The present study was supported by grants from Kidney Research UK (ST4/2011), the Cunningham Trust (CT11/14) and the Mrs EA Hogg's Charitable Trust.

HINWEIS:. Tierversuche wurden in Übereinstimmung mit den Richtlinien und Vorschriften durch die Tiere (Scientific Procedures) Act 1986 auferlegt wurden Verfahren durchgeführt unter Verwendung von sterilen (autoklaviert) chirurgische Instrumente und Verbrauchsmaterialien durchgeführt. 15 Wochen, mit dem optimalen Alter Befinden - Während die Mausmodell der Nieren IRI präsentiert hier wurde auf einem 8-Wochen alten männlichen Balb / c-Maus ist es reproduzierbar auf einer Vielzahl von Maus-Stämme von beiden Geschlechtern in der Regel zwischen 7 Jahren durchgeführt werden durchgeführt 8 Wochen. Die in der repräsentative Ergebnisse Abschnitt präsentierten Daten wurden sowohl aus Balb / c und FVB-Mäusen erhalten. Die Anwendung von Kochsalzlösung erwärmt wird verwendet, um den Darm und OP-Bereich feucht zu halten, aber es sollte sorgfältig überwacht und auf ein Minimum, wie die übermäßige Anwendung von Flüssigkeiten aufbewahrt werden können, um ein Artefakt Senkung des Serum-oder Plasma-Kreatinin-Werte, die eine wichtige ist zu führen Versuchsanzeige. 1. Tier Vorbereitung und Laparotomie &lt;ol&gt; <li> Anesthetize die Maus mit Ketamin-Hydrochlorid (70 mg / kg) und Medetomidinhydrochlorid (1 mg / kg) intraperitoneal und bestätigen Sie die Narkosetiefe durch den Verlust der Reflexe, zB Zehen Prise. Die Dauer des resultierenden Anästhesieebene beträgt 4 Stunden. Dies ist ausreichend, um die gesamte chirurgische Prozedur durchzuführen, und keine zusätzliche Anästhesie erforderlich. </li><li> Entfernen Sie die Haare um den Schnittbereich, sicherzustellen, dass das Gebiet ist frei von losen Haaren und desinfizieren die Bauchhaut mit einer verdünnten Lösung Chlorhexidin. </li><li> Platzieren Sie die Maus auf einem beheizten Operations Pad in Rückenlage und die oberen und unteren Extremitäten zu beheben, um das Pad mit Low-Tack Klebeband. Sicherzustellen, dass die oberen Enden in einer normalen Position in der Lunge zu verhindern Kompression gehalten. Während des gesamten Verfahrens überwachen die Maus für Verbrennungen. Wenn möglich, wird empfohlen, eine nicht-elektrische Wärmequelle verwendet werden. </li><li> Verwalten des Analgetikum Buprenorphin-Hydrochlorid (0,06 mg / kg)subkutan und anwenden Auge Schmiermittel auf die Augen, um Hornhaut austrocknet. Analgetika werden vor der Operation, um die postoperative Genesung zu unterstützen verabreicht. </li><li> Mit Trenngewebe oder eine Schere Skalpell einen Mittellinie Laparotomieschnitts und unverblümt trennen die Haut vor dem Bauchfell. Dies erlaubt der Haut und Bauchfell, die während Wundverschluss separat genäht werden. Ein Schnitt der avaskulären linea alba gemacht, die Zugang zu der Bauchhöhle. </li><li> Um eine klare Sicht auf das Operationsgebiet zu erstellen legen Sie eine Aufroller und legen Sie die Maus. </li></ol> 2. Harnleiter-Division und der rechten Nephrektomie <ol><li> Drücken Sie vorsichtig den Darm in Richtung der linken Seite der Bauchhöhle mit einem Wattestäbchen im Autoklaven sterilisiert mit Kochsalzlösung, um die rechte Niere und Harnleiter aussetzen befeuchtet. Bedecken Sie den Darm mit angefeuchteten Vorhänge Austrocknen zu verhindern. </li><li> Heben Sie den rechten Harnleiter mit abgewinkelten Pinzette. Ligation das Recht Harnleiter zweimal mit 6/0 silk-geflochten Naht. Für Langzeit-Experimenten, verwenden Sie resorbierbaren Fäden für alle Bauchoperationen. </li><li> Teilen Sie die Harnleiter zwischen den Nähten. Während die Blasen-Harnleiter-Kreuzung sollte Urin aus undichten in das Peritoneum von der Blase zu verhindern, der Harnleiter wird als Schutz gegen Leckagen postoperativ bei Langzeitexperimenten ligiert. </li><li> Um einen leichteren Zugang zu ermöglichen, wenn die Durchführung der Nephrektomie rechts, schieben die Leber und auf der rechten Seite mit einem angefeuchteten Wattestäbchen und halten Sie ihn mit feuchten Gaze, um die rechte Nierenarterie und Vene freizulegen. </li><li> Unverblümt sezieren das Bindegewebe und Fett zusammen medial der rechten Niere bis in die rechte Nierenarterie und Vene. </li><li> Erstellen Sie einen Kanal unterhalb der Nierenarterie und Vene durch vorsichtiges Schieben der abgewinkelten Pinzette unterhalb der Blutgefäße. Führen Sie die Zange mit unter die Spitzen geschlossen und vorsichtig mit den Spitzen, um die Bildung des Kanals erleichtern offen zu entfernen.</li><li> Wiederholen Sie Schritt 2,6 bis die Spitzen der Zange sind durch das Bindegewebe nur über die Nierenarterie und Vene sichtbar. Sobald sichtbar sanft reiben die Spitzen der Zange gegen die Spitzen der anderen Satz von abgewinkelten Pinzette vorsichtig brechen das Bindegewebe. </li><li> Mit der Nierenarterie und Vene deutlich zugänglichen sie nun verschlossen werden. Schieben abgewinkelten Pinzette unterhalb der Nierenarterie und Vene mit die Spitzen geschlossen. Einmal im Ort öffnen die Spitzen der Pinzette und führen die blutstillende Clip-Applikator zwischen den Spitzen und fest wenden eine blutstillende Clip auf die Nierenarterie und Vene in der Nähe der Niere. Alternativ kann die Nierenarterie und Vene kann mit 6/0 Seide geflochtene Nahtmaterial ligiert werden. </li><li> Teilen Sie die verstopften Nierenarterie und Vene in der Nähe der Niere, die jetzt mit jedem noch anhaftende Bindegewebe entfernt werden können. </li><li> Entfernen Sie alle Gaze verwendet, um die Leber zu halten und ersetzen den Darm mit Wattestäbchen. </li></ol><ol><li> Drücken Sie vorsichtig den Darm auf die rechte Seite der Bauchhöhle mit Wattestäbchen, um die linke Niere und Harnleiter freizulegen und decken mit angefeuchteten Vorhänge. Bei Bedarf kann die Bauchspeicheldrüse mit angefeuchteten Mull abgelenkt werden, einen leichteren Zugang zu ermöglichen. </li><li> Verwenden stumpf, um sanft zu brechen das Bindegewebe vor und hinter der linken