Diese Forschung wurde durch Zuschüsse der National Natural Science Foundation of China (Grant Nos.82174521), Innovationsprojekt für Doktoranden der Hunan University of Chinese Medicine (2022CX109) unterstützt

Verfahren mit Tieren wurden vom Institutional Care and Use Committee der Hunan University of Chinese Medicine genehmigt.
1. Montage des Rollmassagegeräts
<ol><li>Wählen Sie ein Massagegerät aus, das aus einer Gummirolle, einem Gabelhalter, einer Feder, einer Begrenzungsschallwand, einer Einstellschiene, einer Schraube und einem Acrylgriff besteht (Abbildung 1). Stellen Sie sicher, dass die Gummiwalze 3 cm lang und 1,6 cm im Durchmesser misst, die Feder 3 cm lang und 0,9 cm im Durchmesser misst, die Begrenzungspralle 3 cm lang und 2 cm breit ist und der Griff 12 cm lang und 0,9 cm im Durchmesser misst.</li>
	<li>Kraftkontrolle: Nach den Literaturergebnissen23 wurde festgestellt, dass der Abwärtsdruck der Ding-Rollmethode etwa 10 % des Körpergewichts beträgt, so dass der Druck, der während des Designs des Vorwärtsrollens ausgeübt wird, etwa 10 % des Körpergewichts der Ratte (0,2-0,3 N) beträgt. Testen Sie den maximalen Druck des Massagegeräts auf der Wägesteuerung auf etwa 0,3 N, indem Sie den Winkel der Begrenzungsblende einstellen. Dieser Druckbedarf entspricht den Bedürfnissen der Ratte.</li>
	<li>Stellen Sie sicher, dass der Mindestdruck beim Zurückrollen etwa 0,08 N beträgt (Abbildung 2). Stellen Sie sicher, dass der Druck genau der Anforderung der Ding'schen Rollmethode entspricht, dass das Verhältnis der Vorwärts- und Rückwärtskräfte 3:1 beträgt.</li>
	<li>Bitten Sie den Bediener vor der Behandlung, mit der Metronom-Software zu arbeiten, um die Walzfrequenz auf 140 Rollen/min zu steuern, und üben Sie dies mehr als 3x im Vorversuch, um sicherzustellen, dass der Betrieb standardisiert ist.</li>
</ol>2. Etablierung eines Rattenmodells der Skelettmuskelverletzung
<ol><li>24 männliche Sprague-Dawley-Ratten (mit einem Gewicht von 200-250 g) werden nach dem Zufallsprinzip in drei Gruppen von jeweils acht Ratten aufgeteilt, einschließlich Kontroll- (C), Notexin (NTX) und Notexin mit Tuina (NTX + Tuina), und mit einer Standarddiät gefüttert. Halten Sie einen 12-stündigen Licht-/12-Stunden-Dunkelzyklus bei 20-25 °C und 50%-70% Luftfeuchtigkeit ein.</li>
	<li>Anästhesieren Sie mit 1% Pentobarbital-Natrium (40 mg/kg) durch intraperitoneale Injektion und entfernen Sie dann Haare von der rechten unteren Extremität mit Haarentfernungscreme. Nachdem Sie das Fell entfernt haben, wischen Sie die restliche Creme mit Kochsalzlösung ab. Bestätigen Sie eine angemessene Anästhesie durch Einkneifen der Zehen. Tragen Sie eine Augensalbe auf, um die Augen mit Feuchtigkeit zu versorgen, während das Tier unter Narkose steht. Bieten Sie während des gesamten Eingriffs thermische Unterstützung.</li>
	<li>Abwechselnde Hautdesinfektion der rechten unteren Extremität mit Jodophor-Desinfektionslösung und 75%igem Alkohol vor der Injektion. Berühren Sie ein in Jodophor-Desinfektionslösung getränktes Wattestäbchen in der Mitte der Haut der unteren Extremität und tragen Sie es in kreisenden Bewegungen nach außen auf. Wiederholen Sie den Vorgang mit einem mit Ethanol getränkten Wattestäbchen.</li>
	<li>Erstellung von Modellen für Skelettmuskelverletzungen gemäß der Referenzmethode24. Injizieren Sie Notexin nur in ein Bein (um eine doppelte Notexin-Injektion zu verhindern). Ziehen Sie 200 μl Notexinlösung (10 μg/ml Notexinlösung, hergestellt durch Zugabe von 100 μg Notexin zu 10 ml normaler Kochsalzlösung in einem 15-ml-Zentrifugenröhrchen) in eine 1-ml-Spritze mit einer 30-g-Nadel und injizieren Sie die Notexinlösung intramuskulär in den Gastrocnemius-Muskel, um eine Muskelverletzung zu verursachen.</li>
