Diese Arbeit wurde von der schwedischen Research Council unterstützt.

Alle Vorgänge werden in Übereinstimmung mit dem NIH Leitfaden für Pflege und Verwendung von Labortieren durchgeführt. 1. Tierpflege und Wohnen <ol><li> Bei der Ankunft in der Kolonie, Wiegen Haus männliche Wistar-Ratten von 200 bis 225 g bei der Ankunft in Paaren in einer Temperatur (21 ° C) und Feuchtigkeit kontrollierten Umgebung mit umgekehrtem 12 h Licht-Dunkel-Zyklus. Hinweis: Je nach dem Grundprinzip der Experimente, Ratten können einzeln untergebracht werden. </li><li> Lassen Sie die Ratten auf das Vivarium und dem Lichtzyklus für mindestens eine Woche zu akklimatisieren, bevor ein Experiment starten und verarbeiten sie täglich. Wiegen Sie die Tiere einmal wöchentlich. </li><li> Geben Ratten freien Zugang zum Chow - Chow und Leitungswasser für die Dauer des Experiments (Wasserentzug ist nicht notwendig , zu initiieren 12 reagiert). Führen Sie alle Verhaltenstests während der Dunkelphase des Hell-Dunkel-Zyklus in einem dunklen Testraum. Hinweis: Obwohl routinemäßig wir jungen erwachsenen männlichen Wistar-Ratten (postnatalen Tag 62 bis 65) zu verwenden, um dieses protokoll kann theoretisch für die Untersuchung von anderen Stämmen von Ratten geeignet sein, sowie Geschlecht und / oder Altersunterschiede. </li></ol> 2. Operanten Ausbildung <ol><li> Führen Sie alle Verhaltenstraining und Tests in identischen operant Messkammern 30,5 × 29,2 × 24,1 cm und enthält Gitterböden und Abfall Pfannen mit Bettwäsche ausgekleidet (geändert in zwischen Tieren Geruch Cues zu reduzieren), untergebracht in schalldämpfenden Kabinen mit Abluftventilatoren für die Belüftung ausgestattet . Hinweis: Die Ratten werden trainiert von operant Anlage von Tag 1 der Ausbildung (eine Antwort auf einen Hebel ist notwendig, eine Bestärkung zu erhalten) zwischen + 1 h und + 8 h des Dunkel-Zyklus. Es gibt keine vorge Exposition gegenüber Alkohol, noch Nahrung oder Flüssigkeit Formgebung vor Alkohol Ausbildung. </li><li> Anlegen jede operant Kammer mit Reizlichter, Spritzenpumpen und zwei versenkbaren Hebel, der seitlich mit einem Flüssigkeitsschalenaufnahme. Interface-Kammern und Steuerung durch einen Computer die entsprechende Software. Hinweis:Die meisten Anbieter werden Selbstverwaltung Pakete bieten alle notwendigen Komponenten sowie Software und Schnittstellen enthält erforderlich sind, um die Kammern zu steuern. </li><li> Schreibe eine operant Anlage Programm, das den Festverhältnis (FR) Plan von 20% Ethanol Verstärkungs einleitet (an operant Plan, in dem eine Reaktion erst nach einer bestimmten Anzahl von Antworten verstärkt ist) gemäß den Anweisungen des Herstellers. Zum Beispiel in einem Fest Verhältnis 1, haben Ratten eine Reaktion, um eine Bestärkung zu erhalten (siehe Ergänzenden Code Abschnitt Dateien für ein Beispiel eines FR1-Programm). Führen Sie die folgenden Befehle ein. <ol><li> Erstrecken sich zwei Hebel um den Beginn der Sitzung zu markieren und Alkohol Verfügbarkeit zu signalisieren. Hinweis: Ein Hebel drücken Sie auf den Hebel mit Ethanol (aktiv) verbunden sind durch die Lieferung von einem Volumen von 100 &amp; mgr; l 20% Ethanol in Wasser in dem benachbarten belohnt trinkt gut und initiiert eine gleichzeitige 5-s Zeitlimit durch die signalisierte Beleuchtung dercue-Licht über dem Hebel. Der Cue-Licht wird am Tag 1 eingeführt des Trainings. </li><li> Während der Zeitperiode, reagiert Rekord, obwohl es keine geplanten Folgen hat. Nehmen Sie Antworten auf der anderen Hebel (inaktiv), obwohl sie nie Verhaltenskonsequenzen haben. Hinweis: Der inaktive Hebel als Kontrolle dient nicht-spezifische Verhalten zu beurteilen. </li><li> Notieren Sie die Anzahl der Antworten auf den aktiven Hebel (Ansprechrate) und die Anzahl der 20% Ethanol Belohnungen verdient. </li><li> Nach 30 Minuten vergangen sind, ziehen sich die beiden Hebel am Ende der Sitzung zu signalisieren, und das Ende des Alkohol Verfügbarkeit zu signalisieren. </li><li> Speichern Sie und alle Daten zu archivieren. </li></ol></li><li> Vor dem Training beginnen, überprüfen Sie die einwandfreie Funktion aller Geräte in jeder operant Kammer (einziehbare Hebel, Flüssigkeitsspender). </li><li> Bereiten Sie die 20% v / v Ethanol-Lösung von 190 Proof (95%) Ethanol in Leitungswasser verdünnt. Hinweis: Ethanol-Lösung kann bei Raumtemperatur aufbewahrt werden. Abhängignach Hersteller Lager Ethanollösungen bis zu 99,98% betragen. Beachten Sie auch, dass, während in den meisten veröffentlichten