Nierenarterie und Vene, und erstellen Sie einen Kanal unterhalb der Gefäße in einer ähnlichen Weise wie in Harnleiter-Division und der rechten Nephrektomie beschriebenen Schritt 2.4. </li><li> Induzieren Ischämie der linken Niere, indem eine Mikro serrafine Clip auf die Nierenarterie und Vene. Erfolgreiche Ischämie kann visuell durch einen allmählichen Verdunkelung des einheitlichen Niere bestätigt werden. Blutgefäße neben der linken Nierenarterie und-vene gelegentlich liefern die Niere. Falls vorhanden, müssen auch diese zusätzlichen Blutgefäße mit Mikro serrafine Clips, um erfolgreich verschlossen werdeninduzieren Ischämie der gesamten Niere. </li><li> Ersetzen Sie den Darm und sorgfältig sicherzustellen, dass es keine abrupten Wendungen, die zu Darm Ischämie kompromittierenden Ergebnissen führen können. Vorübergehend schließen Sie das Bauchfell mit einer einzigen Naht. </li><li> Nach Ischämie Induktions sofort die Maus auf einem homöothermen Decke mit einer rektalen Thermistor mit einer Steuereinheit, die die Körpertemperatur bei 37 ° C für die erforderliche Dauer der Ischämie beibehält befestigt. Um die entsprechende Länge der Ischämie notwendig definieren, um den gewünschten Grad der Nierenschädigung und Nierenversagen induziert wird empfohlen, dass eine Titration für jeden Stamm und chirurgischen Operateur durchgeführt werden. </li><li> Kurz vor dem Ende des ischämischen Periode wieder öffnen das Bauchfell und sorgfältig positionieren den Darm, den Zugang zu der Klemme ermöglichen und sehen Sie die Niere. Einsetzen des Retraktors, wie in dem Video gezeigt wird, ist nicht erforderlich und wurde lediglich aus Darstellungszwecken durchgeführt. </li><li> Entfernen Sie die clamp nach der Zeit der Ischämie wurde abgeschlossen. Unmittelbar nach der Entfernung der Niere die Farbe von einem dunklen kastanienbraunen schnell ändern, um eine gesunde dunkelrosa was eine erfolgreiche Reperfusion. </li><li> Wieder sicher, dass der Darm nicht vor dem Schließen des Bauchfells mit einem Zierstich mit 6/0 geflochtenen Seidennahtmaterial verdrillt. Schließen Sie dann die Haut mit Hilfe metallische Haut-Clips. </li><li> Um die Gefahr von postoperativen Infektion zu minimieren, wenden ein Antiseptikum, wie Iod / Alkohol-Lösung auf das Operationsgebiet. </li></ol> 4. Post-operative Wiederherstellung und Pflege <ol><li> Teilweise Rückwärts Anästhesie mit Atipamezol-Hydrochlorid (2 mg / kg) subkutan zu verabreichen und Flüssigkeiten mit einer subkutanen Injektion von 1 ml Kochsalzlösung erwärmt, um eine Dehydratation nach der Operation zu verhindern. </li><li> Mäuse sorgfältig zu überwachen, bis sie das Bewusstsein wiedergewonnen, erscheint aufmerksam und sind in der Lage, sich aufzurichten. </li><li> Veröffentlichung Mäuse in einem beheizten Feld wieder bei 29 ° C, loc gehaltenATED in einer ruhigen Umgebung, für 24 Std. Mäuse eine beeinträchtigte Fähigkeit, aufgrund der Anästhesie thermoregulate haben und es ist daher wichtig, dass sie bei einer erhöhten Temperatur untergebracht, um effektive Rückgewinnung zu ermöglichen. Angefeuchtet Nahrung kann ebenfalls vorgesehen, um Fluid-und Nahrungsaufnahme fördern. </li><li> Für die langfristige Erholung Experimente liefern laufenden Analgetika und entfernen Hautklammern 7 Tage nach der Operation. </li></ol> 5. Beurteilung der Struktur-und Funktions Kidney Injury und Regeneration <ol><li> Blut aus der Schwanzvene in Experimenten oder durch Herzpunktion zum Zeitpunkt der Euthanasie am Ende des Experiments gesammelt werden. Messen der Nierenfunktion durch Serum-Kreatinin, mit einem Creatinase basierte Methode, und Blut-Harnstoff-Stickstoff (BUN) auf einer biochemischen Zentrifugalanalysator wie zuvor 7 beschrieben. Sollen, bevor ein Modell von Nierenversagen, wie diese ermittelt werden, der Nierenfunktion von normalen gesunden Mäusen benötigt, kann deutlich variieren depending auf der zB der Jaffe-Reaktion und Creatinase basierte Methoden zur Messung der Kreatinin-Analysemethode zu unterschiedlichen Ergebnissen. </li><li> Untersuchen Nierenstruktur durch Histopathologie auf Paraffin eingebettet Nierengewebeschnitten mit Hämatoxylin und Eosin (H &amp; E) oder Periodic Acid Schiff (PAS) gefärbt. Erfassen von 5 - 10 Aufnahmen in 200-facher Vergrößerung der äußeren Streifen der äußeren Medulla (OSOM) für jede Maus. Beurteilen Sie den Grad der Verletzung in der OSOM da diese Region ist in diesem Modell verletzt, weil sie sehr anfällig für Hypoxie ist. </li><li> Verwenden Sie eine der beiden unten beschriebenen Scoring-Systeme, um akute tubuläre Nekrose (ATN) oder Regeneration zu messen. Repräsentative Morphologie der in diesen Systemen verwendeten Einstufungen ist in Abbildung 1 dargestellt. </li><li> Verwenden Sie einen einfachen binären System zu punkten ATN. Auf der Basis der Zellintegrität und Morphologie Marke und zählen Tubuli entweder als lebensfähig (intakte Zellmorphologie) oder nekrotischen (kompromittiert Zelle integrity, anormale Zellmorphologie oder Verlust von Zellen). <ol><li> Ausdruck der Anzahl der nekrotischen Tubuli als Prozentsatz der Gesamtzahl der Tubuli (Röhrchen nekrotischen%). </li></ol></li><li> Bewerte Regeneration mit einem anderen System, das auf die Integrität der Zelle, Morphologie und Keimzahl. Mark und zählen Tubuli als gesund, nekrotischen, verletzt oder Wiederherstellung nach den in den folgenden Schritten aufgeführten Kriterien. <ol><li> Wie bei der ATN-Scoring-System (in Schritt 5.4 beschrieben) markieren Tubuli mit intakter als normale Zellen, während gesunde Tubuli mit eingeschränkter Zellintegrität sollte abnorme Zellmorphologie oder offene Zellverlust als nekrotischen erzielt werden. </li><li> Bewerte Tubuli als verletzt, wenn sie einen ausgedünnten Zytoplasma mit wenigen Kernen haben. Im Gegensatz dazu bezeichnen Tubuli mit mehr Kernen mit normaler Zellmorphologie als erholt. </li><li> Express jedes Röhrchen Einstufung als Prozentsatz der Gesamtzahl Röhrchen. </li></ol></li></ol>

