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Method Article
Hemos desarrollado una técnica mínimamente invasiva para crear un conejo isquémico modelo de herida del oído mediante la división de la arteria central y los nervios y el paquete vasculonervioso del cráneo. Un túnel subcutáneo y luego corta todos los tejidos subcutáneos. Este procedimiento provoca la interrupción mínima de la piel y puede usarse de manera segura en animales diabéticos.
Uno de los principales obstáculos en la investigación actual herida diabética es la falta de un modelo de lesión isquémica que pueden usarse de manera segura en animales diabéticos. Los fármacos que funcionan bien en no isquémicas heridas pueden no funcionar en humanos, porque las heridas diabéticas vasculopatía es un factor importante que impide la curación de estas heridas. Hemos publicado un artículo en 2007 que describe un modelo de oreja de conejo lesión isquémica creado por una técnica quirúrgica mínimamente invasiva. Desde entonces, hemos simplificado aún más el procedimiento para facilitar la operación. En una oreja, tres pequeñas incisiones cutáneas se realizaron en los pedículos vasculares, de 1-2 cm de la base de la oreja. La arteria central y se ligó con corte a lo largo del nervio. El paquete del cráneo entero se cortan y se ligan, dejando sólo la rama caudal intacto. Una circunferencia túnel subcutáneo se realizó a través de las incisiones, para cortar el tejido subcutáneo, músculos, nervios y vasos pequeños. La otra oreja se utilizó como control no-isquémico. Cuatro heridas fueron hechas en la parte ventral of cada oído. Esta técnica produce 4 heridas isquémicas y no isquémicas 4 heridas en un animal de comparaciones por pares. Después de la cirugía, el oído isquémico era fresca y cianótica, y mostró movimiento reducido y una falta de pulso en la arteria de la oreja. Temperatura de la piel de la oreja isquémica fue 1.10 ° C más baja que en el oído normal y esta diferencia se mantuvo durante más de un mes. Oído tejidos de alta energía el contenido de fosfato fueron más bajos en el oído isquémica que el oído de control. Veces la cicatrización de heridas eran más largos en el oído isquémica que en el oído no-isquémico cuando el tratamiento se utilizó la misma. La técnica ha sido utilizada en más de 80 conejos en los que 23 eran diabéticos (tiempo de la diabetes que van desde 2 semanas a 2 años). No conejo solo se ha desarrollado complicaciones quirúrgicas tales como sangrado, infección o ruptura de las incisiones en la piel. El modelo tiene muchas ventajas, como la perturbación poco de piel, más tiempo isquémica, y una mayor tasa de éxito, en comparación con muchos otros modelos. CA ITn utilizarse de manera segura en animales con resistencia reducida, y también se puede modificar para cumplir diversos requisitos de ensayo.
1. Bases anatómicas
La oreja de conejo ha sido un material de estudio privilegiado para el cuidado de heridas desde principios del siglo 20. El oído es suministrada por tres haces vasculares (central, craneal y caudal), el núcleo central es el más grande, mientras que los buques en los paquetes craneal y caudal varían en tamaño. Ocasionalmente, la arteria caudal puede estar ausente. 1 Todas estas embarcaciones son fácilmente identificados en la cara dorsal después de la oreja se afeita (fig. 1). En el lado ventral, la piel distal no recibe suministro de sangre de los vasos proximales. Los tres paquetes de vasos en la oreja dorsal, tiene numerosas ramas que penetran a través del cartílago para proporcionar el suministro de sangre a la piel distal ventral (Fig. 2). En algunos conejos, un buque subcutánea muy pequeña se produce también en el lado ventral, que suministra sangre a no más de 1/3 de la piel ventral. En una incisión en la piel circular abierto, no es esencialcialmente no hay sangrado de una incisión ventral.
2. Procedimiento Quirúrgico
3. Cuidado Postoperatorio
4. Posibles complicaciones y cómo evitarlas
Esta cirugía mínimamente invasiva es segura y las complicaciones son raras. A excepción de una transición post-operatorio leve edema en la oreja, ninguno de nuestros conejos ha tenido complicaciones quirúrgicas graves. Sin embargo, hay varias posibles complicaciones para este procedimiento:
5. Los resultados representativos
Desde 2007, hemos utilizado este procedimiento en más de 70 conejos, incluyendo 23 diabéticos untrado animales seropositivos. En el grupo de diabéticos, la cirugía se llevó a cabo en momentos diferentes para diabéticos: siete conejos tenía dos semanas de tiempo de la diabetes, cuatro de ellos tenía dos meses, diez tenían 12 meses, y 2 tenían 24 meses de tiempo para la diabetes.
Inmediatamente después de la cirugía, el oído isquémica parecía fría y cianótica, con edema leve. El oído más importante arteria-la arteria central de la-tenía un pulso fuerte en el oído normal, pero este pulso no estaba presente en el oído isquémica. Oído el movimiento se redujo, pero no desapareció totalmente. La piel mostró depresiones claras sobre el túnel, pero sin isquemia o necrosis se encontró en todos los animales (fig. 4).