Manuskripten, Ethanolkonzentrationen in der Regel als Volumen / Volumen präsentiert werden, einige sie als Gewicht / Volumen darstellen können. </li><li> Füllen Sie die Spritze mit der 20% igen Ethanollösung und stellen Sie sicher, dass es keine Lecks oder Luftblasen in den Infusionsleitungen sind. drücken Sie manuell ein kleines Volumen von Ethanol durch die Infusionsleitungen, um sicherzustellen, dass Ethanol korrekt in die Aufnahme aus dem ersten verstärkten Antwort geliefert werden. Trocknen Sie die Behälter mit einem Papiertuch und stellen Sie sicher, dass es vor dem Start der Sitzung leer ist. </li><li> Laden Sie die Software, die die FR Zeitplan von 20% Ethanol Verstärkung steuert </li><li> Zug operant- und Drogen-naive Ratten unter einem FR1 Zeitplan selbst zu verabreichen 20% Ethanol ohne Wasserentzug während 30 Minuten-Sitzungen. <ol><li> Transportieren Sie die Ratten aus dem Vivarium zu den Testraum einen Transportkäfig mit. </li><li> Weisen Sie jede Ratte zu einer Kammer.Nehmen Sie jede einzelne Ratte aus dem Transportkäfig und legte sie in der zugeordneten Selbstverwaltung Kammer. </li><li> Versuchen Sie, die Bedingungen des Experiments konsequent jeden Tag zu halten. Daher testen immer Ratten in der gleichen Selbstverwaltung Kammer bei etwa zur gleichen Zeit jeden Tag. </li><li> Starten Sie die Software, die die FR1 Zeitplan von 20% Ethanol Verstärkung initiiert. </li><li> Am Ende der Sitzung, entfernen Sie die Ratten aus den Selbstverwaltung Kammern und wieder auf das Vivarium. </li><li> Um zu bestätigen, um manuell, dass die Alkohollösung von den Tieren verzehrt wird, verwenden Sie ein Papiertuch und prüfen, ob der Behälter getrocknet wird. Alternativ können Sie eine 1 oder 2-ml-Spritze verwenden und die Flüssigkeit sammeln sich in dem Behälter verbleibende das Volumen zu schätzen, die nicht verbraucht wird. Anmerkung: Für eine genauere Messung (aber auch teurer), ist es möglich, jede Kammer mit einem lickometer System zum Flüssigkeitsschalenaufnahme verbunden auszustatten, die eine genaue Zählung der Lick ermöglichts durch die Ratten während der Selbstverwaltung Sitzung erzeugt. </li><li> Reinigen Sie die Wände und Gitterboden jeder Kammer mit einem Flächendesinfektionsmittel. </li><li> die Infusionsleitungen nach dem Gebrauch aufrechtzuerhalten, indem sie mit einer 70% igen Ethanollösung reinigen. Wenn sie nicht in Gebrauch ist, legen Sie die Kappe Schimmel und Staub zu vermeiden. </li></ol></li><li> Nach jeder Sitzung, zu sammeln und die gewonnenen Daten zu analysieren. Insbesondere die mittlere Zahl der aktiven Hebel drückt, die mittlere Anzahl von Alkohol erhalten Belohnungen sowie die mittlere Anzahl von inaktiven Hebelpressen berechnen. Anmerkung: In den meisten Papiere, wird der Alkoholkonsum auch als Ethanolaufnahme in g / kg (Körpergewicht) dargestellt. Ethanolaufnahme kann mit folgender Formel berechnet werden: <img alt="Equation1" src="/files/ftp_upload/53305/53305equation1.jpg" /> Mit Volumen verbraucht (ml) - Zahl der Belohnungen ± Einheitsvolumen / Belohnung und Dichte von Ethanol bei Raumtemperatur verdient - 0,789 g / ml. Wenn beispielsweise eine Ratte mit einem Gewicht von 400 g hat 20 rewards von 20% v / v Ethanol-Lösung: <img alt="Equation2" src="/files/ftp_upload/53305/53305equation2.jpg" /></li><li> Durchführen von Sitzungen 5/6 Tage pro Woche bis zur Stabilisierung der Leistung (definiert als mindestens 15 Sitzungen und keine Veränderung mehr als 15% in der Gesamtzahl der Belohnungen während der letzten drei Sitzungen verdient). Hinweis: Wenn Ratten eine stabile Basislinie auf FR1, die operanten Konditionierung Programm geändert werden können erreicht haben gemäß den Anweisungen des Herstellers, die Anzahl der Antworten zu erhöhen, notwendig, einen Alkohol Belohnung zu erhalten. Der Festverhältnis kann zum Beispiel zu FR2 oder FR3 erhöht werden, um ein versehentliches Verstärkung zu minimieren. </li><li> Messen Sie Blut Ethanolkonzentrationen: <ol><li> Um zu bestätigen, dass die erhaltenen Belohnungen in einer Selbstverwaltung Sitzung, die von den Ratten konsumiert werden, messen die Blutethanolkonzentrationen folgende Selbstverwaltung. Sobald Ratten eine stabile Basislinie erreicht haben, sammeln Blut aus der laterale Schwanzvene unmittelbar nachdie Sitzung. Legen Sie eine 23 G-Nadel in das Blutgefäß und sammeln 50 &amp; mgr; l Blutproben unter Verwendung eines Kapillarröhrchens. </li><li> Übertragen Sie die 50 &amp; mgr; l Blutproben zu 10 ml Headspace-Flaschen und 50 &amp; mgr; l