Questa ricerca è stata supportata da sovvenzioni della National Natural Science Foundation of China (Grant Nos.82174521), progetto di innovazione per studenti laureati dell'Università di medicina cinese di Hunan (2022CX109)

Le procedure che coinvolgono gli animali sono state approvate dal Comitato Istituzionale per la Cura e l'Uso presso l'Università di Medicina Cinese di Hunan.
1. Montaggio del massaggiatore rotante
<ol><li>Selezionare un massaggiatore composto da un rullo di gomma, un supporto per forcella, una molla, un deflettore di limite, una stecca di regolazione, una vite e un'impugnatura in acrilico (Figura 1). Assicurarsi che il rullo di gomma misuri 3 cm di lunghezza e 1,6 cm di diametro, la molla misuri 3 cm di lunghezza e 0,9 cm di diametro, il deflettore di limite sia lungo 3 cm e largo 2 cm e l'impugnatura misuri 12 cm di lunghezza e 0,9 cm di diametro.</li>
	<li>Controllo della forza: secondo i risultati della letteratura23, la pressione verso il basso del metodo di rollio di Ding è risultata essere circa il 10% del peso corporeo, quindi la pressione applicata durante la progettazione del rotolamento in avanti è di circa il 10% del peso corporeo del ratto (0,2-0,3 N). Verificare che la pressione massima del massaggiatore sul controller di pesatura sia di circa 0,3 N regolando l'angolo del deflettore limite. Questo requisito di pressione soddisfa le esigenze del ratto.</li>
	<li>Assicurarsi che la pressione minima sia di circa 0,08 N durante il rollback (Figura 2). Assicurarsi che la pressione sia esattamente conforme al requisito del metodo di rollio di Ding che il rapporto tra le forze in avanti e all'indietro sia di 3:1.</li>
	<li>Prima del trattamento, chiedere all'operatore di lavorare con il software del metronomo per controllare la frequenza di rotolamento a 140 rotoli/min e di esercitarsi più di 3 volte nel pre-esperimento per garantire che l'operazione sia standardizzata.</li>
</ol>2. Creazione di un modello di ratto di lesione del muscolo scheletrico
<ol><li>Dividi in modo casuale 24 ratti maschi Sprague-Dawley (del peso di 200-250 g) in tre gruppi di otto ratti ciascuno, inclusi il controllo (C), la notexina (NTX) e la notexina con Tuina (NTX + Tuina) e nutri con una dieta standard. Mantenere un ciclo di 12 ore di luce/12 ore di buio, casa a 20-25 °C e 50%-70% di umidità.</li>
	<li>Anestetizzare con pentobarbital sodico all'1% (40 mg/kg) mediante iniezione intraperitoneale e quindi rimuovere i peli dall'arto inferiore destro con crema depilatoria. Dopo aver rimosso il pelo, strofinare la crema residua con soluzione fisiologica. Confermare l'anestesia adeguata con la risposta al pizzicamento delle dita dei piedi. Applicare un unguento oftalmico per idratare gli occhi mentre l'animale è sotto anestesia. Fornire supporto termico durante tutta la procedura.</li>
	<li>Disinfezione cutanea alternata per l'arto inferiore destro con soluzione disinfettante iodoforo e alcol al 75% prima dell'iniezione. Toccare un batuffolo di cotone imbevuto di soluzione disinfettante iodoforo al centro della pelle dell'arto inferiore e applicare con un movimento circolare verso l'esterno. Ripeti con un batuffolo di cotone imbevuto di etanolo.</li>
	<li>Stabilire modelli di lesione del muscolo scheletrico secondo il metododi riferimento 24. Iniettare notexin in una sola gamba (per evitare la doppia iniezione di notexina). Prelevare 200 μL di soluzione di notexina (soluzione di notexina da 10 μg/mL preparata aggiungendo 100 μg di notexina a 10 mL di soluzione fisiologica normale in una provetta da centrifuga da 15 mL) in una siringa da 1 mL con un ago da 30 G e iniettare la soluzione di notexina per via intramuscolare nel muscolo gastrocnemio per produrre lesioni muscolari.</li>