<ol>
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L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage+Wnt7b+is+critical+for+kidney+repair+and+regeneration.">Macrophage Wnt7b is critical for kidney repair and regeneration.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 107, 4194-4199 (2010).</li><li>Lee, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+macrophage+phenotypes+contribute+to+kidney+injury+and+repair.">Distinct macrophage phenotypes contribute to kidney injury and repair.</a> J Am Soc Nephrol. 22, 317-326 (2011).</li><li>Kumar, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dexamethasone+ameliorates+renal+ischemia-reperfusion+injury.">Dexamethasone ameliorates renal ischemia-reperfusion injury.</a> J Am Soc Nephrol. 20, 2412-2425 (2009).</li><li>Sharples, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Erythropoietin+protects+the+kidney+against+the+injury+and+dysfunction+caused+by+ischemia-reperfusion.">Erythropoietin protects the kidney against the injury and dysfunction caused by ischemia-reperfusion.</a> J Am Soc Nephrol. 15, 2115-2124 (2004).</li><li>Gueler, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Statins+attenuate+ischemia-reperfusion+injury+by+inducing+heme+oxygenase-1+in+infiltrating+macrophages.">Statins attenuate ischemia-reperfusion injury by inducing heme oxygenase-1 in infiltrating macrophages.</a> Am J Pathol. 170, 1192-1199 (2007).</li><li>Delbridge, M. S., Shrestha, B. M., Raftery, A. T., ElNahas, A. M., Haylor, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+body+temperature+in+a+rat+model+of+renal+ischemia-reperfusion+injury.">The effect of body temperature in a rat model of renal ischemia-reperfusion injury.</a> Transplant Proc. 39, 2983-2985 (2007).</li></ol>

The authors have no competing or conflicting interests to disclose.