	<li>Injizieren Sie das Notexin langsam und warten Sie 3 Sekunden, bevor Sie die Nadel herausziehen (um vollständig injiziert zu werden). VORSICHT: Notexin ist eine giftige Chemikalie, die bei Kontakt mit einer offenen Wunde sofort mit viel Wasser gespült und bei Bedarf sofort ärztlich versorgt werden muss.</li>
	<li>Injizieren Sie den Ratten in der Kontrollgruppe 200 μl Kochsalzlösung. Bringen Sie betäubte Ratten in leere Käfige mit sauberer Einstreu. Achte darauf, die Polsterung um Nase und Mund der Ratten zu entfernen, damit sie frei atmen können. Beobachten Sie visuell die Gewebefarbe und die Atemfrequenz am Ende der Injektion, bis die Ratten wieder ausreichend zu Bewusstsein kommen.</li>
	<li>Bringen Sie Ratten in den häuslichen Käfig zurück und ziehen Sie sie in der Regel 24 Stunden lang auf.</li>
</ol>3. Tuina-Therapie
<ol><li>Legen Sie eine SD-Ratte in Bauchlage, wobei der Kopf mit einem schwarzen Tuch bedeckt ist, auf die mit 75%igem Alkohol desinfizierte Versuchsplattform, um den Gastrocnemius-Muskel freizulegen. Nicht zu fest abdecken.</li>
	<li>Verwendung des Tuina-Massagegeräts für die NTX+Tuina-Gruppe: Halten Sie das Massagegerät und legen Sie die Rolle auf den Gastrocnemius-Muskel der Ratte und rollen Sie nach vorne, bis die Feder die Begrenzungsschallwand berührt. Ziehen Sie dann die Kraft zurück und kehren Sie in ihre ursprüngliche Position zurück, wodurch die Bewegung hin- und hergeht (Abbildung 3).</li>
	<li>Rollen Sie das Massagegerät mit einer Geschwindigkeit von 140 Rollen pro Minute und führen Sie jeden Vorgang 3 Minuten lang durch. Führen Sie die Massagen an 3 aufeinanderfolgenden Tagen einmal morgens und einmal nachmittags durch.</li>
	<li>Bringen Sie die Ratten nach jeder Behandlung in den häuslichen Käfig zurück und fasten Sie 8 Stunden nach der letzten Behandlung.</li>
</ol>4. Entnahme von Blut und Gewebe von Ratten nach dem Experiment
<ol><li>Ratten sind gemäß den Vorgaben der zuständigen Tierversuchs-Ethikkommission durch intraperitoneale Injektion von 1 % Pentobarbital-Natrium (40 mg/kg, intraperitoneale Injektion) zu betäuben. Bestätigen Sie eine angemessene Anästhesie durch Einkneifen der Zehen. Euthanasie von Ratten durch Aderlass der Bauchaorta nach der Blutentnahme.</li>
	<li>Wechseln Sie die Hautdesinfektion mit Jodophor-Desinfektionslösung und 75%igem Alkohol vor der Injektion ab. Berühren Sie ein in Povidon-Jod getränktes Wattestäbchen in der Mitte der Bauchhaut und tragen Sie es in kreisenden Bewegungen nach außen auf. Wiederholen Sie den Vorgang mit einem mit Ethanol getränkten Wattestäbchen. Desinfektion 3x wiederholen.</li>
	<li>Bitten Sie den Assistenten, zwei Hämostate zu verwenden, um die Haut in der Mitte des Bauches anzuheben. Verwenden Sie als Operateur ein Skalpell, um die Bauchhaut und die Muskeln von der Raphe bis zur Schambeinfuge zu durchtrennen.</li>
	<li>Nach dem Öffnen der Bauchhöhle trennen Sie den Darm mit sterilen Wattebäuschen, um die Bauchschlagader in der hinteren Bauchdecke freizulegen.</li>
	<li>Lokalisieren Sie die Bauchschlagader, entnehmen Sie 5 ml Rattenblut in Blutentnahmeröhrchen und erhalten Sie das Plasma in 1,5 Mikroröhrchen, indem Sie 10 Minuten lang bei 3000 x g zentrifugieren, nachdem Sie 1 Stunde lang Blut gestanden haben. Plasma bei -80 °C lagern.</li>
	<li>Schneiden Sie die Haut mit einer chirurgischen Schere entlang der unteren Bauchöffnung in Richtung der seitlichen Seite der rechten unteren Extremität auf, legen Sie die Muskeln der unteren Extremitäten frei, und schneiden Sie nach vorsichtiger Trennung der Faszie mit einer Pinzette das Skalpell ab, um den intakten Gastrocnemius-Muskel zu entfernen.</li>
	<li>Waschen Sie den Gastrocnemius-Muskel in steriler Kochsalzlösung, um anhaftende Haare und Blut zu entfernen.</li>
	<li>Legen Sie den entfernten Gastrocnemius-Muskel in ein 15-ml-Zentrifugenröhrchen, das 4 % Paraformaldehyd enthält.</li>
