Gelenkerkrankungen und CMD sind eine Gruppe von etwa 30 menschlichen Krankheiten, die die Gelenkmuskulatur und das umgebende Gewebe betreffen Schmerzen sind der Hauptgrund, warum CMD-Patienten bisher ins Krankenhaus gehen. Es gibt keine wirksame Behandlung für CMD-Schmerzen, da der Schmerzmechanismus nur unzureichend verstanden wird. Um den Schmerzmechanismus zu untersuchen, haben wir ein Mausmodell der schmerzhaften CMD entwickelt, gefolgt von der Schmerzverhaltensanalyse.
Die Schmerzbewertung in der künstlichen Schmerzforschung ist aufgrund der intrinsischen Variabilität der Verhaltensanalyse eine ziemliche Herausforderung. Auch die unterschiedliche Laboranwendung und das unterschiedliche Protokoll zur Bewertung der Schmerzen machen es schwierig, Querverweise zwischen verschiedenen Studien herzustellen. In diesem JOE-Artikel haben wir eine visualisierte Version eines Flammen-, Filament- und Rückenkraft-Assays zu großen künstlichen Schmerzen beschrieben.
Diese Protokolle bieten eine detaillierte Methode für die direkte Implementierung und kombinieren sie mit Ansätzen zur umfassenden Beurteilung von Kiefergelenkschmerzen. Sie können angewendet werden, um das Schmerzverhalten bei verschiedenen orakalen Schmerzzuständen zu bewerten, wie z. B. bei autogenen Schmerzen, Kiefergelenksstiften, Muskelstiften und Neuropathenstiften. Um mit der Positionierung der anästhesierten Maus auf der Operationsplattform zu beginnen, bereiten Sie eine sterile Insulinspritze oder eine 31-Gauge-Nadel für die Injektion von CFA in das Schläfenkiefergelenk vor.
Decken Sie die Nadel mit einer Hülle aus Polyethylenrohr ab, so dass nur zwei Millimeter der Nadelspitze hervorstehen, um ein tiefes Einführen zu verhindern. Als nächstes tasten Sie den Jochbogen ab, um das Schläfenkiefergelenk oder die Kiefergelenksinjektionsstelle zu lokalisieren. Führen Sie dann die Nadel in die Injektionsstelle ein, die sich unter dem hinteren Ende des Jochbogens befindet.
Injizieren Sie langsam 10 Mikroliter CFA in die Kiefergelenkkapsel und warten Sie mindestens fünf Sekunden, bevor Sie die Nadel allmählich zurückziehen. Zu Beginn wird ein Mausmodell für entzündliche Kiefergelenkschmerzen durch intraartikuläre Injektion von CFA etabliert. Sobald sich die Maus vollständig erholt hat, legen Sie das Fixierungsrohr mindestens eine Stunde lang in den Mauskäfig im Verhaltensraum, bevor Sie testen, um die Maus an die Testumgebung zu gewöhnen.
Schalten Sie dann die kompatible Software ein, um mit Gewalt zu messen, und öffnen Sie das Programm N-B-I-T-R-S-D-V 2.6 0.3. Wählen Sie nun die entsprechenden Kommunikationsoptionen aus. Wählen Sie den beaufsichtigten Modus UDP aus, wählen Sie dann die richtige lokale IP aus und suchen Sie nach Geräte-IP und -Port, indem Sie auf Suchen klicken.
Sobald die Ziel-IP und der Zielport angezeigt werden, klicken Sie auf Öffnen. Stellen Sie die Y-Achse ein, indem Sie auf 10 im Bereich Y klicken.Klicken Sie dann auf Einstellen. Klicken Sie abschließend auf Erwerb.
Wählen Sie als Nächstes nur Kanal eins für das blaue Diagramm aus und deaktivieren Sie andere Kanäle, die nicht mit dem Gerät verbunden sind. Klicken Sie auf Play, um die Aufzeichnung der Bisskraft zu starten. Legen Sie nun die Maus in ein 50-Milliliter-Plastikröhrchen, das so modifiziert ist, dass die Maus locker fixiert wird, und bewegen Sie die Beißplatte in Richtung des Mausmunds.
Zeichnen Sie das freiwillige Beißen zwei Minuten lang pro Sitzung auf. Klicken Sie dann auf Pause, um die Aufnahme zu stoppen und klicken Sie auf Speichern. Ordnen Sie nun die Daten in der zweiten Spalte der Excel-Datei vom Maximum zum Minimum und wählen Sie die fünf wichtigsten Werte der Bisskraftamplitude für die weitere Analyse aus.
Notieren Sie den Wert von Kanal eins aus dem Programm und subtrahieren oder addieren Sie ihn zu den oberen fünf Werten der Bisskraftamplitude. Um die relativen Werte der Bisskraft aus diesem Assay zu erhalten, nehmen Sie den Durchschnitt dieser fünf Werte, um die durchschnittliche relative Bisskraft für eine Maus zu bestimmen. Mit CFA behandelte Mäuse zeigten eine signifikante Verringerung der relativen Bisskraft am ersten Tag nach der Injektion im Vergleich zur PBS-Gruppe mit allmählicher Genesung im Laufe der Zeit, der Prozentsatz der Bisskraftänderung nahm bei CFA-behandelten Mäusen am ersten Tag signifikant ab, mit einem Trend zur Erholung bis zum Tag 12.
Setzen Sie zunächst einen Drahtgitterkäfig in den Mäusekäfig und gewöhnen Sie die Mäuse vor den Testverfahren mindestens eine Stunde lang im Verhaltensraum. Schalten Sie dann die elektronische von Fray Prüfmaschine ein. Um die Schwelle für die Kopfentnahme zu messen, drücken Sie Maximum und stellen Sie die Einheit auf 500 Gramm ein, was eine willkürliche Einheit ist, die von der Maschine eingestellt wird.
Setzen Sie den Wert auf Null, um die Aufzeichnung jetzt zu starten. Setze die Mäuse in den Drahtgitterkäfig. Tragen Sie das Von-Fray-Filament senkrecht auf den Bereich des Kiefergelenks auf.
Notieren Sie als erster Test den Wert der vom Filament ausgeübten Kraft oder die Reizintensität in Gramm, die die Reaktion auslöst. Stellen Sie dann den Wert der Kraft auf dem Bildschirm auf Null und warten Sie 10 Sekunden, während die Maus im Käfig verbleibt. Beginnen Sie erneut mit dem Auftragen des Filaments und notieren Sie, dass der Wert der Kopfentnahmeschwelle bei CFA-behandelten Mäusen am ersten Tag im Vergleich zum Ausgangswert signifikant niedriger war, gefolgt von einer teilweisen Erholung.
Im Laufe der Zeit nahm die prozentuale Veränderung der Kopfentnahmeschwelle bei CFA-behandelten Mäusen am ersten Tag deutlich ab, wobei eine Verbesserung bis zum 12. Tag beobachtet wurde.