Renal IRI ist eine wichtige Ursache von AKI ohne spezifische Behandlung zur Verfügung. Die experimentelle Untersuchung der Nieren IRI sehr informativ mit früheren Arbeiten zeigen die Rolle von Makrophagen, dendritische Zellen, Lymphozyten, regulatorische T-Zellen als auch andere Zellen und Mediatoren in die Induktion sowohl der akuten Verletzung und Heilung Phase war 5,8 - 16. Zusätzlich experimentelle Nieren IRI verwendet wurde, um die Wirkung verschiedener therapeutischer Mittel 4,17-19 beurte...

Ischämie-Reperfusionsverletzung (IRI) ist eine häufige Art der Verletzung mehrerer Organe, einschließlich Niere, Herz und Gehirn. Renal IRI kann zu akuten Nierenschädigung (AKI) in Patienten zu führen und keine spezifische Behandlung zur Verfügung steht. AKI infolge IRI eine komplizierte Pathogenese den sowohl der angeborenen und erworbenen Immunantwort 1. Ein experimentelles Modell der Nieren IRI bietet die Möglichkeit, die wichtigsten Zellen und Mediatoren in der Pathogenese der AKI sowie die anschließende Nierenregeneration, die über folgenden Tagen erfolgt beteiligt sezieren. Darüber hinaus sind die Auswirkungen der neuen therapeutischen Mittel bei Krankheitsprozessen beurteilt werden kann. Das Gesamtziel des experimentellen Modell der Nieren IRI hier beschrieben ist, um sowohl akuten funktionellen und strukturellen Nierenschädigung zu induzieren. Einige Forscher haben ein Modell, das die Induktion von bilateralen IRI 2 beinhaltet genutzt. Obwohl die bilateralen Nieren IRI-Modell ist der Einsatz, die einseitige ernal IRI-Modell hat den Vorteil einer Nephrektomie rechts zum Zeitpunkt der Operation vorgenommen. Das Recht Nephrektomie Gewebe dient als wertvolle Kontrollgewebe in Studien mit Vorbehandlungsstufe, die entweder induziert oder unterdrückt die Expression eines Gens oder des Proteins. Zum Beispiel haben wir dieses Modell verwendet, um die Wirkung von Häm Präkonditionierung Arginat (HA) Injektion 24 Stunden vor Nieren IRI 3 zu beurteilen. Die erfolgreiche Induktion der zellschützenden Enzyms Häm-Oxygenase-1 (HO-1) von HA vor IRI in die richtige Nephrektomie Kontrollgewebe 4 bestätigt. HA reduzierten Nieren IRI in alten Mäusen zum Teil über eine HO-1-abhängigen Mechanismus. Ebenso haben wir das Modell in Makrophagen-Depletion Studien verwendet, um die Rolle von Makrophagen im Nieren IRI 5 zu prüfen. Immunhistochemische Analyse des rechten Nephrektomie Gewebe kann verwendet werden, um die Wirksamkeit der Ablation Methode zu bestätigen. Das Recht Nephrektomie Gewebe kann daher sowohl bestätigen verwendet werden und auch den Grad von induction oder Hemmung des Moleküls von Interesse in jedem einzelnen Versuchstier. Dieses Modell wird von Interesse für Forscher, die mit Medikamenten oder anderen Verbindungen, die Expression der Gene oder Proteine ​​usw. vor der Induktion der Nieren IRI modulieren. Andere Studien haben Flanke Einschnitte verwendet werden, um die Nieren zu gelangen. Das hier beschriebene Modell verwendet einen einzelnen Mittellinie der Bauchchirurgie, sowohl die rechte Nephrektomie durchführen und induzieren Ischämie Reperfusion der linken Niere. Dieses chirurgische Vorgehen bietet eine hervorragende Visualisierung des Operationsfeldes einschließlich der Nieren Stiele und Farbveränderungen, die die Nierenstielspann folgen. Unsere veröffentlichten Erfahrungen mit dem Modell 6.4 zeigt, dass Mäuse, schnell von der Operation erholen mit einer nahezu 100% Überlebensrate. Schließlich kinetische Analyse der Modell über einen Zeitraum von 7 Tagen zeigt, dass dieses Modell die Wiederherstellung der Nierenfunktion und beide Rohr Integrität, mitsignifikante Rohrzellproliferation.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="676">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:125px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:167px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Tissue scissors</td>
			<td style="width:125px;">Fine Science Tools</td>
			<td>14072 - 10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Micro-Adson forceps (Rat toothed)</td>
			<td style="width:125px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:119px;">11019 - 12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">S&#38;T JFA-5bTC Forceps - SuperGrip Angled</td>
			<td style="width:125px;">Fine Science Tools</td>
			<td>00649-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Colibri retractor</td>
			<td style="width:125px;">Fine Science Tools</td>
			<td>17000 - 04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Micro clip applicator</td>
			<td style="width:125px;">Fine Science Tools</td>
			<td>18057-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Micro serrafines&#160;</td>
			<td style="width:125px;">Fine Science Tools</td>
			<td>18055-04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Olsen-Hegar needle holder</td>
			<td style="width:125px;">Fine Science Tools</td>
			<td>12002 - 12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">Hemoclip Plus Ligating Clips Small</td>
			<td style="width:125px;">Weck</td>
			<td style="width:119px;">533837</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:265px;">Autoclip Wound Clip System, 9mm</td>
			<td style="width:125px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:119px;">PY2 52-3748</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:265px;">Silk Black Braided Suture, Size 6-0</td>
			<td style="width:125px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:119px;">723288</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">Standard Heat Matt</td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:265px;">Homeothermic Blanket &#38; Control Unit</td>
			<td style="width:125px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">Lacri-Lube</td>
			<td style="width:125px;">Allergan</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">Vetasept Chlorhexidine&#160;&#160;</td>
			<td style="width:125px;">AnimalCare</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Vetalar : Ketamine hydrochloride</td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>100mg/ml solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Domitor : medetomidine hydrochloride&#160;</td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>1mg/ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td colspan="2" height="21" style="height:21px;">Vetergesic : Buprenorphine hydrochloride&#160;</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>0.3mg/ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Antisedan : Atipamezole hydrochoride</td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>5mg/ml</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