</ol>5. Nachweis von CK- und FABP-3-Plasmaspiegeln mittels ELISA
<ol><li>Berechnen und bestimmen Sie die Anzahl der vorgewickelten Platten, die für ein Experiment erforderlich sind. Entfernen Sie die erforderlichen Platten, legen Sie sie in den 96-Well-Rahmen, legen Sie die restlichen Mikrotiterplatten zum Verschließen wieder in den Aluminiumfolienbeutel und lagern Sie sie bei 4 °C.</li>
	<li>Die Kits und Proben werden bei Raumtemperatur (25-28 °C) für 120 Minuten ausgeglichen und vollständig auf Raumtemperatur gebracht. HINWEIS: Die Äquilibrierung des Kits und der Probe ist kritisch und muss auf eine ausreichende Zeit äquilibriert werden.</li>
	<li>Legen Sie Standard-, Proben- und Blindvertiefungen fest. 50 μl CK- oder FABP3-Standard in unterschiedlichen Konzentrationen (100, 50, 25, 12,5, 6,25, 0 ng/ml) in die Standardvertiefungen geben. Wiederholen Sie jeden Standard einmal und belegen Sie insgesamt 12 Vertiefungen.</li>
	<li>Füllen Sie die Probenvertiefungen mit 40 μl Probenverdünnungsmittel (0,8 g NaCl, 0,02 g KH2PO 4, 0,29 g Na2HPO412H2O,0,02 g KCl, 0,01 gNaN3in 100 ml doppelt destilliertem Wasser, pH7,4), gefolgt von 10 μl der zu testenden Probe. Wiederholen Sie jede Probe einmal und belegen Sie insgesamt 48 Vertiefungen.</li>
	<li>Mit Ausnahme der Leervertiefungen, die sich zwei Vertiefungen hinter der letzten Probenvertiefung befinden, geben Sie 100 μl HRP-markierten Anti-Human-CK- oder FABP3-Antikörper (enzymmarkierter Antikörper) in jede Standard- und Probenvertiefung.</li>
	<li>Die Vertiefungen mit Siegelfolie verschließen und im 37 °C warmen Wasserbad oder Thermostat 60 min inkubieren.</li>
	<li>Entsorgen Sie die Flüssigkeit, tupfen Sie sie auf saugfähigem Papier trocken, füllen Sie jede Vertiefung mit Waschflüssigkeit, lassen Sie sie 20 s einwirken, schütteln Sie die Waschflüssigkeit ab, tupfen Sie sie auf Löschpapier trocken und wiederholen Sie das Waschen der Platte 5 Mal (oder verwenden Sie eine Tellerwaschmaschine).</li>
	<li>50 μl Chromogenlösung A (20 mg Tetramethylbenzidin, 10 ml Ethanol in 100 ml doppelt destilliertem Wasser) und 50 μl Chromogenlösung B (0,1 m/l Zitronensäure, 0,2 m/l Natriumdihydrogenphosphatpuffer, pH 5,0-5,4) in jede Vertiefung geben. 15 Minuten bei 37 °C von Licht fernhalten.</li>
	<li>Bei Standard-Wells, Proben-Wells und Blind-Wells werden 50 μl Terminierungslösung in jede Vertiefung gegeben und der optische Dichtewert jedes Wells bei 450 nm innerhalb von 15 Minuten gemessen.</li>
</ol>6. Histologische Analyse der Notexin-induzierten Gastrocnemius-Muskelverletzung bei Ratten
<ol><li>5 μm dicke Paraffinschnitte, die mit Hämatoxylin und Eosin gefärbt sind, werden für die lichtmikroskopische Untersuchung wie in25 beschrieben vorbereitet.</li>
</ol>7. Bildverarbeitung und Datenanalyse
<ol><li>Lesen und analysieren Sie die vom Bildgebungssystem aufgenommenen Bilder mit einer Analysesoftware. Verschieben Sie das ausgewählte Bildfeld mit der Maus in die Mitte des Bildschirms, klicken Sie auf 40x, und klicken Sie dann auf Schnappschuss erstellen.</li>
	<li>Zeichnen Sie die OD-Werte aus dem ELISA in einer Tabelle auf und berechnen Sie die CK- und FABP3-Werte der Ratte in den Proben anhand der Standardkurve.</li>
	<li>Verwenden Sie für die statistischen Analysen eine Software für statistische Analysen. Drücken Sie die Messungen als Mittelwert ± Standardabweichung (<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/65820/65820eq01.jpg" style="margin: auto;">) aus und analysieren Sie die Vergleiche zwischen den Gruppen mittels einseitiger ANOVA, mit dem LSD-Test, wenn die Varianz gleichmäßig war, und der Tamhane-T2-Methode, wenn die Varianz nicht gleichmäßig war. Die Differenz wurde bei einem p-Wert von weniger als 0,05 als statistisch signifikant angesehen.</li>
</ol>