	<li>Inietti la notexina lentamente e attenda 3 s prima di estrarre l'ago (da iniettare completamente). ATTENZIONE: Notexin è una sostanza chimica tossica che richiede un lavaggio immediato con abbondante acqua al contatto con una ferita aperta e una pronta assistenza medica se necessario.</li>
	<li>Iniettare nei ratti del gruppo di controllo 200 μL di soluzione salina. Sposta i ratti anestetizzati in gabbie vuote con lettiera pulita. Fai attenzione a rimuovere l'imbottitura intorno al naso e alla bocca dei ratti per mantenere la loro respirazione libera. Osservare visivamente il colore dei tessuti e la frequenza respiratoria alla fine dell'iniezione fino a quando i ratti non riacquistano sufficiente coscienza.</li>
	<li>Riportare i ratti nella gabbia di casa e in genere allevarli per 24 ore.</li>
</ol>3. Terapia Tuina
<ol><li>Posizionare un ratto SD in posizione prona con la testa coperta da un panno nero sulla piattaforma sperimentale disinfettata con alcol al 75% per esporre il muscolo gastrocnemio. Non coprire troppo strettamente.</li>
	<li>Utilizzo del massaggiatore Tuina per il gruppo NTX+Tuina: Tenere il massaggiatore e posizionare il rullo sul muscolo gastrocnemio del ratto e rotolare in avanti fino a quando la molla non entra in contatto con il deflettore limite. Quindi ritrarre la forza e tornare alla sua posizione originale, alternando così il movimento (Figura 3).</li>
	<li>Ruotare il massaggiatore a una velocità di 140 rotoli al minuto ed eseguire ogni operazione per 3 minuti. Eseguire i massaggi una volta al mattino e una volta al pomeriggio per 3 giorni consecutivi.</li>
	<li>Rimettere i ratti nella gabbia di casa dopo ogni trattamento e digiunare per 8 ore dopo l'ultimo trattamento.</li>
</ol>4. Raccolta di sangue e tessuti dai ratti dopo l'esperimento
<ol><li>Secondo i requisiti del comitato etico competente per gli esperimenti sugli animali, anestetizzare i ratti mediante iniezione intraperitoneale di pentobarbital sodico all'1% (40 mg/kg, iniezione intraperitoneale). Confermare l'anestesia adeguata con la risposta al pizzicamento delle dita dei piedi. Sopprimere i ratti con un salasso dell'aorta addominale dopo il prelievo di sangue.</li>
	<li>Alternare la disinfezione cutanea con soluzione disinfettante iodoforo e alcol al 75% prima dell'iniezione. Toccare un batuffolo di cotone imbevuto di iodio povidone al centro della pelle addominale e applicare con movimenti circolari verso l'esterno. Ripeti con un batuffolo di cotone imbevuto di etanolo. Ripetere la disinfezione 3 volte.</li>
	<li>Chiedi all'assistente di usare due emostatici per sollevare la pelle al centro dell'addome. Come operatore, usa un bisturi per tagliare la pelle addominale e i muscoli dal rafe alla sinfisi pubica.</li>
	<li>Dopo aver aperto la cavità addominale, separare l'intestino con batuffoli di cotone sterili per esporre l'aorta addominale nella parete addominale posteriore.</li>
	<li>Localizzare l'aorta addominale, prelevare 5 ml di sangue di ratto in provette di raccolta del sangue e ottenere il plasma in 1,5 microprovette centrifugando a 3000 x g per 10 minuti dopo aver tenuto in piedi il sangue per 1 ora. Conservare il plasma a -80 °C.</li>
	<li>Tagliare la pelle con le forbici chirurgiche lungo l'apertura addominale inferiore verso l'aspetto laterale dell'arto inferiore destro, esponendo i muscoli dell'arto inferiore, e dopo aver separato accuratamente la fascia con una pinza, tagliare il bisturi per rimuovere il muscolo gastrocnemio intatto.</li>
	<li>Lavare il muscolo gastrocnemio in soluzione fisiologica sterile per rimuovere i peli e il sangue aderenti.</li>