renal ischaemia reperfusion injury: a mouse model of injury and regeneration

Renale Ischämie Reperfusionsschaden (IRI) ist eine häufige Ursache der akuten Nierenschädigung (AKI) in Patienten-und Verschluss der Nierendurchblutung ist bei Nierentransplantation unumgänglich. Experimentelle Modelle, die genau und reproduzierbar zu rekapitulieren Nieren IRI sind entscheidend bei der Zerlegung der Pathophysiologie des AKI und die Entwicklung neuartiger Therapeutika. Präsentiert hier ist ein Maus-Modell der Nieren IRI, die in reproduzierbarer AKI führt. Dies wird durch eine Mittellinie Laparotomie Ansatz für die Operation mit einem Einschnitt ermöglicht sowohl eine rechte Nephrektomie das Kontrollgewebe und Klemmung der linken Nieren Pedikel Ischämie der linken Niere induzieren stellt erreicht. Durch sorgfältige Überwachung der Spannposition und die Körpertemperatur während der Dauer der Ischämie dieses Modell erzielt reproduzierbare funktionelle und strukturelle Verletzung. Mäuse getötet, 24 Stunden nach der Operation zeigen, Verlust der Nierenfunktion mit Erhöhung des Serum-oder Plasma-Kreatinin-Spiegel sowie Strukturliche Nierenschäden mit akuten Tubulusnekrose offensichtlich. Die Nierenfunktion verbessert und nach Nieren IRI, so dass dieses Modell verwendet werden, um die Nierenregeneration untersuchen die akute Gewebeverletzung löst im Laufe von 7 Tagen. Dieses Modell der Nieren IRI wurde verwendet, um die molekularen und zellulären Pathophysiologie der AKI sowie die Analyse der nachfolgenden Nierenregeneration zu studieren.

Rohrschäden und Wiederherstellung kann von H &amp; E oder beurteilt werden PAS-Färbung von Gewebeschnitten nach Nierentransplantation IRI. Tubuli innerhalb der OSOM liegen so gesund, verletzt, nekrotischen oder die Rückgewinnung nach der Zellmorphologie, Integrität und Keimzahl (Abbildung 1) eingestuft. Die funktionellen und strukturellen Schädigung in diesem Modell ist abhängig von der Dauer der Ischämie. Eine fortschreitende Zunahme der Schwere der Nierenfunktionsstörung, durch Plasma-Kreatini...

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Renal Ischaemia Reperfusion Injury: A Mouse Model of Injury and Regeneration

The mouse model of renal ischaemia reperfusion injury described here comprises of a right nephrectomy that provides control tissue and clamping of the left renal pedicle to induce ischaemia that results in acute kidney injury. This model uses a midline laparotomy approach with all steps performed via one incision.

Renale Ischämie Reperfusionsschaden: Ein Maus-Modell der Schädigung und Regeneration

Renal ischaemia reperfusion injury (IRI) is a common cause of acute kidney injury (AKI) in patients and occlusion of renal blood flow is unavoidable ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

49.3K Aufrufe.  University of Edinburgh. The mouse model of renal ischaemia reperfusion injury described here comprises of a right nephrectomy that provides control tissue and clamping of the left renal pedicle to induce ischaemia that results in acute kidney injury. This model uses a midline laparotomy approach with all steps performed via one incision.

Serie: Renal Ischaemia Reperfusion Injury: A Mouse Model of Injury and Regeneration

Normothermic Cardiac Arrest and Cardiopulmonary Resuscitation: A Mouse Model of Ischemia-Reperfusion Injury

Acute Kidney Injury (AKI) is a common, highly lethal, complication of critical illness which has a high mortality1-4 and which is most 
frequently caused by whole-body hypoperfusion.5,6 Successful reproduction of whole-body hypoperfusion in rodent models has been fraught with 
difficulty.7-9,9,10 Models which employ focal ischemia have repeatedly demonstrated results which do not translate to the clinical setting, and larger 
animal models which allow for whole body hypoperfusion lack access to the full toolset of genetic manipulation possible in the mouse.11,12 However, in recent 
years a mouse model of cardiac arrest and cardiopulmonary resuscitation has emerged which can be adapted to model AKI.13 This model reliably reproduces 
physiologic, functional, anatomic, and histologic outcomes seen in clinical AKI, is rapidly repeatable, and offers all of the significant advantages of a murine surgical 
model, including access to genetic manipulative techniques, low cost relative to large animals, and ease of use. Our group has developed extensive experience 
with use of this model to assess a number of organ-specific outcomes in AKI.14,15

A powerful model for perioperative and critical care related acute kidney injury is presented. Using whole body hypoperfusion induced by cardiac arrest it is possible to nearly replicate the histologic and functional changes of clinical AKI.