Ein Massagegerät, das auf der Ding-Rollenmanipulation basiert, um Muskelverletzungen in einem Rattenmodell zu behandeln

<ol>
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Die Autoren haben nichts zu verraten.

Hier beschrieben wir ein Protokoll für die Tuina-Behandlung von Skelettmuskelverletzungen bei Ratten und analysierten dann den Grad der Skelettmuskelverletzung nach der Behandlung, um die Wirksamkeit der Methode zu überprüfen. Insbesondere können Modelle zur Verletzung der Skelettmuskulatur von Ratten, einschließlich, aber nicht beschränkt auf die Induktion von Medikamenten (Notexin, Bupivacain)16, die stumpfe Prellung26, die Quetschung27 und d...

Muskelverletzungen sind häufige traumatische Verletzungen im klinischen und täglichen Leben, die durch äußere Schläge (Prellungen) oder chronische Überlastung von Muskelfasern (Zerrungen) usw. verursacht werden und zu Muskelfunktionsstörungen und Schmerzen führen, die sogar die Lebensqualität des Patienten ernsthaft beeinträchtigen1. Ein möglichst frühzeitiger Beginn der Rehabilitation nach einer akuten Zerrungsverletzung ist der Schlüssel, um die Zeit bis zur Rückkehr zum Sport2 zu verkürzen und die Schmerzen zu lindern 3,4. In der modernen westlichen Medizin folgt die klinische Erste Hilfe bei Muskelverletzungen den Prinzipien von Ruhe, Eis, Kompression und Hochlagerung (RICE), um verletzende Blutungen in das Muskelgewebe zu stoppen5 und nichtsteroidale Antirheumatika zur Schmerzlinderung6. Die Entdeckung neuartiger Therapien wie Exosomen7 und Tissue Engineering8 wurden zu potenziellen Behandlungsstrategien für Skelettmuskelerkrankungen und kompensierten die Mängel früherer pharmakologischer Behandlungen. Sie kann jedoch auch die Behandlungskosten für die Patienten erhöhen und sie unter enormen finanziellen Druck setzen9. Daher werden alternative und komplementäre Therapien zur Behandlung von Problemen des Bewegungsapparates empfohlen10. Tuina ist in China als traditionelle medizinische Methode weit verbreitet und bei Patienten wegen seiner Wirksamkeit und weniger Nebenwirkungen beliebt. Die Tuina-Therapie bei Erkrankungen des Bewegungsapparates kann Schmerzen lindern und die Funktion verbessern11,12,13. Herr Ding Jifeng, ein berühmter Tuina-Praktizierender aus Shanghai, begründete Dings Rollmethode14. Es handelt sich um eine einzigartige Walz- und Zerkleinerungstechnik mit einer großen Kraftfläche, gleichmäßiger und sanfter Kraft und intensivem Eindringen.
Unterschiedliche Tiermodelle basieren auf unterschiedlichen Ätiologien. Sie haben Vor- und Nachteile, und die Auswahl korrekter und geeigneter Tiermodelle ist von großer Bedeutung für grundlegende Experimente, die helfen, die zellulären und molekularen Signalwege der Regeneration und Reparatur nach Skelettmuskelverletzungen zu verstehen, um neue Therapien zur Behandlung von Skelettmuskelerkrankungen zu entwickeln. Chemisch induzierte Modelle von Muskelverletzungen sind weit verbreitet, wobei Injektionen von Skelettmuskeln eine Myokularnekrose verursachen und regenerierte Bereiche erzeugen, die sich innerhalb von 2 Wochen effektiv regenerieren können15. Sowohl Notexin als auch Bupivacain können Muskelschäden verursachen. Notexin kann jedoch schwerere myotoxische Schäden an der Skelettmuskulatur verursachen als Bupivacain, und die natürliche funktionelle Erholung ist relativ langsam16. Das intramuskuläre Spritzgießen von Medikamenten nimmt nicht nur weniger Zeit in Anspruch, sondern hat auch kontrollierte Auswirkungen und das Ausmaß der Skelettmuskelschäden. Diese quantifizierbare Kontrolle macht eine erfolgreiche Formgebung weniger schwierig15,17.
Die Entzündungsreaktion ist eine wesentliche biologische Reaktion, die im Zusammenhang mit der Myopathie ausführlich untersucht wurde18,19. In den frühen Stadien der Skelettmuskelverletzung stört die Myofasernekrose die lokale Muskelhomöostase, und viele Entzündungszellen infiltrieren die Verletzungsstelle und sezernieren viele entzündungsfördernde Zytokine19. Die Kreatinkinase (CK) ist ein traditioneller Serum-Biomarker zur Beurteilung von Skelettmuskelverletzungen. Es fehlt jedoch die Gewebespezifität20 und die Sensitivität21, was seine Fähigkeit einschränkt, das Ausmaß der medikamenteninduzierten Muskelschädigung zu beurteilen und indirekt über das Ausmaß der Muskelregeneration nach einer Verletzung zu berichten. Neuartige Biomarker, darunter das Fettsäure-bindende Protein 3 (FABP3), haben kürzlich eine relativ hohe Gewebespezifität und -sensitivität in Nagetiermodellen für Skelettmuskelverletzungen gezeigt. FABP3 ist eine Familie von Bindungsproteinen, die hauptsächlich in Herz- und Skelettmuskelzellen exprimiert werden und am Fettsäurestoffwechsel, -transport und -signalweg beteiligt sind22. Daher wählten wir eine Kombination aus zwei Biomarkern, CK und FABP3, um das Ausmaß der Notexin-induzierten Skelettmuskelschädigung und die Erholung nach der Behandlung zu beurteilen.
Bei Nagetieren sind die Muskeln flach und der Hautbereich ist klein, was auch bestimmt, dass die verschiedenen Parameter der Massage bei Nagetieren nicht die gleichen sind wie beim Menschen, wie z. B. in der Tiertherapie, der Masseur sollte sie mit weniger Kraft mit der Ding-Rollmethode behandeln und ist aufgrund der geringen Größe des verletzten Bereichs möglicherweise nicht förderlich für die Durchführung dieser Technik. was letztendlich zu einer Verringerung der Wirksamkeit der Massage führen kann. Daher wurde in dem Experiment das selbst hergestellte Rollmassagegerät verwendet, das den Merkmalen der Ding-Rollmethode entspricht, um zu intervenieren und die therapeutische Wirkung des Notexin-induzierten Skelettmuskelverletzungsmodells bei Ratten zu bewerten, was dazu beiträgt, die Parameter von Tuina in experimentellen Tierversuchen zu standardisieren, um den molekularen Wirkmechanismus von Tuina eingehend zu untersuchen. eine Behandlungsmethode der traditionellen chinesischen Medizin bei Erkrankungen des Bewegungsapparates.