	<li>Mettere il muscolo gastrocnemio rimosso in una provetta da centrifuga da 15 ml contenente il 4% di paraformaldeide.</li>
</ol>5. Rilevazione dei livelli plasmatici di CK e FABP 3 mediante ELISA
<ol><li>Calcolare e determinare il numero di piastre preconfezionate necessarie per un esperimento. Rimuovere le piastre necessarie, inserirle nel telaio a 96 pozzetti, rimettere le micropiastre rimanenti nel sacchetto di alluminio per la sigillatura e conservarle a 4 °C.</li>
	<li>Equilibrare i kit e i campioni a temperatura ambiente (25-28 °C) per 120 minuti, in equilibrio completo a temperatura ambiente. NOTA: L'equilibrazione del kit e del campione è fondamentale e deve essere bilanciata per un tempo sufficiente.</li>
	<li>Impostare pozzetti standard, campioni e vuoti. Aggiungere 50 μL di standard CK o FABP3 a diverse concentrazioni (100, 50, 25, 12,5, 6,25, 0 ng/mL) ai pozzetti standard. Ripetere ogni standard una volta, occupando un totale di 12 pozzetti.</li>
	<li>Riempire i pozzetti del campione con 40 μL di diluente del campione (0,8 g NaCl, 0,02 g KH 2PO 4, 0,29 g Na 2 HPO 4 12H2O, 0,02g KCl, 0,01 g NaN3in 100 mL di acqua bidistillata, pH7,4), seguiti da 10 μL del campione da testare. Ripetere ogni campione una volta, occupando 48 pozzetti in totale.</li>
	<li>Fatta eccezione per i pozzetti vuoti situati due pozzetti dietro l'ultimo pozzetto del campione, aggiungere 100 μL di anticorpo CK o FABP3 (anticorpo marcato con enzimi) marcato con HRP a ciascun pozzetto standard e campione.</li>
	<li>Sigillare i pozzetti con pellicola sigillante e incubare a bagnomaria a 37 °C o termostato per 60 minuti.</li>
	<li>Scartare il liquido, asciugare tamponando su carta assorbente, riempire ogni pozzetto con detersivo, lasciare agire per 20 s, scuotere il liquido di lavaggio, asciugare tamponando su carta assorbente e ripetere il lavaggio del piatto 5 volte (o utilizzare una lavapiatti).</li>
	<li>Aggiungere 50 μL di soluzione cromogenica A (20 mg di tetrametilbenzidina 10 mL di etanolo in 100 mL di acqua bidistillata) e 50 μL di soluzione cromogenica B (0,1 M/L di acido citrico, 0,2 M/L di tampone fosfato monobasico di sodio, pH 5,0-5,4) in ciascun pozzetto. Conservare al riparo dalla luce per 15 minuti a 37 °C.</li>
	<li>Per pozzetti standard, pozzetti campione e pozzetti vuoti, aggiungere 50 μL di soluzione di terminazione a ciascun pozzetto e misurare il valore di densità ottica di ciascun pozzetto a 450 nm entro 15 minuti.</li>
</ol>6. Analisi istologica del danno muscolare gastrocnemio indotto da notexina nei ratti
<ol><li>Preparare sezioni di paraffina spesse 5 μm colorate con ematossilina ed eosina per l'esame microscopico ottico come descritto alpunto 25.</li>
</ol>7. Elaborazione delle immagini e analisi dei dati
<ol><li>Leggere e analizzare le immagini acquisite dal sistema di imaging con il software di analisi. Spostare il campo visivo dell'immagine selezionata al centro dello schermo con il mouse, fare clic su 40x, quindi fare clic su Scatta istantanea.</li>
	<li>Registrare i valori OD dell'ELISA in un foglio di calcolo e calcolare i livelli di CK e FABP3 nei ratti nei campioni utilizzando la curva standard.</li>
	<li>Utilizzare software di analisi statistica per le analisi statistiche. Esprimere le misurazioni come media ± deviazione standard (<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/65820/65820eq01.jpg" style="margin: auto;">), e analizzare i confronti tra i gruppi mediante ANOVA unidirezionale, con il test LSD quando la varianza era uniforme e il metodo Tamhane T2 quando la varianza non era uniforme. La differenza è stata considerata statisticamente significativa con un valore p inferiore a 0,05.</li>
</ol>