Normothermen Herzstillstand und Herz-Lungen: Ein Maus-Modell der Ischämie-Reperfusionsschaden

Acute Kidney Injury (AKI) is a common, highly lethal, complication of critical illness which has a high mortality1-4 and which is most 
frequently caused ...

Forschung

Medizin

Ischemia-reperfusion Model of Acute Kidney Injury and Post Injury Fibrosis in Mice

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often unreported mortality rates that may confound analyses. Bilateral renal pedicle clamping is commonly used to induce IR-AKI, but differences between effective clamp pressures and/or renal responses to ischemia between kidneys often lead to more variable results. In addition, shorter clamp times are known to induce more variable tubular injury, and while mice undergoing bilateral injury with longer clamp times develop more consistent tubular injury, they often die within the first 3 days after injury due to severe renal insufficiency. To improve post-injury survival and obtain more consistent and predictable results, we have developed two models of unilateral ischemia-reperfusion injury followed by contralateral nephrectomy. Both surgeries are performed using a dorsal approach, reducing surgical stress resulting from ventral laparotomy, commonly used for mouse IR-AKI surgeries. For induction of moderate injury BALB/c mice undergo unilateral clamping of the renal pedicle for 26 min and also undergo simultaneous contralateral nephrectomy. Using this approach, 50-60% of mice develop moderate AKI 24 hr after injury but 90-100% of mice survive. To induce more severe AKI, BALB/c mice undergo renal pedicle clamping for 30 min followed by contralateral nephrectomy 8 days after injury. This allows functional assessment of renal recovery after injury with 90-100% survival. Early post-injury tubular damage as well as post injury fibrosis are highly consistent using this model.

We describe models of moderate and severe ischemia-reperfusion-induced kidney injury in which the mice undergo unilateral renal pedicle clamping followed by simultaneous or delayed contralateral nephrectomy, respectively. These models consistently give rise to renal dysfunction and post-injury fibrosis, but injury severity and survival are dependent on mouse background, age and surgical equipment.

Ischämie-Reperfusion-Modell des akuten Nierenschädigung und nach der Verletzung Fibrose bei Mäusen

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often ...

A Neonatal Mouse Spinal Cord Compression Injury Model

Spinal cord injury (SCI) typically causes devastating neurological deficits, particularly through damage to fibers descending from the brain to the spinal cord. A major current area of research is focused on the mechanisms of adaptive plasticity that underlie spontaneous or induced functional recovery following SCI. Spontaneous functional recovery is reported to be greater early in life, raising interesting questions about how adaptive plasticity changes as the spinal cord develops. To facilitate investigation of this dynamic, we have developed a SCI model in the neonatal mouse. The model has relevance for pediatric SCI, which is too little studied. Because neural plasticity in the adult involves some of the same mechanisms as neural plasticity in early life1, this model may potentially have some relevance also for adult SCI. Here we describe the entire procedure for generating a reproducible spinal cord compression (SCC) injury in the neonatal mouse as early as postnatal (P) day 1. SCC is achieved by performing a laminectomy at a given spinal level (here described at thoracic levels 9-11) and then using a modified Yasargil aneurysm mini-clip to rapidly compress and decompress the spinal cord. As previously described, the injured neonatal mice can be tested for behavioral deficits or sacrificed for ex vivo physiological analysis of synaptic connectivity using electrophysiological and high-throughput optical recording techniques1. Earlier and ongoing studies using behavioral and physiological assessment have demonstrated a dramatic, acute impairment of hindlimb motility followed by a complete functional recovery within 2 weeks, and the first evidence of changes in functional circuitry at the level of identified descending synaptic connections1.

This article describes a method for generating a reproducible spinal cord compression injury (SCI) in the neonatal mouse. The model provides an advantageous platform for studying mechanisms of adaptive plasticity that underlie spontaneous functional recovery.

Ein Neonatal Maus Spinal Cord Injury Kompression Modell

Spinal cord injury (SCI) typically causes devastating neurological deficits, particularly through damage to fibers descending from the brain to the spinal ...

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, hypotension, necrotizing enterocolitis, bowel transplantation, trauma and chronic inflammation. Intestinal ischemia-reperfusion (IR) injury is a consequence of acute mesenteric ischemia, caused by inadequate blood flow through the mesenteric vessels, resulting in intestinal damage. Reperfusion following ischemia can further exacerbate damage of the intestine. The mechanisms of IR injury are complex and poorly understood. Therefore, experimental small animal models are critical for understanding the pathophysiology of IR injury and the development of novel therapies.
Here we describe a mouse model of acute intestinal IR injury that provides reproducible injury of the small intestine without mortality. This is achieved by inducing ischemia in the region of the distal ileum by temporally occluding the peripheral and terminal collateral branches of the superior mesenteric artery for 60 min using microvascular clips. Reperfusion for 1 hr, or 2 hr after injury results in reproducible injury of the intestine examined by histological analysis. Proper position of the microvascular clips is critical for the procedure. Therefore the video clip provides a detailed visual step-by-step description of this technique. This model of intestinal IR injury can be utilized to study the cellular and molecular mechanisms of injury and regeneration.