von 1: 1000 Isopropylalkohol als interner Standard. Bereiten Sie eine Standardkurve 10 bis 300 mg / dl aus Ethanol-Standards. Prozessproben mit einem Headspace - Proben mit einer Chromatographiesäule 13 entsprechend den Herstellereinstellungen. </li></ol></li><li> Progressive-Verhältnis <ol><li> Verwenden Sie progressive Verhältnis (PR) plant die Motivation der Tiere zu beurteilen , eine Belohnung 14 zu konsumieren. PR ist ein operant Plan, in dem die Anzahl der Antworten eine Ansporner zu erhalten allmählich erhöht wird (in anderen Worten, haben Ratten härter für jede aufeinanderfolgende Belohnung zu arbeiten). Hinweis: Im Gegensatz zu Sitzungen FR, eine PR-Sitzung nicht abgelaufen ist und wird nur einmal 30 Minuten ohne ein abgeschlossenes Verhältnis Ablauf gekündigt werden. <ol><li> Legen Ratten in ihren zugewiesenen operant Boxen und ermöglichensie für 20% Ethanol unter einer PR - Verstärkungsplan zu reagieren: Halten Sie alle experimentellen Bedingungen identisch mit denen in der FR Zeitplan (siehe Schritt 2.3), mit Ausnahme erhöhen die Antwortpflicht oder Kosten innerhalb-Sitzung (dh die Anzahl der Hebelpressen erforderlich, auf dem aktiven Hebel einen einzigen ethanol reward) gemäß der folgenden Formel zu erhalten: 1, 2, 3, 4, 6, 8, 10, 12, 16, 20, 24, 28, 32 ... Hinweis: ein Beispiel für die PR-Programm wird in den Ergänzenden Code Abschnitt Dateien zur Verfügung gestellt. </li><li> Beenden Sie die PR-Sitzung einmal 30 Minuten ohne Belohnung abgelaufen ist. Hinweis: Der Haltepunkt als das letzte abgeschlossene Antwort Anforderung während der PR-Sitzung definiert ist. </li></ol></li></ol></li></ol> 3. Prüfung der Vorhersagevalidität eines Operanten Modell von Selbstverabreichung von Alkohol Hinweis: Wenn Ratten eine stabile Selbstverwaltung Basis erworben haben (siehe Schritt 2) ist es möglich, die prognostische Validität des Modells zur Beurteilung vonPrüfung der Wirksamkeit von Naltrexon, ein zur Zeit der FDA zugelassene Medikament für Alkoholabhängigkeit 20% Ethanol Selbstverwaltung zu reduzieren. Wir empfehlen Ihnen, diese Prüfung auf dem höchsten FR während des Trainings (FR2) erreicht, wenn Antworten zuverlässig hoch sind. Sobald prognostische Validität hergestellt ist, kann das Modell verwendet werden, um neue Wirkstoffkandidaten zu bewerten. <ol><li> Vor dem Testtag geben Ratten, welche subkutane Kochsalzinjektionen 30 Minuten vor der Selbstverwaltung Sitzungen, um sie während mindestens zwei aufeinander folgenden Selbstverwaltung Sitzungen oder bis zu reagieren für Ethanol auf die Injektion eingewöhnen wird nicht durch die Saline-Injektionen betroffen (wie keine Änderung definiert mehr als 15% in der Gesamtzahl der Belohnungen während der letzten 2 Sitzungen verdient). </li><li> Man löst Naltrexon in Kochsalzlösung und der pH-Wert der Neutralität zu erreichen, die Injektionen an die Tiere zu erleichtern. Spritzen Sie das Medikament mit einem Volumen von 1,0 ml / kg 30 min vor einer Sitzung, die mittels subkutaner Verabreichung verwendet wird. Hinweis: Der Literature liefert gute Hinweise für eine Dosis Wahl zwischen den Bereichen von 0,1 - 1 mg / kg, so 0,1, 0,3 und 1 mg / kg in diesem Protokoll verwendet werden. Hinweis: Forschung Verwendung beider subkutane und intraperitoneale Verabreichungswege für Naltrexon gibt an , obwohl ihre Wirksamkeit bei subkutaner Injektion ist 30-fach stärker , dass intraperitoneale Injektionen 15 unterscheiden. Aus diesem Grund empfehlen wir , den subkutanen Weg als die Verwendung dieser Route für die Injektion von Naltrexon von verschiedenen Laboratorien in einem Konzentrationsbereich zwischen 0,1 und 1 mg / kg 12,15,16 validiert und repliziert wurde mit. </li><li> Während Testtag injizieren Ratten in einem ausgewogenen / zufälliger Reihenfolge in einem Zwischensubjekt Design über einen der vier Naltrexon Dosiervorgänge (0, 0,1, 0,3 und 1 mg / kg) 30 Minuten vor der Selbstverwaltung Sitzung. </li><li> Zwischen jedem Dosierungszyklus erlauben Ratten das Medikament mit einem Minimum von zwei aufeinander folgenden Selbstverwaltung Sitzungen der Auswaschung oder bis zu reagieren fürEthanol ist zurück zum Ausgangswert. Hinweis: Im Ergebnis am Ende des Tests werden alle Ratten, die mit jeder der vier Dosen injiziert wurden. </li><li> Nach dieser Phase, wählen Sie die effizienteste Dosis (1 mg / kg) und testen Sie die Wirkung von Naltrexon auf die Motivation der Tiere Alkohol mit einem progressiven Verhältnis Zeitplan zu verbrauchen (siehe Schritt 2.12). </li></ol>