Un massaggiatore basato sulla manipolazione del rullo di Ding per trattare le lesioni muscolari in un modello di ratto

<ol>
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Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Qui, abbiamo descritto un protocollo per il trattamento Tuina della lesione muscolare scheletrica nei ratti e poi abbiamo analizzato il grado di lesione muscolare scheletrica dopo il trattamento per verificare l'efficacia del metodo. In particolare, i modelli di danno muscolare scheletrico di ratto, inclusi, a titolo esemplificativo ma non esaustivo, l'induzione di farmaci (notexina, bupivacaina)16, contusione contusiva 26, schiacciamento27 e ischemia-riperfusione<sup class...

Le lesioni muscolari sono lesioni traumatiche comuni nella vita clinica e quotidiana, causate da colpi esterni (contusioni) o sovraccarico cronico delle fibre muscolari (stiramenti), ecc., con conseguente disfunzione muscolare e dolore, compromettendo anche seriamente la qualità di vita del paziente1. Iniziare la riabilitazione il prima possibile dopo una lesione da sforzo acuto è la chiave per ridurre il tempo di ritorno allo sport2 e per ridurre il dolore 3,4. Nella moderna medicina occidentale, il primo soccorso clinico per le lesioni muscolari segue i principi di riposo, ghiaccio, compressione ed elevazione (RICE) per fermare l'emorragia dannosa nel tessuto muscolare5 e farmaci antinfiammatori non steroidei per alleviare il dolore6. La scoperta di nuove terapie come gli esosomi7 e l'ingegneria tissutale8 sono diventate potenziali strategie di trattamento per le malattie del muscolo scheletrico, compensando le carenze dei precedenti trattamenti farmacologici. Tuttavia, può anche aumentare il costo del trattamento per i pazienti, sottoponendoli a un'enorme pressione finanziaria9. Pertanto, si raccomandano terapie alternative e complementari per il trattamento dei problemi muscoloscheletrici10. Tuina è ampiamente utilizzato clinicamente in Cina come metodo medico tradizionale ed è popolare tra i pazienti per la sua efficacia e per i minori effetti collaterali. La terapia Tuina per i disturbi muscoloscheletrici può alleviare il dolore e migliorare la funzione11,12,13. Il signor Ding Jifeng, un famoso praticante Tuina di Shanghai, ha fondato il metodo14 del rotolo di Ding. È una tecnica unica di rotolamento e frantumazione con un'ampia area di forza, una forza uniforme e delicata e un'intensa penetrazione.
Diversi modelli animali si basano su diverse eziologie. Hanno vantaggi e svantaggi e la selezione di modelli animali corretti e appropriati è di grande importanza per gli esperimenti di base, che aiutano a comprendere le vie di segnalazione cellulare e molecolare di rigenerazione e riparazione dopo una lesione del muscolo scheletrico per sviluppare nuove terapie per il trattamento delle malattie del muscolo scheletrico. I modelli di lesioni muscolari indotti chimicamente sono ampiamente utilizzati, con iniezioni di muscolo scheletrico che causano necrosi delle miofibre e producono aree rigenerate che possono rigenerarsi efficacemente entro 2 settimane15. Sia la notexina che la bupivacaina possono causare danni muscolari. Tuttavia, la notexina può causare danni miotossici più gravi al muscolo scheletrico rispetto alla bupivacaina e il recupero funzionale naturale è relativamente più lento16. Lo stampaggio a iniezione intramuscolare di farmaci non solo richiede meno tempo, ma ha anche effetti controllati e l'entità del danno muscolare scheletrico. Questo controllo quantificabile rende meno difficile il successo dello stampaggio15,17.
La risposta infiammatoria è una risposta biologica essenziale che è stata ampiamente studiata nel contesto della miopatia18,19. Nelle prime fasi della lesione muscolare scheletrica, la necrosi delle miofibre interrompe l'omeostasi muscolare locale e molte cellule infiammatorie si infiltrano nel sito della lesione, secernendo molte citochine pro-infiammatorie19. La creatinchinasi (CK) è un biomarcatore sierico tradizionale per la valutazione delle lesioni muscolari scheletriche. Tuttavia, manca di specificità tissutale20 e sensibilità21, il che limita la sua capacità di valutare l'entità del danno muscolare indotto da farmaci e di segnalare indirettamente l'entità del recupero muscolare dopo la lesione. Nuovi biomarcatori, tra cui la proteina legante gli acidi grassi 3 (FABP3), hanno recentemente mostrato una specificità e una sensibilità tissutale relativamente elevate nei modelli di roditori di lesioni muscolari scheletriche. FABP3 è una famiglia di proteine leganti espresse principalmente nelle cellule muscolari cardiache e scheletriche e implicate nel metabolismo, nel trasporto e nella segnalazione degli acidi grassi22. Pertanto, abbiamo scelto una combinazione di due biomarcatori, CK e FABP3, per valutare l'entità del danno muscolare scheletrico indotto da notexina e il recupero dopo il trattamento.
