Hochdurchsatzexpression und Aufreinigung humaner gelöster Träger für strukturelle und biochemische Untersuchungen

Solute Carrier, kurz SLCs, sind für die Aufnahme von Nährstoffen verantwortlich und an menschlichen Krankheiten beteiligt. Es gibt jedoch nur wenige Medikamente, die auf SLCs abzielen, da sie schlecht untersucht sind. Wir haben effiziente Ansätze entwickelt, um SLCs zu klonen, zu exprimieren und zu reinigen.

Unser Arbeitsablauf liefert reine Proteine, die biochemische und strukturelle Studien ermöglichen und letztendlich Erkenntnisse für Arzneimittelforschungskampagnen liefern. Mit den zahlreichen Rollen in biologischen Prozessen, Krankheiten und der Verabreichung von Medikamenten haben SLCs zunehmend Aufmerksamkeit erhalten und sind zu attraktiven therapeutischen Zielen geworden. Die privaten, öffentlichen ReSOLUTE IMI-Projekte generierten frei zugängliche Ressourcen und Daten, um neue Entdeckungen in der SLC-Funktion, Physiologie, Pathologie und therapeutischen Ausrichtung zu ermöglichen.

Traditionell waren SLCs schwierig zu untersuchen, da es sich um integrale Membranproteine mit verschiedenen Substraten und unterschiedlichen Transportmechanismen handelt. In jüngster Zeit haben Cryo-EM, das BacMam-Expressionssystem und neue Solubilisierungsreagenzien zu einer deutlichen Veränderung ihrer Charakterisierung geführt. Für biochemische und strukturelle Untersuchungen werden reine Proteinproben benötigt.

In menschlichen gelösten Stoffen haben Träger oft eine schlechte Ausbeute, wenn sie überexprimiert werden, und instabil, wenn sie gereinigt werden. Daher brauchte in der Vergangenheit jedes Target Jahre, um individuelle Strukturen zu entwickeln, um die Proteinprobe für nachgelagerte Anwendungen herzustellen. Unsere Methode ist für die parallele und kosteneffiziente Untersuchung mehrerer Ziele oder Konstrukte eines einzelnen Ziels optimiert.

Daher werden experimentelle Flexibilität, Kosten, Zeit und Laborressourcen sorgfältig abgewogen. Darüber hinaus bieten wir in diesem Artikel und im ReSOLUTE-Webportal einen offenen Zugang zu allen unseren Protokollen und Ressourcen.