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	<tbody>
		<tr>
			<td>1 mL syringe</td>
			<td>JIANGXI FENGLIN</td>
			<td>20220521</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 microtubes&#160;</td>
			<td>Servicebio</td>
			<td>EP-150X-J</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL centrifuge tube</td>
			<td>Servicebio</td>
			<td>EP-1501-J</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30G needle</td>
			<td>CONPUVON</td>
			<td>220318</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL blood collection tube</td>
			<td>Servicebio</td>
			<td>QX0023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acrylic handle</td>
			<td>Guangdong Guangxingwang Plastic Materials Co., Ltd</td>
			<td>65643645</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adjustment splint</td>
			<td>CREROMEM</td>
			<td>20220729</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton Swab</td>
			<td>INOHV</td>
			<td>22080215</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Enzyme-labeled Instrument</td>
			<td>Rayto</td>
			<td>RT-6100&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>INOHV</td>
			<td>211106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fork holder</td>
			<td>Yongkang Kangzhe Health Technology Co., Ltd</td>
			<td>JL001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hair removal cream</td>
			<td>Veet, France</td>
			<td>LOTC190922002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin dyeing solution set</td>
			<td>Wuhan Google Biotech</td>
			<td>G1005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaging system&#160;</td>
			<td>Nikon, Japan</td>
			<td>Nikon DS-U3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IODOPHOR disfecting solution</td>
			<td>Hale&#38;Hearty</td>
			<td>20221205</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light microscope</td>
			<td>Nikon, Japan</td>
			<td>Nikon Eclipse E100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Limit baffle</td>
			<td>CREROMEM</td>
			<td>20220724</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Notexin</td>
			<td>Latoxan S.A.S.</td>
			<td>L8104-100UG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentobarbital sodium</td>
			<td>Merck KGaA</td>
			<td>P3761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat creatine kinase (CK) ELISA kit</td>
			<td>LunChangShuoBiotech</td>
			<td>YD-35237</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat fatty acid-binding protein 3 (FABP3) ELISA kit</td>
			<td>LunChangShuoBiotech</td>
			<td>YD-35730</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber roller</td>
			<td>Hebei Mgkui Chemical Technology Co.,Ltd</td>
			<td>202207</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Screw</td>
			<td>Weiyan Hardware</td>
			<td>B05Z122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sprague Dawley rats</td>
			<td>Hunan Slake Kingda Laboratory Animal Co.</td>
			<td>SYXK2019-0009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spring</td>
			<td>Bingzhang Hardware</td>
			<td>TH001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical blade</td>
			<td>Covetrus</td>
			<td>#23</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Weigh controller</td>
			<td>Iyoys</td>
			<td>HY-XSQ</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