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W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Taste+reactivity+in+alcohol+preferring+and+nonpreferring+rats.">Taste reactivity in alcohol preferring and nonpreferring rats.</a> Alcoholism, clinical and experimental research. 14, 721-727 (1990).</li></ol>

Die Autoren haben nichts zu offenbaren.

Mit diesem Protokoll präsentieren wir eine neue Methode zu erwerben und zu pflegen stabile orale Selbstverabreichung von 20% Ethanol bei Ratten, die, im Gegensatz zu den klassischen Modellen von Ethanol Selbstverwaltung, nicht die Verwendung von Wasserentzug erfordern, erweiterten Zugang zur Ausbildung oder Saccharin / Saccharose - Fading 12. Darüber hinaus Naltrexon, ein zur Zeit der FDA zugelassene Medikament für Alkoholabhängigkeit, nimmt erfolgreich Selbstverabreichung von Alkohol und die Motivation A...

Die Entwicklung von Tiermodellen, die Verstärkungswirkungen von Medikamenten zu untersuchen hat ein wichtiges Instrument zu studieren menschliche Drogensucht erwiesen. Genauer gesagt ist operant Selbstverabreichung ein weit Verhaltensmodell verwendet, das für die Beurteilung der positiven Verstärkungseffekte einer oral verbrauchten Ethanollösung eines der wirksamsten Mittel ist. Ein frühes Problem mit einem solchen Modell zu entwickeln war der primäre aversiven Geschmack von hohen Konzentrationen von Ethanol für die meisten Nagetiere, ein Phänomen , das auch bei Menschen mit wenig oder keine Erfahrung mit Alkohol 1 geteilt wird. Ein Standardprotokoll, diese Barriere zu überwinden, erfordert Wasserentzug und / oder Saccharin oder Saccharose Verblassen für den Erwerb und die Aufrechterhaltung der Selbstverwaltung. Jedoch sind diese beiden Ansätze nicht vorteilhaft. Sie erfordern lange Ausbildungszeiten einfach zu initiieren für Ethanol reagiert und eine relative Erfolgsrate der Akquisition erhalten. Die Verwendung von Süßstoffen führt auch eine mögliche Verzerrung indie Interpretation der Selbstverwaltungsdaten. Diese Einschränkungen gelten nicht für das folgende Protokoll. Kurz gesagt, haben 2 Samson und Kollegen gezeigt , dass Ethanol in einer süßen Lösung von 20% Saccharose gelöst und dann wird die Süße über 4 Wochen Training Ausblendung erforderlich für 10% Ethanol zu initiieren in Wasser reagiert. Darüber hinaus wird zuverlässig Ethanolaufnahme üblicherweise in 6 bis 8 Wochen 1-3 erreicht. Dieser Ansatz ist sehr problematisch. Erstens erfordert es längere Zeit der Ausbildung, bevor Ermittler beginnen kann Ethanol Selbstverwaltung zu messen. Im Gegensatz dazu erfordert intravenöse Selbstverabreichung von Kokain oder Heroin 0 - 1 in Tagen vor der Droge Training auf einem Lebensmittel liefernde Hebel in Lebensmitteln beschränkt Tiere und stabil für Arzneimittel reagiert wird oft in 10 erreicht - 12 Tage 4,5. Eine weitere Einschränkung dieses Verfahrens ist die Tatsache, dass Saccharin und Saccharose Ratten sehr lohnend sind und Gehirnaktivierungsmuster s entlockenimilar zu Drogenmissbrauch und damit das Potenzial für verwechselt in Ethanol Selbstverwaltung Einführung Studien 6-9. Schließlich Ratten Erwerb Selbstverwaltung einer Ethanollösung , diese Methode zeigen Variabilität in Erwerb und Ansprechrate mit 1,10, mit einem erheblichen Anteil an Ratten konsequent aus Experimenten ausgeschlossen wegen erfolgloser Erwerb und / oder unzureichende Ansprechrate. Im Gegensatz dazu mit diesem Protokoll stellen wir eine einfache, aber effiziente Methode zur Erfassung und Pflege der oralen Selbstverabreichung von 20% Ethanol in Wasser-Lösung, die Wasserentzug, Saccharose / Saccharin Verblassen oder erweiterten Zugang Training nicht erforderlich machen. Eine aktuelle Untersuchung ergab, dass die Selbstverwaltung für die orale Ethanol zeigt eine umgekehrte U-förmige Dosis-Wirkungs-Kurve mit dem höchsten Alkoholaufnahme bei Selbstverabreichung bei einer 20% igen Ethanolkonzentration und damit eine rationale Bereitstellung von 20% Ethanollösung in unserem Experim Auswahlental Design 11.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="577">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Extra Tall MDF Sound Attenuating Cubicle, Interior: 22&#34;W x 22&#34;H x 16&#34;D</td>
			<td style="width:75px;">Med Associates Inc.</td>
			<td style="width:119px;">ENV-018MD</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Extra Tall Modular Test Chamber with modified Top, Waste Pan and Photobeam</td>
			<td style="width:75px;">Med Associates Inc.</td>
			<td style="width:119px;">ENV-007CT-PH</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Stainless Steel Grid Floor for Rat or Small Primate</td>
			<td style="width:75px;">Med Associates Inc.</td>
			<td style="width:119px;">ENV-005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Retractable Lever</td>
			<td style="width:75px;">Med Associates Inc.</td>
			<td style="width:119px;">ENV-112CM</td>
			<td>2 by SA chambers</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Stimulus Light, 1&#34; White Lens, Mounted on Modular Panel</td>
			<td style="width:75px;">Med Associates Inc.</td>
			<td style="width:119px;">ENV-221M</td>
			<td>2 by SA chambers</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Dual Cup Liquid Receptacle with 18ga Stainless Steel Pipes</td>
			<td style="width:75px;">Med Associates Inc.</td>
			<td>ENV-200R3AM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Single Speed Syringe Pump, 3.33RPM</td>
			<td style="width:75px;">Med Associates Inc.</td>
			<td style="width:119px;">PHM-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;">Liquid Delivery Kit</td>
			<td style="width:75px;">Med Associates Inc.</td>
			<td>PHM-122-18</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">SmartCtrl 8 Input, / 16 Output Package</td>
			<td style="width:75px;">Med Associates Inc.</td>
			<td style="width:119px;">DIG-716P2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;">MED-PC software</td>
			<td style="width:75px;">Med Associates Inc.</td>
			<td>SOF-735</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">http://www.mednr.com/</td>
			<td style="width:75px;">Med Associates Inc.</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>A website that is open-source and has been created to offer researchers a place to exchange MEDState Notation code</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Kendall Monoject 20cc Syringes, Regular Luer Tip</td>
			<td style="width:75px;">VWR International</td>
			<td>MJ8881-520657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Ethanol, Pure, 190 Proof (95%), USP, KOPTEC</td>
			<td style="width:75px;">Decon Labs</td>
			<td>2801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">0.9% Sodium Chloride Injection, USP</td>
			<td style="width:75px;">Hospira</td>
			<td>0409-4888-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Naltrexone hydrochloride</td>
			<td style="width:75px;">Sigma Aldrich</td>
			<td>N3136-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">23 G BD PrecisionGlide Needles</td>
			<td style="width:75px;">BD</td>
			<td>305145</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Minivette POCT 50 &#181;l, K3 EDTA</td>
			<td style="width:75px;">Sarstedt</td>
			<td>17.2113.150</td>
			<td>For capillary blood collection&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a method for evaluating the reinforcing properties of ethanol in rats without water deprivation, saccharin fading or extended access training