Here we describe the detailed procedure of intestinal ischemia-reperfusion in mice which results in reproducible injury without mortality to encourage the standardization of this technique across the field. This model of intestinal ischemia-reperfusion injury can be utilized to study the cellular and molecular mechanisms of injury and regeneration.

Murine Modell der intestinalen Ischämie-Reperfusionsschaden

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, ...

A Mouse Model of Retinal Ischemia-Reperfusion Injury Through Elevation of Intraocular Pressure

Retinal ischemia-reperfusion (I/R) is a pathophysiological process contributing to cellular damage in multiple ocular conditions, including glaucoma, diabetic retinopathy, and retinal vascular occlusions. Rodent models of I/R injury are providing significant insights into mechanisms and treatment strategies for human I/R injury, especially with regard to neurodegenerative damage in the retinal neurovascular unit. Presented here is a protocol for inducing retinal I/R injury in mice through elevation of intraocular pressure (IOP). In this protocol, the ocular anterior chamber is cannulated with a needle, through which flows the drip of an elevated saline reservoir. Using this drip to raise IOP above systolic arterial blood pressure, a practitioner temporarily halts inner retinal blood flow (ischemia). When circulation is reinstated (reperfusion) by removal of the cannula, severe cellular damage ensues, resulting ultimately in retinal neurodegeneration. Recent studies demonstrate inflammation, vascular permeability, and capillary degeneration as additional elements of this model. Compared to alternative retinal I/R methodologies, such as retinal arterial ligation, retinal I/R injury by elevated IOP offers advantages in its&#160;anatomical specificity, experimental tractability, and technical accessibility, presenting itself as a valuable tool for examining neuronal pathogenesis and therapy in the retinal neurovascular unit.

This article describes a procedure for inducing retinal ischemia-reperfusion injury by elevated intraocular pressure in mice. Retinal ischemia-reperfusion injury by elevated intraocular pressure serves to model human pathologies characterized by compromised oxygen and nutrient delivery in the retina, enabling researchers to examine potential cellular mechanisms and treatments for human diseases of the retinal neurovascular unit.

Ein Maus-Modell der Netzhautischämie-Reperfusionsschaden Durch Erhöhung des intraokularen Druck

Retinal ischemia-reperfusion (I/R) is a pathophysiological process contributing to cellular damage in multiple ocular conditions, including glaucoma, ...

A Mouse Model of Single and Repetitive Mild Traumatic Brain Injury

Mild Traumatic Brain Injury (mTBI) can result in the acute loss of brain function, including a period of confusion, a loss of consciousness (LOC), focal neurological deficits and even amnesia. Athletes participating in contact sports are at high risk of exposure to large number of mTBIs. In terms of the level of injury in a sporting athlete, a mTBI is defined as a mild injury that does not cause gross pathological changes, but does cause short-term neurological deficits that are spontaneously resolved. Despite previous attempts to model mTBI in mice and rats, many have reported gross adverse effects including skull fractures, intracerebral bleeding, axonal injury and neuronal cell death. Herein, we describe our highly reproducible animal model of mTBI that reproduces clinically relevant symptoms. This model uses a custom made pneumatic impactor device to deliver a closed-head trauma. This impact is made under precise velocity and deformation parameters, creating a reliable and reproducible model to examine the mechanisms that contribute to effects of single or repetitive concussive mTBI.

Athletes absorb several hundred mild traumatic brain injuries (mTBI)/concussions every year; however, the consequence of these on the brain is poorly understood. Therefore, an animal model of single and repetitive mTBI that consistently replicates clinically relevant symptoms provides the means to advance the study of mTBI and concussion.

Ein Mausmodell der einzelnen und repetitiven milden traumatischen Gehirnverletzung

Mild Traumatic Brain Injury (mTBI) can result in the acute loss of brain function, including a period of confusion, a loss of consciousness (LOC), focal ...

Evaluation of Coronary Flow Reserve After Myocardial Ischemia Reperfusion in Rats

Coronary artery disease is the leading cause of death worldwide. After an acute myocardial infarction, early and successful myocardial intervention via recanalization of the coronary artery is the most effective strategy for reducing the size of ischemic myocardium. The coronary microvasculature cannot be visualized and imaged&#160;in vivo, but there are several invasive and noninvasive techniques that can be used to assess parameters which depend directly on coronary microvascular function. The endothelial function after ischemia reperfusion can be assessed also at the level of the coronary circulation via the coronary flow reserve (CFR).&#160;In this study, peak velocity of left anterior descending (LAD) coronary arteries was measured in rats in vivo via Transthoracic Doppler Echocardiography during resting and stress challenge (induced by Dobutamine). A normal heart can increase its coronary blood flow up to four times above the resting values during stress induction. Following ischemia reperfusion, we found a significantly diminished CFR, which can be used as a marker of coronary microvascular dysfunction. CFR has opened a window on the importance of microvascular dysfunction and has been shown to predict cardiovascular risk independent of whether the severe obstructive disease is present.

Coronary flow reserve (CFR), is defined as the ratio of maximal coronary blood flow to the resting coronary blood flow. We present a protocol for evaluating CFR in rats via ultrasound, which offers the opportunity to predict cardiovascular risk factors in the absence of obstructive coronary disease.