mimicking ding's roll method on notexin-induced muscle injury in rats

Die Ding-Roll-Methode ist eine der am häufigsten verwendeten Manipulationen in traditionellen chinesischen Massagekliniken (Tuina) und eine der einflussreichsten zeitgenössischen Tuina-Manipulationen in China. Sie basiert auf der traditionellen Rollmethode, die im Ein-Finger-Zen-Genre üblich ist und als Ding-Rollmethode bezeichnet wird. Aufgrund ihrer entzündungshemmenden und durchblutungsfördernden Wirkung hat die Ding-Rollmethode eine fundierte therapeutische Wirkung bei Myopathie. Aufgrund der großen Kraftfläche, die auf die menschliche Haut ausgeübt wird, ist die Rollmethode von Ding bei Versuchstieren mit kleinen Hautbereichen, wie Ratten und Kaninchen, eine Herausforderung. Darüber hinaus unterscheidet sich die Stärke von Tuina, die auf den menschlichen Körper angewendet wird, von derjenigen, die auf Versuchstiere angewendet wird, so dass es vorkommen kann, dass die Stärke zu hoch oder zu niedrig ist, um die therapeutische Wirkung von Tuina während des Experiments zu erzielen. Dieses Experiment zielt darauf ab, ein einfaches Massagegerät zu entwickeln, das für Ratten geeignet ist, basierend auf den Rollmanipulationsparametern von Ding (Stärke, Frequenz, Tuina-Dauer). Das Gerät kann die Manipulation in Tierversuchen standardisieren und die Variation der Tuina-Kraft, die auf verschiedene Tiere angewendet wird, aufgrund subjektiver Faktoren reduzieren. Es wurde ein Rattenmodell für Notexin-induzierte Skelettmuskelverletzungen etabliert und die Plasmaverletzungsmarker Kreatinkinase (CK) und Fettsäurebindungsprotein 3 (FABP3) verwendet, um die therapeutische Wirkung von Tuina auf Skelettmuskelverletzungen zu bewerten. Die Ergebnisse zeigten, dass dieses Tuina-Massagegerät die CK- und FABP3-Expression reduzieren und den Grad der Skelettmuskelverletzung verlangsamen konnte. Daher trägt das hier beschriebene Tuina-Massagegerät, das die Rollmethode von Ding nachahmt, zur Standardisierung der Tuina-Manipulation in der experimentellen Forschung bei und ist eine große Hilfe für die anschließende Erforschung des molekularen Mechanismus von Tuina bei Myopathie.

Muscle injuries are common traumatic injuries in clinical and daily life, caused by external blows (contusions) or chronic overstrain of muscle fibers (strains), etc., resulting in muscle dysfunction and pain, even seriously affecting the patient&#39;s quality of life1. Starting rehabilitation as early as possible after an acute strain injury is the key to reducing the time to return to sports2&#160;and in reducing pain3,4. In modern Western medicine, clinical first aid for muscle injuries follows the principles of rest, ice, compression, and elevation (RICE) to stop injurious bleeding into the muscle tissue5&#160;and non-steroidal anti-inflammatory drugs to relieve pain6. The discovery of novel therapies such as exosomes7&#160;and tissue engineering8&#160;became potential treatment strategies for skeletal muscle diseases, compensating for previous pharmacological treatments&#39; shortcomings. However, it can also increase the cost of treatment for patients, putting them under tremendous financial pressure9. Therefore, alternative and complementary therapies are recommended for treating musculoskeletal problems10. Tuina is widely used clinically in China as a traditional medical method and is popular among patients for its efficacy and fewer side effects. Tuina therapy for musculoskeletal disorders can alleviate pain and improve function11,12,13. Mr. Ding Jifeng, a famous Shanghai Tuina practitioner, founded Ding&#39;s roll method14. It is a unique rolling and crushing technique with a large force area, uniform and gentle force, and intense penetration.
Different animal models are based on different etiologies. They have advantages and disadvantages, and the selection of correct and appropriate animal models is of great significance to basic experiments, which helps understand the cellular and molecular signaling pathways of regeneration and repair after skeletal muscle injury to develop new therapies for treating the treatment of skeletal muscle diseases. Chemically induced models of muscle injury are widely used, with injections of skeletal muscle causing myofiber necrosis and producing regenerated areas that can effectively regenerate within 2 weeks15. Both notexin and bupivacaine can cause muscle damage. However, notexin can cause more severe myotoxic damage to skeletal muscle than bupivacaine, and natural functional recovery is relatively slower16. Drug intramuscular injection molding not only takes less time but also has controlled effects and extent of skeletal muscle damage. This quantifiable control makes successful molding less difficult15,17.
Inflammatory response is an essential biological response that has been extensively studied in the context of myopathy18,19. In the early stages of skeletal muscle injury, myofiber necrosis disrupts local muscle homeostasis, and many inflammatory cells infiltrate the injury site, secreting many pro-inflammatory cytokines19. Creatine kinase (CK) is a traditional serum biomarker for assessing skeletal muscle injury. However, it lacks tissue specificity20&#160;and sensitivity21, which limits its ability to assess the extent of drug-induced muscle damage and indirectly report the extent of muscle recovery after injury. Novel biomarkers, including fatty acid binding protein 3 (FABP3), have recently shown relatively high tissue specificity and sensitivity in rodent models of skeletal muscle injury. FABP3 is a family of binding proteins expressed primarily in cardiac and skeletal muscle cells and implicated in fatty acid metabolism, transport, and signaling22. Therefore, we chose a combination of two biomarkers, CK and FABP3, to assess the extent of notexin-induced skeletal muscle damage and recovery after treatment.
In rodents, the muscles are shallow, and the skin area is small, which also determines that the various parameters of massage in rodents will not be the same as in humans, such as in animal therapy, the massage therapist should treat them with less force using Ding&#39;s roll method, and may not be conducive to the operation of this technique due to the small size of the injured area, which can ultimately lead to a reduction in the effectiveness of the massage. Therefore, the experiment utilized the rolling massager made in-house, which conforms to the characteristics of Ding&#39;s roll method, to intervene and evaluate the therapeutic effect of the notexin-induced skeletal muscle injury model in rats, which helps to standardize the parameters of Tuina in experimental animal studies in order to profoundly investigate the molecular mechanism of action of Tuina, a traditional Chinese medicine treatment method, on musculoskeletal diseases.