Operant orale Selbstverwaltung Methoden werden häufig zur Untersuchung der verstärkenden Eigenschaften von Ethanol bei Tieren verwendet. Allerdings erfordern die Standardmethoden Saccharin / Saccharose-Fading, Wasserentzug und / oder erweiterte Ausbildung operant reagiert bei Ratten zu initiieren. Dieses Dokument beschreibt ein neuartiges und effizientes Verfahren, um schnell zu reagieren operant für ethanol initiieren, die für Experimentatoren bequem ist und keine Wasserentzug oder Saccharin / Saccharose-Fading erfordern, wodurch das Potential der Verwendung confound Süßstoffe in Ethanol operant Selbstverabreichung Studien eliminieren. Bei diesem Verfahren wird typischerweise Wistar Ratten erwerben und Selbstverabreichung einer 20% igen Ethanollösung in weniger als zwei Wochen Training erhalten. Außerdem Blutethanolkonzentrationen und Belohnungen sind positiv für eine 30 min Selbstverwaltung Sitzung korreliert. Darüber hinaus Naltrexon, ein von der FDA zugelassenes Medikament für Alkoholabhängigkeit, die Ethanol Selbstverwaltung zu unterdrücken, hat sich gezeigt,in Nagetieren, nimmt dosisabhängig Alkoholkonsum und Motivations Alkohol für Ratten Selbstverabreichung von 20% Ethanol zu verbrauchen, wodurch die Verwendung dieser neuen Methode Validierung der verstärkenden Eigenschaften von Alkohol bei Ratten zu untersuchen.

Abbildung 1 zeigt die repräsentative Selbstverwaltung Verhalten von operant- und drogen naive Wistar - Ratten (acht verschiedene Kohorten auf insgesamt 239 Ratten in Höhe) trainiert auf einem FR1 Zeitplan selbst zu verabreichen 20% Ethanol ohne Wasserentzug oder Saccharin / Saccharose - Fading während 30-Minuten-Sitzungen. Mit diesem Protokoll Ratten initiieren Hebel drücken eine Ethanol Belohnung sehr schnell zu erhalten, bereits mehr als 10 Belohnungen zu erhalten ...

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A Method for Evaluating the Reinforcing Properties of Ethanol in Rats without Water Deprivation, Saccharin Fading or Extended Access Training

Dieses Protokoll beschreibt eine neue und effiziente Methode, um schnell reagieren operant für Ethanol bei Ratten, die, im Gegensatz zu Standardverfahren einzuleiten, nicht Wasserentzug oder Saccharin / Saccharose erfordern Verblassen reagieren zu initiieren.

Eine Methode zur Bewertung der verstärkenden Eigenschaften von Ethanol bei Ratten ohne Wasser Deprivation, Saccharin Verblassen oder Extended Access Schulung

Operant oral self-administration methods are commonly used to study the reinforcing properties of ethanol in animals. However, the standard methods ...

a-method-for-evaluating-reinforcing-properties-ethanol-rats-without

Research

JoVE Journal

Behavior

9.5K Aufrufe.  Linköping University.  Dieses Protokoll beschreibt eine neue und effiziente Methode, um schnell reagieren operant für Ethanol bei Ratten, die, im Gegensatz zu Standardverfahren einzuleiten, nicht Wasserentzug oder Saccharin / Saccharose erfordern Verblassen reagieren zu initiieren. 

Serie: A Method for Evaluating the Reinforcing Properties of Ethanol in Rats without Water Deprivation, Saccharin Fading or Extended Access Training

A Procedure to Study the Effect of Prolonged Food Restriction on Heroin Seeking in Abstinent Rats

In human drug addicts, exposure to drug-associated cues or environments that were previously associated with drug taking can trigger relapse during abstinence. Moreover, various environmental challenges can exacerbate this effect, as well as increase ongoing drug intake.
The procedure we describe here highlights the impact of a common environmental challenge, food restriction, on drug craving that is expressed as an augmentation of drug seeking in abstinent rats.
Rats are implanted with chronic intravenous i.v. catheters, and then trained to press a lever for i.v. heroin over a period of 10-12 days. Following the heroin self-administration phase the rats are removed from the operant conditioning chambers and housed in the animal care facility for a period of at least 14 days. While one group is maintained under unrestricted access to food (sated group), a second group (FDR group) is exposed to a mild food restriction regimen that results in their body weights maintained at 90% of their nonrestricted body weight. On day 14 of food restriction the rats are transferred back to the drug-training environment, and a drug-seeking test is run under extinction conditions (i.e.&#160;lever presses do not result in heroin delivery).
The procedure presented here results in a highly robust augmentation of heroin seeking on test day in the food restricted rats. In addition, compared to the acute food deprivation manipulations we have used before, the current procedure is a more clinically relevant model for the impact of caloric restriction on drug seeking. Moreover, it might be closer to the human condition as the rats are not required to go through an extinction-training phase before the drug-seeking test, which is an integral component of the popular reinstatement procedure.