Nei roditori, i muscoli sono poco profondi e l'area della pelle è piccola, il che determina anche che i vari parametri del massaggio nei roditori non saranno gli stessi degli esseri umani, come nella terapia animale, il massaggiatore dovrebbe trattarli con meno forza usando il metodo del rotolo di Ding e potrebbe non essere favorevole al funzionamento di questa tecnica a causa delle piccole dimensioni dell'area ferita, che alla fine può portare a una riduzione dell'efficacia del massaggio. Pertanto, l'esperimento ha utilizzato il massaggiatore rotante realizzato internamente, conforme alle caratteristiche del metodo di rotolamento di Ding, per intervenire e valutare l'effetto terapeutico del modello di lesione muscolare scheletrica indotta da notexina nei ratti, che aiuta a standardizzare i parametri di Tuina negli studi sperimentali sugli animali al fine di indagare a fondo il meccanismo molecolare di azione di Tuina, un metodo di trattamento della medicina tradizionale cinese, sulle malattie muscoloscheletriche.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 mL syringe</td>
			<td>JIANGXI FENGLIN</td>
			<td>20220521</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 microtubes&#160;</td>
			<td>Servicebio</td>
			<td>EP-150X-J</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL centrifuge tube</td>
			<td>Servicebio</td>
			<td>EP-1501-J</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30G needle</td>
			<td>CONPUVON</td>
			<td>220318</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL blood collection tube</td>
			<td>Servicebio</td>
			<td>QX0023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acrylic handle</td>
			<td>Guangdong Guangxingwang Plastic Materials Co., Ltd</td>
			<td>65643645</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adjustment splint</td>
			<td>CREROMEM</td>
			<td>20220729</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton Swab</td>
			<td>INOHV</td>
			<td>22080215</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Enzyme-labeled Instrument</td>
			<td>Rayto</td>
			<td>RT-6100&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>INOHV</td>
			<td>211106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fork holder</td>
			<td>Yongkang Kangzhe Health Technology Co., Ltd</td>
			<td>JL001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hair removal cream</td>
			<td>Veet, France</td>
			<td>LOTC190922002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin dyeing solution set</td>
			<td>Wuhan Google Biotech</td>
			<td>G1005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaging system&#160;</td>
			<td>Nikon, Japan</td>
			<td>Nikon DS-U3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IODOPHOR disfecting solution</td>
			<td>Hale&#38;Hearty</td>
			<td>20221205</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light microscope</td>
			<td>Nikon, Japan</td>
			<td>Nikon Eclipse E100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Limit baffle</td>
			<td>CREROMEM</td>
			<td>20220724</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Notexin</td>
			<td>Latoxan S.A.S.</td>
			<td>L8104-100UG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentobarbital sodium</td>
			<td>Merck KGaA</td>
			<td>P3761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat creatine kinase (CK) ELISA kit</td>
			<td>LunChangShuoBiotech</td>
			<td>YD-35237</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat fatty acid-binding protein 3 (FABP3) ELISA kit</td>
			<td>LunChangShuoBiotech</td>
			<td>YD-35730</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber roller</td>
			<td>Hebei Mgkui Chemical Technology Co.,Ltd</td>
			<td>202207</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Screw</td>
			<td>Weiyan Hardware</td>
			<td>B05Z122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sprague Dawley rats</td>
			<td>Hunan Slake Kingda Laboratory Animal Co.</td>
			<td>SYXK2019-0009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spring</td>
			<td>Bingzhang Hardware</td>
			<td>TH001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical blade</td>
			<td>Covetrus</td>
			<td>#23</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Weigh controller</td>
			<td>Iyoys</td>
			<td>HY-XSQ</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