Autor im Rampenlicht: Durchführung der Tuina-Massage bei Ratten mit einem selbstgebauten Massagegerät 

Nachahmung von Dings Rollmethode bei Notexin-induzierter Muskelverletzung bei Ratten

The scope of our research is the biological mechanism of tuina in the treatment of musculoskeletal diseases. Here we are trying to make the self-made tuina device to standardize and effectively perform tuina treatments on laboratory animals. We are addressing the inability to perform this rolling manipulation with pairs by creating a massager that can simulate this rolling manipulation on rats, and verifying the effectiveness of the massager on rats with muscle injuries.We will focus on the questions of how efficacious the rolling massager is on the skeletal muscle injury in rats under different parameters in future standardized research.

Um die morphologischen Eigenschaften des Rattenskelettmuskels nach einer Verletzung zu beobachten, wurde der Musculus gastrocnemius mit Hämatoxylin und Eosin gefärbt und die gefärbten Bilder wurden mit einer Analysesoftware ausgelesen, wie im Protokoll für 8 Ratten pro Gruppe beschrieben. Bei Ratten mit einer durch Notexin induzierten Gastrocnemius-Muskelverletzung (NTX-Gruppe) waren viele Muskelzellen gerissen, atrophisch, nekrotisch und unregelmäßig angeordnet. Es gab auch eine hohe Infiltration von Neutrophilen ...

Watch this Scientific Journal Video about Performing Tuina Massage in Rats Using a Self-Made Massager at JoVE.com

Dieses Protokoll beschreibt ein einfaches Gerät, das die Rollmethode von Ding nachahmt, ein Rattenmodell für Skelettmuskelverletzungen erstellt und Hämatoxylin-Eosin-Färbung verwendet, um die Pathologie von geschädigtem Gewebe zu beobachten, und einen enzymgebundenen Immunsorbent-Assay verwendet, um Veränderungen der Serumschadensmarker zu erkennen.

Ding's roll method is one of the most commonly used manipulations in traditional Chinese massage (Tuina) clinics and one of the most influential ...

Das Ziel unserer Forschung ist der biologische Mechanismus von Tuina bei der Behandlung von Erkrankungen des Bewegungsapparates. Hier versuchen wir, das selbstgebaute Tuina-Gerät herzustellen, um Tuina-Behandlungen an Labortieren zu standardisieren und effektiv durchzuführen. Wir beheben die Unfähigkeit, diese rollende Manipulation mit Paaren durchzuführen, indem wir ein Massagegerät entwickeln, das diese rollende Manipulation an Ratten simulieren kann, und die Wirksamkeit des Massagegeräts bei Ratten mit Muskelverletzungen überprüfen.Wir werden uns in zukünftigen standardisierten Untersuchungen auf die Frage konzentrieren, wie wirksam das rollende Massagegerät auf die Skelettmuskelverletzung bei Ratten unter verschiedenen Parametern ist.

mimicking-ding-s-roll-method-on-notexin-induced-muscle-injury-in-rats

Research

JoVE Journal

Medicine

Mimicking Ding's Roll Method on Notexin-Induced Muscle Injury in Rats

542 Aufrufe.  Hunan University of Chinese Medicine. Das Ziel unserer Forschung ist der biologische Mechanismus von Tuina bei der Behandlung von Erkrankungen des Bewegungsapparates. Hier versuchen wir, das selbstgebaute Tuina-Gerät herzustellen, um Tuina-Behandlungen an Labortieren zu standardisieren und effektiv durchzuführen. Wir beheben die Unfähigkeit, diese rollende Manipulation mit Paaren durchzuführen, indem wir ein Massagegerät entwickeln, das diese rollende Manipulation an Ratten simulieren kann, und die Wirksamkeit des Massageger...

Serie: Autor im Rampenlicht: Durchführung der Tuina-Massage bei Ratten mit einem selbstgebauten Massagegerät 

Ding's roll method is one of the most commonly used manipulations in traditional Chinese massage (Tuina) clinics and one of the most influential contemporary Tuina manipulations in China. It is based on the traditional rolling method commonly used in the one finger Zen genre and named Ding's roll method. Due to its anti-inflammatory and blood circulation-promoting effects, Ding's rolling method has sound therapeutic effects on myopathy. Because of the large area of force applied to human skin, Ding's roll method is challenging to perform on experimental animals with small skin areas, such as rats and rabbits. Additionally, the strength of Tuina applied to the human body differs from that applied to experimental animals, so it may happen that the strength is too high or too low to achieve the therapeutic effect of Tuina during the experiment. This experiment aims to create a simple massager suitable for rats based on Ding's rolling manipulation parameters (strength, frequency, Tuina duration). The device can standardize manipulation in animal experiments and reduce the variation in Tuina force applied to different animals due to subjective factors. A rat model of notexin-induced skeletal muscle injury was established, and plasma injury markers creatine kinase (CK) and fatty acid binding protein 3 (FABP3) were used to assess the therapeutic effect of Tuina on skeletal muscle injury. The results showed that this Tuina massager could reduce the levels of CK and FABP3 expression and slow down the degree of skeletal muscle injury. Therefore, the Tuina massager described here, mimicking Ding's roll method, contributes to standardizing Tuina manipulation in experimental research and is of great help for subsequent research on the molecular mechanism of Tuina for myopathy.