Bewertung des koronaren Flussreservats nach Myokard-Ischämie-Reperfusion bei Ratten

Coronary artery disease is the leading cause of death worldwide. After an acute myocardial infarction, early and successful myocardial intervention via ...

A Pre-clinical Rat Model for the Study of Ischemia-reperfusion Injury in Reconstructive Microsurgery

Ischemia-reperfusion injury is the main cause of flap failure in reconstructive microsurgery. The rat is the preferred preclinical animal model in many areas of biomedical research due to its cost-effectiveness and its translation to humans. This protocol describes a method to create a preclinical free skin flap model in rats with ischemia-reperfusion injury. The described 3 cm x 6 cm rat free skin flap model is easily obtained after the placement of several vascular ligatures and the section of the vascular pedicle. Then, 8 h after the ischemic insult and completion of the microsurgical anastomosis, the free skin flap develops the tissue damage. These ischemia-reperfusion injury-related damages can be studied in this model, making it a suitable model for evaluating therapeutic agents to address this pathophysiological process. Furthermore, two main monitoring techniques are described in the protocol for the assessment of this animal model: transit-time ultrasound technology and laser speckle contrast analysis.

Here, we describe a pre-clinical animal model for studying the pathophysiology of ischemia-reperfusion injury in reconstructive microsurgery. This free skin flap model based on the superficial caudal epigastric vessels in the rat may also allow for the evaluation of different therapies and compounds to counteract ischemia-reperfusion injury-related damage.

Ein präklinisches Rattenmodell zur Untersuchung von Ischämie-Reperfusionsverletzungen in der rekonstruktiven Mikrochirurgie

Ischemia-reperfusion injury is the main cause of flap failure in reconstructive microsurgery. The rat is the preferred preclinical animal model in many ...

Delayed Intramyocardial Delivery of Stem Cells after Ischemia Reperfusion Injury in a Murine Model

There is significant interest in the use of stem cells (SCs) for the recovery of cardiac function in individuals with myocardial injuries. Most commonly, cardiac stem cell therapy is studied by delivering SCs concurrently with the induction of myocardial injury. However, this approach presents two significant limitations: the early hostile pro-inflammatory ischemic environment may affect the survival of transplanted SCs, and it does not represent the subacute infarction scenario where SCs will likely be used. Here we describe a two-part series of surgical procedures for the induction of ischemia-reperfusion injury and delivery of mesenchymal stem cells (MSCs). This method of stem cell administration may allow for the longer viability and retention around damaged tissue by circumventing the initial immune response. A model of ischemia reperfusion injury was induced in mice accompanied by the delivery of mesenchymal stem cells (3.0 x 105), stably expressing the reporter gene firefly luciferase under the constitutively expressed CMV promoter, intramyocardially 7 days later. The animals were imaged via ultrasound and bioluminescent imaging for confirmation of injury and injection of cells, respectively. Importantly, there was no added complication rate when performing this two-procedure approach for SC delivery. This method of stem cell administration, collectively with the utilization of state-of-the-art reporter genes, may allow for the in vivo study of viability and retention of transplanted SCs in a situation of chronic ischemia commonly seen clinically, while also circumventing the initial pro-inflammatory response. In summary, we established a protocol for the delayed delivery of stem cells into the myocardium, which can be used as a potential new approach in promoting regeneration of the damaged tissue.

Stems cells are continuously investigated as potential treatments for individuals with myocardial damage, however, their decreased viability and retention within injured tissue can impact their long-term efficacy. In this manuscript we describe an alternative method for stem cell delivery in a murine model of ischemia reperfusion injury.

Verzögerte intramyokardiale Lieferung von Stammzellen nach Ischämie-Reperfusionsverletzung in einem Murine-Modell

There is significant interest in the use of stem cells (SCs) for the recovery of cardiac function in individuals with myocardial injuries. Most commonly, ...

A Rat Lung Transplantation Model of Warm Ischemia/Reperfusion Injury: Optimizations to Improve Outcomes

From our experience with rat lung transplantation, we have found several areas for improvement. Information in the existing literature regarding methods for choosing appropriate cuff sizes for the pulmonary vein (PV), pulmonary artery (PA), or bronchus (Br) are varied, thus making the determination of proper cuff size during rat lung transplantation an exercise of trial and error. By standardizing the cuffing technique to use the smallest effective cuff appropriate for the size of the vessel or bronchus, one can make the transplantation procedure safer, faster, and more successful. Since diameters of the PV, PA, and Br are related to the body weight of the rat, we present a strategy to choosing an appropriate size using a weight-based guide. Since lung volume is also related to body weight, we recommend that this relationship should also be considered when choosing the proper volume of air for donor lung inflation during warm ischemia as well as for the proper volume of PBS to be instilled during bronchoalveolar lavage (BAL) fluid collection. We also describe methods for 4th intercostal space dissection, wound closure, and sample collection from both the native and transplanted lobes.

Here, we present optimizations to a rat lung transplantation model that serve to improve outcomes. We provide a size guide for cuffs based on body weight, a measurement strategy to ascertain the 4th intercostal space, and methods of wound closure and BAL (bronchoalveolar lavage) fluid and tissue collection.

Ein Ratten-Lungentransplantationsmodell für warme Ischämie/Reperfusionsschäden: Optimierungen zur Verbesserung der Ergebnisse

From our experience with rat lung transplantation, we have found several areas for improvement. Information in the existing literature regarding methods ...