Dabei handelt es sich um ein Rattenmodell der experimentellen Parodontitis, das auf den Techniken der Lipopolysaccharid-Injektion in Kombination mit der Platzierung von Ligaturen basiert und eine effektive Methode zur Untersuchung des Krankheitsverlaufs und zur Bewertung von Behandlungen für Parodontitis bietet. Die Kombination beider Techniken mit individuellen Methoden führt zu einer schnellen Krankheitsinduktion, die die destruktive Entzündungsreaktion verstärkt und den Verlust von Bindegewebe und Alveolarknochenresorption erhöht. Diese Methode bietet eine wertvolle Möglichkeit, die Wirkung von Parodontitisbehandlungen zu beurteilen.
Dr. Oscar Villa, PhD, wird das Verfahren vorführen. Beginnen Sie mit der Sterilisation aller chirurgischen Instrumente vor der Operation. Bereiten Sie eine Mischung aus Ketamin und Xylazin zu, indem Sie 1,6 Milliliter Ketamin mit einem Milliliter Xylazin, verdünnt in PBS oder Kochsalzlösung, mischen und die Brühe bei vier Grad Celsius lagern.
Verdünnen Sie Atipamezol auf eine Endkonzentration von 0,25 Milligramm pro Milliliter und Buprenorphin auf eine Endkonzentration von 0,03 Milligramm pro Milliliter in PBS oder Kochsalzlösung und lagern Sie die Vorräte bei vier Grad Celsius. Bereiten Sie einen Milliliter PG-LPS in steriler Kochsalzlösung vor und lagern Sie die Brühe bei minus 20 Grad Celsius. Verwenden Sie weibliche und männliche Wistar-Ratten für das Experiment.
Halten Sie die Tiere in Gruppen unter der entsprechenden Umgebung unter, wobei Futter und normales Wasser ad libitum angeboten werden. Nachdem die Ratte betäubt wurde, legen Sie das Tier auf den Rücken auf eine beheizte Operationsplattform. Decken Sie den Körper des Tieres während des Eingriffs ab, um Wärmeverlust zu vermeiden.
Verabreichen Sie 100 % Sauerstoff mit einem kleinen Nasenkegel und überwachen Sie die Pulsfrequenz und Sauerstoffsättigung durch Pulsoximetrie. Öffnen Sie nun das Rattenmaul mit einem Aluminium-Mundknebel um die Schneidezähne. Ziehen Sie die Zunge damit zurück und stabilisieren Sie Ober- und Unterkiefer in einer offenen, bequemen Arbeitsposition, um den Zugang zu den Unterkiefermolaren zu ermöglichen.
Sammeln Sie GCF mit insgesamt vier absorbierenden Papierpunkten Nummer 30, indem Sie es bis zum leichten Widerstand in den Zahnfleischspalt um das Mesiopalatal des M1 einführen. Halten Sie die Papierspitze 30 Sekunden lang in derselben Position, bevor Sie sie sofort entfernen. Nach der Entnahme überführen Sie die Papierspitze sofort in ein Plastikfläschchen und lagern Sie sie bei minus 80 Grad Celsius, bis der Test erfolgreich ist.
Positionieren Sie den distalen Schwanz der Naht auf der Gaumenseite des Gebisses und führen Sie das proximale Segment zwischen dem Kontakt von M1 und den zweiten Oberkiefermolaren ein. Verwenden Sie den periostalen mikrochirurgischen Lift, um die Naht in den Sulkus einzuführen. Wickeln Sie die Ligatur sehr vorsichtig um die bukkale Oberfläche des M1, da das Gewebe auf dieser Ebene eine schmale Zone mit anhaftender Gingiva aufweist.
Stellen Sie sicher, dass die Naht an beiden Enden festgezogen ist, um in den Sulcus des Zahnfleisches getrieben zu werden. Als nächstes binden Sie die Enden der Naht mit einem Chirurgenknoten zusammen und schneiden die Schwänze so kurz wie möglich ab. Führen Sie den Knoten in den Sulkus ein.
Nach der Ligaturpositionierung werden 40 Mikroliter PG-LPS in steriler Kochsalzlösung bilateral in das subgingivale Gewebe an der mesiopalatinalen Seite des M1 injiziert. Um die Ligatur zu untersuchen und anzupassen, legen Sie das betäubte Tier auf den Rücken und verwenden Sie während des Eingriffs einen kleinen Nasenkegel mit 1 % Isofluran und 100 % Sauerstoff zur Aufrechterhaltung der Tieranästhesie. Öffnen Sie den Wickelmund mit dem Aluminium-Mundknebel um die Schneidezähne, ziehen Sie die Zunge mit und stabilisieren Sie Ober- und Unterkiefer in einer offenen, bequemen Arbeitsposition, um den Zugang zu den Ligaturen zu ermöglichen.
Ziehen Sie die Ligaturen mit Hilfe eines periostalen mikrochirurgischen Elevators an der Gingiva fest und stellen Sie sicher, dass die Naht der Ligaturen eingeführt wird, wodurch eine Entzündung um die Gingiva herum entsteht. Nach der Ligaturanpassung werden bilateral 40 Mikroliter PG-LPS in das subgingivale Gewebe an der mesiopalatinalen Seite des M1 injiziert, wie bereits gezeigt. Nachdem Sie das Tier am 14. Tag geopfert haben, sammeln Sie GCF wie zuvor gezeigt.
Übertragen Sie die Papierspitze sofort in ein Plastikfläschchen und lagern Sie sie bei minus 80 Grad Celsius, bis der Test abgeschlossen ist. Die zweidimensionalen Bilder des Alveolarknochens der Oberkiefermolaren zeigen ein höheres Knochenvolumen in der basalen Kontrolle und einen höheren Alveolarknochenverlust nach Etablierung einer Parodontitis. Die Analyse der sagittalen Bilder zeigt einen signifikanteren alveolären Knochenverlust im interradikulären Knochenbereich von M1 und M2 nach Parodontitisetablierung im Vergleich zur basalen Kontrollgruppe.
Nach der Opferung zeigte der Gaumen Unterschiede in der Gingivarezession in der M1 zwischen verschiedenen Gruppen. Die Parodontitisgruppe zeigt im Vergleich zur basalen Kontrollgruppe eine auffälligere apikale Gingivawanderung und Entzündung der Gingiva um die Oberkiefermolaren. Außerdem zeigte die Parodontitisgruppe eine signifikant höhere Freisetzung des proinflammatorischen Zytokins 1L-1 beta aus GCF als die Kontrollgruppe.
Entscheidende Schritte des Verfahrens sind die korrekte Platzierung der Naht und des Knotens im Sulkus, die richtige Einstellung der Ligatur und die genaue Lipopolysaccharid-Injektion während des 14-tägigen Protokolls.