This protocol describes a simple device that mimics Ding's roll method, establishes a rat model of skeletal muscle injury, and uses hematoxylin-eosin staining to observe the pathology of damaged tissue and enzyme-linked immunosorbent assay to detect changes in serum damage markers.

Forschung

Medizin

Assembly of a Rolling Massager for Tuina Therapy

To begin, select a massager that consists of a rubber roller of length three centimeters and diameter 1.6 centimeters, a fork holder, and a three-centimeter long spring of diameter 0.9 centimeters. The roller should also consist of a limit baffle three centimeters long and two centimeters wide, an adjustment splint, a screw, and an acrylic handle measuring 12 centimeters in length and 0.9 centimeters in diameter. To control the force in the Ding's roll method, test the maximum pressure of the massager on the weighing controller.Ensure the force is about 0.3 newton by adjusting the angle of the limit baffle. Next, ensure the minimum pressure is about 0.08 newton when rolling back. Before treatment, familiarize yourself with the metronome application to control the rolling frequency to 140 rolls per minute, and practice this more than three times to standardize the operation.

Montage eines Rollmassagegeräts für die Tuina-Therapie

Establishment of a Rat Model of Skeletal Muscle Injury

Begin by randomly dividing the rats into three groups of eight rats each, including control, notexin, and notexin with tuina groups. Remove the hair from the right lower limb with hair removal cream after anesthetizing the rat. Then disinfect the skin with three alternating rounds of iota four disinfecting solution and 75%alcohol in a circular outward motion.To establish the skeletal muscle injury model, use a one milliliter syringe with a 30 gauge needle to inject the notexin solution intramuscularly into the gastrocnemius muscle in only one leg. Wait for three seconds before pulling out the needle. Inject the rats in the control group with 200 microliters of saline solution.Move anesthetized rats to empty cages with clean bedding. Visually observe the tissue color and respiratory rate until the rats regain sufficient consciousness. Return the rats to the home cage and typically rear them for 24 hours.The morphological properties of rat skeletal muscle after injury were observed by hematoxylin and eosin staining. The gastrocnemius muscle injured by notexin injection showed the rupture of many muscle cells compared to controls. The cells were atrophic, necrotic, and irregularly arranged, with a high infiltration of neutrophils and lymphocytes around the affected area.

Etablierung eines Rattenmodells der Skelettmuskelverletzung

Tuina Therapy in Rat Model of Skeletal Muscle Injury

First, induce skeletal muscle injury in rats using notexin. To perform therapy, place the rat on the experimental platform in a prone position. Cover its head with a black cloth to expose the gastrocnemius muscle.Next, hold the massager and place the roller on the gastrocnemius muscle of the rat. Roll forward until the spring contacts the limit baffle. Then retract the force and return to its original position, thereby reciprocating movement.Roll the massager at a speed of 140 rolls per minute. Perform each operation for three minutes for three consecutive days. Return the rats to the home cage after each treatment and fast for eight hours after the last treatment.After Tuina treatment with the rolling massager, the morphology of muscle cells improved in the gastrocnemius muscle injured by notexin injection. As observed by hematoxylin and eosin staining, fewer ruptured atrophic and necrotic cells and only a small number of inflammatory cells were observed as compared to the injured muscle. Also, the levels of skeletal muscle injury markers CK and FABP3 were analyzed using Eliza.These markers were markedly decreased in the Tuina group compared to the notexin group, suggesting that Tuina can reduce damage to skeletal muscle.

Tuina-Therapie im Rattenmodell der Skelettmuskelverletzung

Blood and Tissue Collection from Rats After Tuina Therapy

Begin by placing the anesthetized animal on the operation table. Disinfect the skin with three alternate swabs of Iodophor disinfecting solution and 75%alcohol. Use two hemostats to lift the skin in the middle of the abdomen.Use a scalpel to cut through the abdominal skin and muscles from the raphe to the pubic synthesis. After opening the abdominal cavity, separate the bowel with sterile cotton balls. To expose the abdominal aorta in the posterior abdominal wall, locate the abdominal aorta and take five milliliters of rat blood into blood collection tubes.Keep the tubes containing the blood standing for one hour and centrifuge at 3000 G for 10 minutes to obtain the plasma. To collect the gastrocnemius muscle, cut open the skin with surgical scissors along the lower abdominal opening toward the lateral aspect of the right lower limb, and expose the lower limb muscles. After carefully separating the fascia with forceps, cut using a scalpel to remove the intact gastrocnemius muscle.Wash the gastrocnemius muscle in sterile saline to remove adhering hair and blood, and place the removed gastrocnemius muscle into a 15 milliliter centrifuge tube containing 4%Paraformaldehyde.