A procedure that allows a demonstration of robust augmentation of drug seeking in food-restricted rats is described. Following heroin self-administration training, rats go through an abstinence period, in a drug-free environment, during which they are mildly food restricted. Drug seeking is then tested in the drug-associated environment.

Eine Vorgehensweise, um die Wirkung von Längerer Essen Beschränkung Heroin suche in abstinent Ratten untersucht

In human drug addicts, exposure to drug-associated cues or environments that were previously associated with drug taking can trigger relapse during ...

Forschung

Verhalten

A Novel Procedure for Evaluating the Reinforcing Properties of Tastants in Laboratory Rats: Operant Intraoral Self-administration

This paper describes a novel method for studying the bio-behavioral basis of addiction to food. This method combines the surgical component of taste reactivity with the behavioral aspects of operant self-administration of drugs. Under very brief general anaesthesia, rats are implanted with an intraoral (IO) cannula that allows delivery of test solutions directly in the oral cavity. Animals are then tested in operant self-administration chambers whereby they can press a lever to receive IO infusions of test solutions. IO self-administration has several advantages over experimental procedures that involve drinking a solution from a spout&#160;or operant responding for solid pellets or solutions delivered in a receptacle. Here, we show that IO self-administration can be employed to study self-administration of high fructose corn syrup (HFCS). Rats were first tested for self-administration on a progressive ratio (PR) schedule, which assesses the maximum amount of operant behavior that will be emitted for different concentrations of HFCS (i.e.&#160;8%, 25%, and 50%). Following this test, rats self-administered these concentrations on a continuous schedule of reinforcement (i.e.&#160;one infusion for each lever press) for 10 consecutive days (1 session/day; each lasting 3 hr), and then they were retested on the PR schedule. On the continuous reinforcement schedule, rats took fewer infusions of higher concentrations, although the lowest concentration of HFCS (8%) maintained more variable self-administration. Furthermore, the PR tests revealed that 8% had lower reinforcing value than 25% and 50%. These results indicate that IO self-administration can be employed to study acquisition and maintenance of responding for sweet solutions. The sensitivity of the operant response to differences in concentration and schedule of reinforcement makes IO self-administration an ideal procedure to investigate the neurobiology of voluntary intake of sweets.

The current study evaluates a novel procedure for assessing the reinforcing effects of palatable solutions in laboratory rats: intraoral self-administration. To this end, operant responding (i.e.&#160;lever pressing) for intraoral infusions of sweet solutions at different concentrations was measured on continuous and progressive ratios schedules of reinforcement.

Ein neues Verfahren zur Bewertung der verstärkenden Eigenschaften von Geschmacksstoffe in Labor-Ratten: Operante Intraorale Selbstverwaltung

This paper describes a novel method for studying the bio-behavioral basis of addiction to food. This method combines the surgical component of taste ...

A Procedure to Observe Context-induced Renewal of Pavlovian-conditioned Alcohol-seeking Behavior in Rats

Environmental contexts in which drugs of abuse are consumed can trigger craving, a subjective Pavlovian-conditioned response that can facilitate drug-seeking behavior and prompt relapse in abstinent drug users. We have developed a procedure to study the behavioral and neural processes that mediate the impact of context on alcohol-seeking behavior in rats. Following acclimation to the taste and pharmacological effects of 15% ethanol in the home cage, male Long-Evans rats receive Pavlovian discrimination training (PDT) in conditioning chambers. In each daily (Mon-Fri) PDT session, 16 trials each of two different 10 sec auditory conditioned stimuli occur. During one stimulus, the CS+, 0.2 ml of 15% ethanol is delivered into a fluid port for oral consumption. The second stimulus, the CS-, is not paired with ethanol. Across sessions, entries into the fluid port during the CS+ increase, whereas entries during the CS- stabilize at a lower level, indicating that a predictive association between the CS+ and ethanol is acquired. During PDT each chamber is equipped with a specific configuration of visual, olfactory and tactile contextual stimuli. Following PDT, extinction training is conducted in the same chamber that is now equipped with a different configuration of contextual stimuli. The CS+ and CS- are presented as before, but ethanol is withheld, which causes a gradual decline in port entries during the CS+. At test, rats are placed back into the PDT context and presented with the CS+ and CS- as before, but without ethanol. This manipulation triggers a robust and selective increase in the number of port entries made during the alcohol predictive CS+, with no change in responding during the CS-. This effect, referred to as context-induced renewal, illustrates the powerful capacity of contexts associated with alcohol consumption to stimulate alcohol-seeking behavior in response to Pavlovian alcohol cues.

A procedure to study the capacity of an alcohol associated environmental context to trigger the renewal of alcohol-seeking behavior in rats is described.

Eine Vorgehensweise, um Context-induzierte Erneuerung der Pawlowschen Anlage Alkoholsucht bei Ratten Verhalten beobachten

Environmental contexts in which drugs of abuse are consumed can trigger craving, a subjective Pavlovian-conditioned response that can facilitate ...

Training Rats to Voluntarily Dive Underwater: Investigations of the Mammalian Diving Response

Underwater submergence produces autonomic changes that are observed in virtually all diving animals. This reflexly-induced response consists of apnea, a parasympathetically-induced bradycardia and a sympathetically-induced alteration of vascular resistance that maintains blood flow to the heart, brain and exercising muscles. While many of the metabolic and cardiorespiratory aspects of the diving response have been studied in marine animals, investigations of the central integrative aspects of this brainstem reflex have been relatively lacking. Because the physiology and neuroanatomy of the rat are well characterized, the rat can be used to help ascertain the central pathways of the mammalian diving response. Detailed instructions are provided on how to train rats to swim and voluntarily dive underwater through a 5 m long Plexiglas maze. Considerations regarding tank design and procedure room requirements are also given. The behavioral training is conducted in such a way as to reduce the stressfulness that could otherwise be associated with forced underwater submergence, thus minimizing activation of central stress pathways. The training procedures are not technically difficult, but they can be time-consuming. Since behavioral training of animals can only provide a model to be used with other experimental techniques, examples of how voluntarily diving rats have been used in conjunction with other physiological and neuroanatomical research techniques, and how the basic training procedures may need to be modified to accommodate these techniques, are also provided. These experiments show that voluntarily diving rats exhibit the same cardiorespiratory changes typically seen in other diving animals. The ease with which rats can be trained to voluntarily dive underwater, and the already available data from rats collected in other neurophysiological studies, makes voluntarily diving rats a good behavioral model to be used in studies investigating the central aspects of the mammalian diving response.

