Dieses Protokoll liefert eine präzise, chirurgisch kontrollierte Verletzung, um bei Mäusen mit hoher Reproduzierbarkeit und sehr hohen Überlebensraten eine vollständige Rückenmarkstranssektion zu induzieren. Die Verwendung eines Feinbohrers für die Knochenverletzung minimiert die Schäden am umgebenden Gewebe, so dass die Verletzungs- und Behandlungsreaktionen genauer modelliert werden können. Um eine Laminektomie durchzuführen, nach der Bestätigung eines Mangels an Reaktion auf Pedalreflex in einem anästhesierten acht bis 10 Wochen alten weiblichen C57 schwarze 6 Maus, rasieren Sie das Rückenfell, um den chirurgischen Bereich über der rückenden Wirbelsäule auszusetzen und sterilisieren den rasierten Bereich mit sterilen Wattestäbchen in Povidon Jod antiseptische Flüssigkeit und chirurgischen Geist getränkt.
Mit einem Skalpell, machen Sie einen vertikalen Mittellinienschnitt auf der T10 Wirbelebene und verwenden Sie gerade Zangen, um die Haut von der zugrunde liegenden Faszie zu heben, um die Retraktorplatzierung zu erleichtern. Um die Stacheln des T9 durch T11 Wirbel zu belichten, verwenden Sie die stumpfe Kante des Skalpells, um einen kleinen Mittellinienschnitt im Subkutangewebe und der darunter liegenden Faszien zu machen und verwenden Sie feine Spitzen- nicht-scharfe Zangen, um die Faszien zu stumpf zu sezieren und zu reflektieren. Um die Laminae freizulegen, verwenden Sie die stumpfe Spitze des Skalpells, um den Rückenstamm und die paraspinösen Muskeln entlang der Stacheln des T9 durch T11 Wirbel zu spalten und verwenden Sie die stumpfe feine Spitze Zange, um die Muskeln in Schichten zu sezieren, um die Laminae der Wirbel freizulegen.
Verwenden Sie die gleichen Zangen, um kleine Taschen um die Querprozesse des T10-Wirbels zu machen und die Zangen der gekrümmten Zange unter den Querprozessen innerhalb der erstellten Taschen einzuhaken, um den T10-Wirbelkörper zu stabilisieren. Spülen Sie die T10-Laminae gründlich mit warmer Saline ab und verwenden Sie Wattestäbchen, um die knöcherne Oberfläche sanft zu reinigen, wobei darauf geachtet wird, dass keine Muskel- oder Bandaufsätze entlang der bilateralen Oberfläche verbleiben. Um die Laminae bilateral zu brechen, verwenden Sie eine sieben Millimeter lange Bohrspitze mit einer Länge von 0,55 Millimetern, um einen vertikalen Pfad vom T9/T10-Intervertebralraum zum T10/T11-Intervertebralraum entlang der beiden T10-Laminae mit dem Drill off zu verfolgen.
Wenn der Pfad zurückverfolgt wurde, drehen Sie den Bohrer und langsam und vorsichtig einen vertikalen Graben auf der rechten Lamina des T10-Wirbels, mit den gekrümmten Zangen, um den Wirbel stabil zu halten. Nach der Wiederholung des Prozesses auf der linken Seite der Lamina, bewässern Sie das Gewebe mit warmer Herzlinie, um alle verbleibenden Knochenfragmente wegzuwaschen. Für diesen Schritt ist es wichtig, mit einer Hand einen guten Halt an der Wirbelsäule zu halten.
Es ist auch wichtig, mit dem Bohrer bequem und selbstbewusst zu werden. Als nächstes verwenden Sie die abgewinkelten feinspitzen Zangen, um den spinlösen Prozess zu greifen und das gesamte dorsale Segment der Laminae zu entfernen, das durch die bilaterale Bohrung getrennt ist. Dann bewässern und tupfer nach Bedarf, um eine klare Visualisierung des Rückenmarks innerhalb des Laminektomiefensters zu ermöglichen.
Um die Rückenmarksverletzung innerhalb des freiliegenden Kordels zu induzieren, verwenden Sie eine schmale, runde Schneideklinge, um die Schnur in der Mitte des Laminektomiefensters zu schneiden, wobei darauf geachtet wird, die seitlichen Aussparungen der Wirbelsäule zu fegen, um eine vollständige Transektionsverletzung zu induzieren. Um die Vollständigkeit der Transektionsverletzung zu bestätigen, verwenden Sie die stumpfe FeinspitzeZange, um alle verbleibenden Verbindungen an der Transektionsstelle zu entfernen. Sobald die Hämostase an der Transektionsstelle erreicht ist, lassen Sie den Griff des gekrümmten Kraftteils auf den T10-Wirbel los und bringen Sie die Ränder der sezierten Muskeln entlang der Mittellinie zusammen, um eine gute Apposition zu erreichen.
Mit 5/0 Polyglactin 910 resorbierbaren Nähten, die Muskeln in Schichten zu nahn, um sicherzustellen, dass die natürliche Krümmung der Wirbelsäule keine Spannung an der Nahtlinie verursacht oder öffnen Sie die Nähte. Verwenden Sie dann 5/0 nicht resorbierbare Seidennähte, um das unterkutane Gewebe und die Haut zu schließen, wobei darauf zu achten ist, dass vor dem Verschluss keine Blutungen, Gerinnsel oder Ablagerungen unter der Haut verbleiben. Um zu beurteilen, ob diese Methode zur Induktion von Rückenmarksverletzungen bei Mäusen reproduzierbar und konsistent ist, kann das verletzte Rückenmark durch Immunhistochemie analysiert und Verhaltenstests an den Mäusen durchgeführt werden.
Die Immunkennzeichnung gegen den Astrozytenmarker, glialfibrilläres saures Protein, erleichtert die Abgrenzung der Grenze des intakten Rückenmarks. In diesem Längsschnitt kann die Unfallstelle wie erwartet zwischen den Schnurstümpfen visualisiert werden. Ein konsistenter Größenfehler kann an der Transektionsstelle mit einem durchschnittlichen Mindestabstand von 550,4 plus oder minus 17,3 Mikrometern induziert werden.
Verhaltensdaten, die die Basso-Mausskala eines offenen Feldtests bereitstellen, zeigen, dass die verletzten Mäuse nach der Verletzung keine Hintergliedsamebewegtsein aufweisen. Somit erzeugt das Protokoll eine vollständige und zuverlässige Transektionsverletzung, die zu einem vollständigen Funktionsverlust unterhalb des Verletzungsniveaus führt, was nicht zu einer spontanen Umkehrung der Lähmung führt. Achten Sie darauf, in einer geraden Linie mit einer stabilen Hand zu bohren, da es sehr schwierig sein kann, das Laminektomiefenster zu reparieren, sobald es falsch gebohrt wurde.
Nach der Induktion von Rückenmarksverletzungen können verschiedene Behandlungsmöglichkeiten angewendet werden, einschließlich der Medikamentenabgabe und der Zelltransplantation, um mögliche Therapien zu identifizieren, die die Erholung der Rückenmarksverletzung verbessern.
