Wenn ein Chemieunternehmen eine neue Chemikalie oder ein anderes Material auf den Markt bringen will, muss es Daten aus einer Reihe von Ökotoxizitätstests liefern. Der Algentest ist einer der drei obligatorischen Tests, die durchgeführt werden müssen. Der Algentest leidet unter der Tatsache, dass es ziemlich schwierig ist, durchzuführen.
Aus diesem Grund haben wir die LEVITATT-Testplattform entwickelt. Der LEVITATT verwendet LED-Licht, um Probleme bei übermäßiger Wärmeerzeugung zu vermeiden. Darüber hinaus sorgt es für ein gleichmäßiges Lichtfeld.
Es hat eine kompakte Größe, was bedeutet, dass Sie nicht viel Platz benötigen, um den Algentest durchzuführen, aber gleichzeitig ermöglicht es die Verwendung von genügend Probenvolumen, um chemische Analysen und Charakterisierungen vor, während und nach dem Testen durchzuführen. Dies ist besonders wichtig, wenn Sie Nanomaterialien testen. Dieses Video zeigt die Verwendung von LEVITATT für Algentoxizitätstests von Nanomaterialien und anderen schwierigen Substanzen.
Die Demonstration besteht aus den folgenden vier Schritten. Beschreiben Sie zunächst die Komponenten des LEVITATT. Der zweite Schritt besteht darin, die Lösung für Algenwachstumsmedien vorzubereiten.
Und der dritte Schritt besteht darin, einen Überblick über das Verfahren zu geben, wie ein Algentoxizitätstest durchgeführt werden kann. Der letzte Schritt besteht darin, den Anstieg der Algenbiomasse per Fluorometer zu messen. Der LEVITATT kann im temperaturgeregelten Raumschrank platziert werden.
Dies ermöglicht eine stabile Temperatur während der gesamten Belichtung. Das Setup wird auf einem Orbital-Shaker platziert, um die Rotation der Proben während des Tests zu ermöglichen. Der Test wird in 20-Milliliter-Szintillationsfläschchen mit vier Milliliter Nein-Medium durchgeführt.
Ein Schraubverschluss mit bohrendem Loch ermöglicht den CO2-Austausch mit Luft während der Belichtung. Die LED-Quelle befindet sich zwischen zwei Kunststoffplatten und befindet sich in der Mitte jedes Gehäuses. Die Platzierung erzeugt ein homogenes Lichtfeld und minimiert die Schattierung zwischen den Proben.
Jedes Gehäuse ist mit Klemmen montiert und kann bis zu fünf Proben aufnehmen. Die kompakte Größe minimiert den Fürden erforderlichen Speicherplatz für das Experiment. Um die Lagerlösungen vorzubereiten, wägen Sie die entsprechende Menge jeder Verbindung ab.
Die Stammlösung besteht aus verschiedenen Salzen, die für das Wachstum der Algen lebenswichtig sind. Wenn die entsprechende Menge salzig abgewogen wurde, werden sie mit reinem reinem Wasser verdünnt. Die Lagerlösungen werden entweder durch Filtrieren oder Autoklavieren sterilisiert.
Nach der Sterilisation können die Lagerlösungen bei vier Grad Celsius im Dunkeln gelagert werden. Bereiten Sie eine Reihe von Expositionskonzentrationen vor. Der Faktor zwischen den Expositionskonzentrationen sollte 3,2 nicht überschreiten.
Jedem Test wird das entsprechende Volumen exponentiell wachsender Algen zugesetzt. Die endgültige Zelldichte sollte etwa 10.000 Algenzellen pro Milliliter betragen. Es ist entscheidend, dass die Vorkultur exponentiell wächst, um die Gültigkeitskriterien des Tests zu erfüllen.
Die Messfläschchen werden gemischt, um eine homogene Verteilung von Algen und Verbindungen vor der Probenahme zu ermöglichen. Die Proben werden in Becher gegossen, und vier Milliliter werden in 20-Milliliter-Szintillationsfläschchen pipettiert. Die Szintillationsfläschchen sind nun gedeckelt.
Pipette 0,4 Milliliter aus jeder Konzentration. 1,6 Milliliter Aceton hinzufügen, um die Zellwand zu stören und das Chlorophyll in die flüssige Phase freizusetzen. Jede Glasdurchstechflasche ist nun dicht, um eine Verdunstung von Aceton während der Lagerung zu vermeiden.
Die gedeckelten Szintillationsfläschchen werden nun zufällig im LEVITATT verteilt und 72 Stunden lang inkubiert. Messen Sie die Lichtintensität und die Temperatur zu Beginn und am Ende der Inkubation, um die Einhaltung der gewünschten Richtlinien zu gewährleisten. Die Unterprobe erfolgt im 24-Stunden-Intervall, indem 0,4 Milliliter von jeder Szintillationsfläschchen in Glasfläschchen geleitet werden.
Fügen Sie 1,6 Millionen Aceton hinzu, um die Zellwand zu stören und das Chlorophyll in die flüssige Phase freizusetzen. Nachdem Aceton zugegeben wurde, schrauben Sie die Deckel fest auf und lassen Sie die Proben bis zur Analyse im Dunkeln. Verwenden Sie ein Fluorometer, um die Biomasse in der während des Testzeitraums erworbenen Probe zu quantifizieren.
Die Einstellungen auf dem Fluorometer sollten 420 Nanometer als Anregungswellenlänge und eine Emissionswellenlänge von 671 Nanometern betragen. Jede einzelne Probe wird dreimal gemessen, und die relativen Werte werden notiert. Die relativen Werte des Fluorometers werden zur Berechnung der Wachstumsrate verwendet, die für die weitere Datenbehandlung verwendet wird.
Verwenden Sie eine statistische Software, um eine nichtlineare Regressionskurve an die berechneten Wachstumsratendaten anzupassen. Ein Beispiel für eine nichtlineare Regressionskurve könnte eine Loglogistik der lebensfähigen Funktion sein. Das zugeordnete 95%-Konfidenzintervall wird neben der Modellanpassung angezeigt.
Regelmäßig wirksame Konzentrationswerte wie 10, 20 und 50% ineffizient werden verwendet, um das Ergebnis eines Ökotoxizitätstests zu melden. Zusammenfassend lässt sich sagen, dass das LEVITATT eine kompakte Plattform für Dieontoxizitätsprüfungen regelmäßiger Chemikalien bietet, die internationalen standardisierten Richtlinien entsprechen. Darüber hinaus bietet das Setup eine robuste Plattform für die Prüfung schwieriger Substanzen, die den Durchgang von Licht in Richtung Desal, wie Nanomaterialien oder farbige Substanzen stören.
