&quot; per lo studio dei meccanismi di metastatizzazione dei tumori di organi solidi.

A &quot;paziente-Like&quot; ortotopico Singenico modello murino della carcinoma epatocellulare Metastasi

The majority of cancer-related deaths are caused by the metastasis of the cancer rather than the primary tumor itself. Yet, the underlying mechanisms of ...

a-patient-like-orthotopic-syngeneic-mouse-model-hepatocellular

Research

JoVE Journal

Medicine

A "Patient-Like" Orthotopic Syngeneic Mouse Model of Hepatocellular Carcinoma Metastasis

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