Detailed instructions are provided on how to train rats to voluntarily dive underwater through a 5 m long Plexiglas maze. Because the brains of rats have been very well characterized, voluntarily diving rats may help elucidate the central pathways of the mammalian diving response.

Trainings Ratten Freiwillig Dive Unterwasser: Untersuchungen des Mammalian Diving Antwort

Underwater submergence produces autonomic changes that are observed in virtually all diving animals. This reflexly-induced response consists of apnea, a ...

The Modified Hole Board - Measuring Behavior, Cognition and Social Interaction in Mice and Rats

This protocol describes the modified hole board (mHB), which combines features from a traditional hole board and open field and is designed to measure multiple dimensions of unconditioned behavior in small laboratory mammals (e.g., mice, rats, tree shrews and small primates). This paradigm is a valuable alternative for the use of a behavioral test battery, since a broad behavioral spectrum of an animal&#8217;s behavioral profile can be investigated in one single test.
The apparatus consists of a box, representing the &#8216;protected&#8217; area, separated from a group compartment. A board, on which small cylinders are staggered in three lines, is placed in the center of the box, representing the &#8216;unprotected&#8217; area of the set-up. The cognitive abilities of the animals can be measured by baiting some cylinders on the board and measuring the working and reference memory. Other unconditioned behavior, such as activity-related-, anxiety-related- and social behavior, can be observed using this paradigm. Behavioral flexibility and the ability to habituate to a novel environment can additionally be observed by subjecting the animals to multiple trials in the mHB, revealing insight into the animals&#8217; adaptive capacities.
Due to testing order effects in a behavioral test battery, na&#239;ve animals should be used for each individual experiment. By testing multiple behavioral dimensions in a single paradigm and thereby circumventing this issue, the number of experimental animals used is reduced. Furthermore, by avoiding social isolation during testing and without the need to food deprive the animals, the mHB represents a behavioral test system, inducing if any, very low amount of stress.

This protocol describes the modified hole board, which is a behavioral test set-up that comprises the characteristics of an open field and a traditional hole board. This set-up enables the differential analysis of unconditioned behavior of small laboratory mammals as well as the analysis of cognitive abilities.

Der modifizierte Loch Board - Mess Verhalten, Kognition und Sozialinteraktion an Mäusen und Ratten

This protocol describes the modified hole board (mHB), which combines features from a traditional hole board and open field and is designed to measure ...

A Treatment Package without Escape Extinction to Address Food Selectivity

Feeding difficulties and feeding disorders are a commonly occurring problem for young children, particularly children with developmental delays including autism. Behavior analytic interventions for the treatment of feeding difficulties oftentimes include escape extinction as a primary component of treatment. The use of escape extinction, while effective, may be problematic as it is also associated with the emergence of challenging behavior (e.g., extinction burst). Such challenging behavior may be an acceptable side effect in treatment cases where feeding problems are severe and chronic (e.g., failure to thrive). However, in more acute cases (e.g., selective eating), the negative side effect may be unwarranted and undesired. More recent research on the behavioral treatment of food selectivity has begun to evaluate treatments for feeding difficulties that do not include escape extinction (e.g., demand fading, behavioral momentum), with some success. However, research to date reveals individual differences in responsiveness to such treatments and no clear preferable treatment has emerged. This manuscript describes a multi-component treatment package that includes shaping, sequential presentation and simultaneous presentation, for the treatment of food selectivity in four young children with developmental delays. This treatment package extends the literature on the behavioral treatment for food selectivity and offers a multi-component treatment protocol that may be clinically applicable across a range of treatment scenarios and settings.

Feeding difficulties are a common problem for children with developmental disorders, including autism, and behavioral interventions often include escape extinction. Recent research has begun to evaluate treatments that do not include escape extinction. This manuscript describes a multicomponent treatment package that does not use escape extinction to treat feeding difficulties.

Eine Behandlung Package ohne Flucht Extinction zu Adresse Lebensmittel Selektivität

Feeding difficulties and feeding disorders are a commonly occurring problem for young children, particularly children with developmental delays including ...

Pavlovian Conditioned Approach Training in Rats

Cues that are contingently paired with unconditioned, rewarding stimuli can acquire rewarding properties themselves through a process known as the attribution of incentive salience, or the transformation of neutral stimuli into attractive, &#34;wanted&#39; stimuli capable of motivating behavior. Pavlovian conditioned approach (PCA) develops after the response-independent presentation of a conditioned stimulus (CS; e.g., a lever) that predicts the delivery of an unconditioned stimulus (US; e.g., a food pellet) and can be used to measure incentive salience. During training, three patterns of conditioned responses (CRs) can develop: sign-tracking behavior (CS-directed CR), goal-tracking behavior (US-directed CR), and an intermediate response (both CRs). Sign-trackers attribute incentive salience to reward-related cues and are more vulnerable to cue-induced reinstatement of drug-seeking as well as other addiction-related behaviors, making PCA a potentially valuable procedure for studying addiction vulnerability. Here, we describe materials and methods used to elicit PCA behavior from rats as well as analyze and interpret PCA behavior in individual experiments.

Here, we present a protocol to elicit Pavlovian conditioned approach behavior in rats. This procedure can be used to measure individual differences in the tendency to approach and attribute incentive salience to reward-related cues and investigate addiction vulnerability.