mimicking ding's roll method on notexin-induced muscle injury in rats

Il metodo del rotolo di Ding è una delle manipolazioni più comunemente usate nelle cliniche di massaggio tradizionale cinese (Tuina) e una delle manipolazioni Tuina contemporanee più influenti in Cina. Si basa sul tradizionale metodo di rotolamento comunemente usato nel genere Zen con un dito e chiamato metodo di rotolamento di Ding. Grazie ai suoi effetti antinfiammatori e di promozione della circolazione sanguigna, il metodo di rotolamento di Ding ha effetti terapeutici sulla miopatia. A causa dell'ampia area di forza applicata alla pelle umana, il metodo di rotolamento di Ding è difficile da eseguire su animali da esperimento con piccole aree cutanee, come ratti e conigli. Inoltre, la forza del Tuina applicata al corpo umano differisce da quella applicata agli animali da esperimento, quindi può accadere che la forza sia troppo alta o troppo bassa per ottenere l'effetto terapeutico del Tuina durante l'esperimento. Questo esperimento mira a creare un semplice massaggiatore adatto ai ratti basato sui parametri di manipolazione del rotolamento di Ding (forza, frequenza, durata del Tuina). Il dispositivo può standardizzare la manipolazione negli esperimenti sugli animali e ridurre la variazione della forza Tuina applicata a diversi animali a causa di fattori soggettivi. È stato stabilito un modello di ratto di lesione muscolare scheletrica indotta da notexina e sono stati utilizzati marcatori di lesione plasmatica creatinchinasi (CK) e proteina legante gli acidi grassi 3 (FABP3) per valutare l'effetto terapeutico di Tuina sulla lesione muscolare scheletrica. I risultati hanno mostrato che questo massaggiatore Tuina potrebbe ridurre i livelli di espressione di CK e FABP3 e rallentare il grado di lesione del muscolo scheletrico. Pertanto, il massaggiatore Tuina qui descritto, imitando il metodo del rullo di Ding, contribuisce a standardizzare la manipolazione Tuina nella ricerca sperimentale ed è di grande aiuto per le successive ricerche sul meccanismo molecolare del Tuina per la miopatia.