Las temperaturas de la piel de las orejas normales e isquémicas se midieron con un termómetro digital (Omron Omron Healthcare, Bannockburn, IL, o un Termómetro tipo K punto de infrarrojos por Fisher Scientific, Pittsburgh, PA). Las diferencias de temperatura entre el oído no isquémica y la cardiopatía isquémica fue de 1 a 10 ° C, wIth mayoría de los conejos que caen dentro del intervalo de 2-6 ° C. fig. 5 muestra las diferencias de temperatura promedio de 30 conejos. La diferencia de temperatura fue mayor en los primeros días después de la cirugía, disminuyó gradualmente después de 15 días, pero se mantuvo todavía en el extremo de un mes.
Tejido de alta energía contenido de fosfato se midieron en algunos animales después de que fueron sacrificados. Seis muestras de tejidos se tomaron de cada oreja y de alta energía contenido de fosfato se midieron mediante HPLC. Tanto la ATP y la concentración total de energía fue mayor en los oídos normales que en los oídos isquémicos. Figura. La figura 6 muestra un ejemplo de un conejo sacrificado 23 días después de la cirugía. La media de los tejidos el contenido de ATP fueron 0,349 ± 0,047 mmol / g (media ± DE) en el oído normal, frente a 0,237 ± 0,059 mmol / g en el oído isquémica (p <0,005). La media total de energía (ATP + ADP + AMP) fue de 0,882 ± 0,137 mmol / g en el oído normal frente a 0,556 ± 0,115 mmol / g en el ISCHE Micrófono de oído (p <0,001).
Tiempos de cicatrización de heridas eran siempre más larga para el oído isquémica que para el oído no isquémica en todos los grupos (no diabéticos o diabéticos). Figura. La figura 7 muestra una comparación de curación entre 26 pares de heridas en las orejas isquémica y no isquémica. Los tiempos de curación varió de 13 a 18 días (media 14,9 ± 1,6 días) en los oídos normales, frente a 17 a 27 días (media 20,5 ± 3,4 días) en las orejas isquémica (p = 0,001). Tiempos de cicatrización de heridas en conejos de edad y diabéticos eran mucho más tiempo, especialmente cuando el tiempo era diabética más de 12 meses.
En estos conejos, todas las incisiones curadas normalmente sin complicaciones, incluyendo los conejos con 24 meses de tiempo diabética. Figura 8 es una muestra que muestra la histología curado túnel subcutáneo en la que el músculo está ausente y es reemplazado por tejido fibroso. Sin embargo, la piel está intacta.
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Figura 1. La oreja de conejo es suministrada por tres haces vasculares. El central es el más grande, el cráneo es más pequeño, y el paquete de caudal es el más pequeño. Estas embarcaciones son fácilmente visibles en la superficie después de la oreja se afeita.
Figura 2. Los tres haces de vasos en la sangre del oído suministro dorsal no sólo a la piel dorsal, sino también a la piel ventral través de los vasos penetrantes. La flecha muestra los vasos penetrantes a través del cartílago. El recuadro muestra una sección transversal de estos vasos.
Figura 3. Cuatro 6-mm heridas se crean en el lado ventral de la oreja, y el pericondrio se elimina también. La base sobre la que la granulación y epitelización llevarse a cabo es el cartílago, pero el cartílago no está perforado. El smal 3 l incisiones cutáneas se cierran con un trastorno de piel muy poco.
Figura 4. Después de que las incisiones en la piel se cierran, la sangría sobre el túnel subcutáneo se ve claramente.
Figura 5. La diferencia promedio entre la temperatura de la piel de la oreja normal e isquémico en 30 conejos. La diferencia oscila desde los primeros 7 ° C a 10 ° C después de la cirugía. La diferencia disminuye gradualmente, pero mantiene todavía en el extremo de un mes.
Figura 6. Oído tejidos de alta energía se reduce el contenido de fosfato en el oído isquémica en comparación con los no-isquémica del oído a los 23 días después de la cirugía (p <0,001).
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Herida la figura 7. Tiempo de curación es más largo en los oídos isquémicos que los oídos no isquémicos (26 heridas cada uno). La curación se define como la restauración de la integridad del tejido lesionado, es decir, la reepitelización completa de sitios de la herida.
Figura 8. Muestra Histología que muestra la parte del oído que contiene túnel subcutáneo. El tejido cicatrizado es más delgado que el oído normal, el músculo esquelético original, está ausente y es reemplazado por tejido fibroso. Sin embargo, la piel está intacta.
La diabetes afecta a 23,6 millones de personas en los EE.UU., 2,3 y 15-20% de estos pacientes desarrollan úlceras del pie en su vida, 4,5, a un costo anual de tratamiento de más de $ 25 mil millones. 3,6 Sin embargo, incluso la mejor información disponible tratamientos de lograr sólo una tasa de 50% de curación y esto es a menudo temporal, 7 con tasas de recurrencia tan altas como 66% en los diabéticos. 3,6 Cuando las úlceras se presentan en pacientes con dia...
No hay conflicto de intereses financieros implicados en este estudio.
Este estudio fue apoyado en parte por subvenciones del NIH 1RO1DK74566 y 1RO1AM52984. Los autores desean agradecer a la Sra. Jacqueline McCarty en la CRR, por su ayuda durante la cirugía, los Dres. Jianpu Wang y Sarojini Harshini por su ayuda en el cuidado postoperatorio de la cirugía y algunos conejos, el Dr. Wan Rong, por su trabajo histología, y la Sra. Li Ming de sus medidas por HPLC de fosfatos de alta energía.
Para el control durante la cirugía
Para la cirugía
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