Pavlovian Trainings konditionierten Ansatz bei Ratten

Cues that are contingently paired with unconditioned, rewarding stimuli can acquire rewarding properties themselves through a process known as the ...

The Rodent Psychomotor Vigilance Test (rPVT): A Method for Assessing Neurobehavioral Performance in Rats and Mice

The human Psychomotor Vigilance Test (PVT) is a widely used procedure for measuring changes in fatigue and sustained attention. The present article describes a rodent version of the PVT&#8212;termed the &#34;rPVT&#34;&#8212;that measures similar aspects of attention (i.e., performance accuracy, motor speed, premature responding, and lapses in attention). Data are presented that demonstrate both the short- and long-term usefulness of the rPVT when employed with laboratory rats. Rats easily learn the rPVT, and learning to perform the basic procedure takes less than two weeks of training. Once acquired, rat performances in the rPVT show a high degree of similarity to these same performance measures in the human PVT, including similarities in, lapses in attention, reaction times, vigilance decrements across session time (i.e., the human &#34;time-on-task&#34; effects), and the response-stimulus interval (RSI) effect described for humans. Thus the rPVT can be an extremely valuable tool for assessing the effects of a wide range of variables on sustained attention quite similar to human PVT performances, and thus can be useful for developing novel treatments for neurobehavioral dysfunctions.

The Rodent Psychomotor Vigilance Test rPVT: A Method for Assessing Neurobehavioral Performance in Rats and Mice

A rat version of the human Psychomotor Vigilance Test (PVT) is described that measures aspects of attention similar to those measured with the human PVT, including aspects of human vigilance such as performance accuracy, motor speed, premature responding, and lapses in attention.

Das Nagetier Psychomotorik Vigilance Test (rPVT): Eine Methode zur Beurteilung der Neuropsychologische Leistung bei Ratten und Mäusen

The human Psychomotor Vigilance Test (PVT) is a widely used procedure for measuring changes in fatigue and sustained attention. The present article ...

The Knob Supination Task: A Semi-automated Method for Assessing Forelimb Function in Rats

Tasks that accurately measure dexterity in animal models are critical to understand hand function. Current rat behavioral tasks that measure dexterity largely use video analysis of reaching or food manipulation. While these tasks are easy to implement and are robust across disease models, they are subjective and laborious for the experimenter. Automating traditional tasks or creating new automated tasks can make the tasks more efficient, objective, and quantitative. Since rats are less dexterous than primates, central nervous system (CNS) injury produces more subtle deficits in dexterity, however, supination is highly affected in rodents and crucial to hand function in primates. Therefore, we designed a semi-automated task that measures forelimb supination in rats. Rats are trained to reach and grasp a knob-shaped manipulandum and turn the manipulandum in supination to receive a reward. Rats can acquire the skill within 20 &plusmn; 5 days. While the early part of training is highly supervised, much of the training is done without direct supervision. The task reliably and reproducibly captures subtle deficits after injury and shows functional recovery that accurately reflects clinical recovery curves. Analysis of data is performed by specialized software through a graphical user interface that is designed to be intuitive. We also give solutions to common problems encountered during training, and show that minor corrections to behavior early in training produce reliable acquisition of supination. Thus, the knob supination task provides efficient and quantitative evaluation of a critical movement for dexterity in rats.

This manuscript describes a semi-automated task that quantifies supination in rats. Rats reach, grasp, and supinate a spherical manipulandum. The rat is rewarded with a pellet if the turn angle exceeds a criterion set by the user. This task increases throughput, sensitivity to injury, and objectivity compared to traditional tasks.

Drehknopf Supination Aufgabe: Eine halbautomatische Methode für die Beurteilung der Funktion der Vordergliedmaße bei Ratten

Tasks that accurately measure dexterity in animal models are critical to understand hand function. Current rat behavioral tasks that measure dexterity ...

A New Method for Inducing a Depression-Like Behavior in Rats

Contagious depression is a phenomenon that is yet to be fully recognized and this stems from insufficient material on the subject. At the moment, there is no existing format for studying the mechanism of action, prevention, containment, and treatment of contagious depression. The purpose of this study, therefore, was to establish the first animal model of contagious depression.
Healthy rats can contract depressive behaviors if exposed to depressed rats. Depression is induced in rats by subjecting them to several manipulations of chronic unpredictable stress (CUS) over 5 weeks, as described in the protocol. A successful sucrose preference test confirmed the development of depression in the rats. The CUS-exposed rats were then caged with na&#239;ve rats from the contagion group (1 na&#239;ve rat/2 depressed rats in a cage) for an additional 5 weeks. 30 social groups were created from the combination of CUS-exposed rats and na&#239;ve rats.
This proposed depression-contagion protocol in animals consists mainly of cohabiting CUS-exposed and healthy rats for 5 weeks. To ensure that this method works, a series of tests are carried out - first, the sucrose preference test upon inducing depression to rats, then, the sucrose preference test, alongside the open field and forced-swim tests at the end of the cohabitation period. Throughout the experiment, rats are given tags and are always returned to their cages after each test.
A few limitations to this method are the weak differences recorded between the experimental and control groups in the sucrose preference test and the irreversible traumatic outcome of the forced swim test. These may be worth considering for suitability before any future application of the protocol. Nonetheless, following the experiment, na&#239;ve rats developed contagion depression after 5 weeks of sharing the same cage with the CUS-exposed rats.

This protocol describes a new model by which healthy rats could contract depression over a given time periodthrough contagion by exposure to chronic unpredictable stressed (CUS) rats.

Eine neue Methode zur Induktion einer Depression-ähnliches Verhaltens bei Ratten

Contagious depression is a phenomenon that is yet to be fully recognized and this stems from insufficient material on the subject. At the moment, there is ...