Muscle injuries are common traumatic injuries in clinical and daily life, caused by external blows (contusions) or chronic overstrain of muscle fibers (strains), etc., resulting in muscle dysfunction and pain, even seriously affecting the patient&#39;s quality of life1. Starting rehabilitation as early as possible after an acute strain injury is the key to reducing the time to return to sports2&#160;and in reducing pain3,4. In modern Western medicine, clinical first aid for muscle injuries follows the principles of rest, ice, compression, and elevation (RICE) to stop injurious bleeding into the muscle tissue5&#160;and non-steroidal anti-inflammatory drugs to relieve pain6. The discovery of novel therapies such as exosomes7&#160;and tissue engineering8&#160;became potential treatment strategies for skeletal muscle diseases, compensating for previous pharmacological treatments&#39; shortcomings. However, it can also increase the cost of treatment for patients, putting them under tremendous financial pressure9. Therefore, alternative and complementary therapies are recommended for treating musculoskeletal problems10. Tuina is widely used clinically in China as a traditional medical method and is popular among patients for its efficacy and fewer side effects. Tuina therapy for musculoskeletal disorders can alleviate pain and improve function11,12,13. Mr. Ding Jifeng, a famous Shanghai Tuina practitioner, founded Ding&#39;s roll method14. It is a unique rolling and crushing technique with a large force area, uniform and gentle force, and intense penetration.
Different animal models are based on different etiologies. They have advantages and disadvantages, and the selection of correct and appropriate animal models is of great significance to basic experiments, which helps understand the cellular and molecular signaling pathways of regeneration and repair after skeletal muscle injury to develop new therapies for treating the treatment of skeletal muscle diseases. Chemically induced models of muscle injury are widely used, with injections of skeletal muscle causing myofiber necrosis and producing regenerated areas that can effectively regenerate within 2 weeks15. Both notexin and bupivacaine can cause muscle damage. However, notexin can cause more severe myotoxic damage to skeletal muscle than bupivacaine, and natural functional recovery is relatively slower16. Drug intramuscular injection molding not only takes less time but also has controlled effects and extent of skeletal muscle damage. This quantifiable control makes successful molding less difficult15,17.
Inflammatory response is an essential biological response that has been extensively studied in the context of myopathy18,19. In the early stages of skeletal muscle injury, myofiber necrosis disrupts local muscle homeostasis, and many inflammatory cells infiltrate the injury site, secreting many pro-inflammatory cytokines19. Creatine kinase (CK) is a traditional serum biomarker for assessing skeletal muscle injury. However, it lacks tissue specificity20&#160;and sensitivity21, which limits its ability to assess the extent of drug-induced muscle damage and indirectly report the extent of muscle recovery after injury. Novel biomarkers, including fatty acid binding protein 3 (FABP3), have recently shown relatively high tissue specificity and sensitivity in rodent models of skeletal muscle injury. FABP3 is a family of binding proteins expressed primarily in cardiac and skeletal muscle cells and implicated in fatty acid metabolism, transport, and signaling22. Therefore, we chose a combination of two biomarkers, CK and FABP3, to assess the extent of notexin-induced skeletal muscle damage and recovery after treatment.
In rodents, the muscles are shallow, and the skin area is small, which also determines that the various parameters of massage in rodents will not be the same as in humans, such as in animal therapy, the massage therapist should treat them with less force using Ding&#39;s roll method, and may not be conducive to the operation of this technique due to the small size of the injured area, which can ultimately lead to a reduction in the effectiveness of the massage. Therefore, the experiment utilized the rolling massager made in-house, which conforms to the characteristics of Ding&#39;s roll method, to intervene and evaluate the therapeutic effect of the notexin-induced skeletal muscle injury model in rats, which helps to standardize the parameters of Tuina in experimental animal studies in order to profoundly investigate the molecular mechanism of action of Tuina, a traditional Chinese medicine treatment method, on musculoskeletal diseases.

Autore in primo piano: Esecuzione del massaggio Tuina nei ratti utilizzando un massaggiatore autocostruito 

Imitazione del metodo di rotolamento di Ding sulla lesione muscolare indotta da Notexin nei ratti

Al fine di osservare le proprietà morfologiche del muscolo scheletrico di ratto dopo la lesione, il muscolo gastrocnemio è stato colorato con ematossilina ed eosina e le immagini colorate sono state lette con un software di analisi come descritto nel protocollo per 8 ratti per gruppo. Nei ratti con lesione del muscolo gastrocnemio indotta da notexina (gruppo NTX), molte cellule muscolari erano rotte, atrofiche, necrotiche e disposte in modo irregolare. C'era anche un'elevata infiltrazione di neutrofili e linfociti into...

