Expressão de alto rendimento e purificação de carreadores de solutos humanos para estudos estruturais e bioquímicos

Os portadores de solutos, ou SLCs, são responsáveis pela absorção de nutrientes e estão envolvidos em doenças humanas. No entanto, há poucos medicamentos direcionados aos SLCs porque eles são pouco estudados. Desenvolvemos abordagens eficientes para clonar, expressar e purificar SLCs.

Nosso fluxo de trabalho produz proteínas puras, permitindo estudos bioquímicos e estruturais e, finalmente, fornece insights para campanhas de descoberta de medicamentos. Com os inúmeros papéis nos processos biológicos, na doença e na liberação de fármacos, os SLCs têm recebido cada vez mais atenção e se tornado alvos terapêuticos atraentes. Os projetos privados e públicos ReSOLUTE IMI geraram recursos e dados de acesso aberto para permitir novas descobertas na função, fisiologia, patologia e direcionamento terapêutico da SLC.

Tradicionalmente, as SLCs eram difíceis de estudar, pois são proteínas integrais de membrana com vários substratos e diversos mecanismos de transporte. Recentemente, o Cryo-EM, o sistema de expressão BacMam e novos reagentes de solubilização levaram a uma mudança radical em sua caracterização. Amostras de proteína pura são necessárias para estudos bioquímicos e estruturais.

Em seres humanos, os portadores de solutos geralmente têm um baixo rendimento quando superexpressos e instáveis quando purificados. Portanto, no passado, cada meta exigia anos para desenvolver estruturas individuais para produzir a amostra de proteína para aplicações a jusante. Nosso método é otimizado para o estudo paralelo e econômico de múltiplos alvos ou construtos de um único alvo.

Portanto, equilibra flexibilidade experimental, custo, tempo e recursos de laboratório cuidadosamente. Além disso, oferecemos acesso aberto a todos os nossos protocolos e recursos neste artigo e no portal web ReSOLUTE.