Watch this Scientific Journal Video about Performing Tuina Massage in Rats Using a Self-Made Massager at JoVE.com

Questo protocollo descrive un semplice dispositivo che imita il metodo del rullo di Ding, stabilisce un modello di ratto di lesione muscolare scheletrica e utilizza la colorazione ematossilina-eosina per osservare la patologia del tessuto danneggiato e il test di immunoassorbimento enzimatico per rilevare i cambiamenti nei marcatori di danno sierico.

Ding's roll method is one of the most commonly used manipulations in traditional Chinese massage (Tuina) clinics and one of the most influential ...

Lo scopo della nostra ricerca è il meccanismo biologico del tuina nel trattamento delle malattie muscoloscheletriche. Qui stiamo cercando di realizzare il dispositivo tuina autocostruito per standardizzare ed eseguire efficacemente trattamenti tuina su animali da laboratorio. Stiamo affrontando l'impossibilità di eseguire questa manipolazione del rotolamento con le coppie creando un massaggiatore in grado di simulare questa manipolazione del rotolamento sui ratti e verificando l'efficacia del massaggiatore sui ratti con lesioni muscolari.Ci concentreremo sulle domande sull'efficacia del massaggiatore rotante sulla lesione del muscolo scheletrico nei ratti in base a diversi parametri in una futura ricerca standardizzata.

mimicking-ding-s-roll-method-on-notexin-induced-muscle-injury-in-rats

Research

JoVE Journal

Medicine

Mimicking Ding's Roll Method on Notexin-Induced Muscle Injury in Rats

575 Views.  Hunan University of Chinese Medicine. Lo scopo della nostra ricerca è il meccanismo biologico del tuina nel trattamento delle malattie muscoloscheletriche. Qui stiamo cercando di realizzare il dispositivo tuina autocostruito per standardizzare ed eseguire efficacemente trattamenti tuina su animali da laboratorio. Stiamo affrontando l'impossibilità di eseguire questa manipolazione del rotolamento con le coppie creando un massaggiatore in grado di simulare questa manipolazione del rotolamento sui ratti e verificando l'efficacia d...

Video: Autore in primo piano: Esecuzione del massaggio Tuina nei ratti utilizzando un massaggiatore autocostruito 

Ding's roll method is one of the most commonly used manipulations in traditional Chinese massage (Tuina) clinics and one of the most influential contemporary Tuina manipulations in China. It is based on the traditional rolling method commonly used in the one finger Zen genre and named Ding's roll method. Due to its anti-inflammatory and blood circulation-promoting effects, Ding's rolling method has sound therapeutic effects on myopathy. Because of the large area of force applied to human skin, Ding's roll method is challenging to perform on experimental animals with small skin areas, such as rats and rabbits. Additionally, the strength of Tuina applied to the human body differs from that applied to experimental animals, so it may happen that the strength is too high or too low to achieve the therapeutic effect of Tuina during the experiment. This experiment aims to create a simple massager suitable for rats based on Ding's rolling manipulation parameters (strength, frequency, Tuina duration). The device can standardize manipulation in animal experiments and reduce the variation in Tuina force applied to different animals due to subjective factors. A rat model of notexin-induced skeletal muscle injury was established, and plasma injury markers creatine kinase (CK) and fatty acid binding protein 3 (FABP3) were used to assess the therapeutic effect of Tuina on skeletal muscle injury. The results showed that this Tuina massager could reduce the levels of CK and FABP3 expression and slow down the degree of skeletal muscle injury. Therefore, the Tuina massager described here, mimicking Ding's roll method, contributes to standardizing Tuina manipulation in experimental research and is of great help for subsequent research on the molecular mechanism of Tuina for myopathy.

This protocol describes a simple device that mimics Ding's roll method, establishes a rat model of skeletal muscle injury, and uses hematoxylin-eosin staining to observe the pathology of damaged tissue and enzyme-linked immunosorbent assay to detect changes in serum damage markers.