Un abonnement à JoVE est nécessaire pour voir ce contenu. Connectez-vous ou commencez votre essai gratuit.
Method Article
Nous avons développé une technique mini-invasive pour créer un lapin modèle ischémique plaie oreille en divisant l'artère centrale et le nerf et le paquet vasculo-nerveux crânienne. Un tunnel sous-cutané coupe alors tous les tissus sous-cutanés. Cette procédure entraîne des perturbations minimes et la peau peut être utilisé sans danger chez les animaux diabétiques.
Un obstacle majeur dans la recherche actuelle plaie diabétique est l'absence d'un modèle de plaie ischémique qui peut être utilisé sans danger chez les animaux diabétiques. Les médicaments qui fonctionnent bien dans les plaies ischémiques non-peuvent ne pas fonctionner dans les plaies diabétiques de l'homme parce vasculopathie est un facteur majeur qui entrave la guérison de ces blessures. Nous avons publié un article en 2007 décrivant une oreille de lapin plaie ischémique modèle créé par une technique chirurgicale minimalement invasive. Depuis lors, nous avons encore simplifié la procédure pour faciliter l'opération. Sur une oreille, trois petites incisions cutanées ont été faites sur les pédicules vasculaires, de 1-2 cm de la base de l'oreille. L'artère centrale a été ligaturé et couper le long du nerf. Le faisceau a été coupé toute crânienne et ligaturé, ne laissant que la branche caudale intacte. Un tunnel sous-cutanée périphérique a été faite par les incisions, pour couper les tissus sous-cutanés, les muscles, les nerfs et les vaisseaux de petite taille. L'autre oreille a été utilisé comme un contrôle non-ischémique. Quatre blessures ont été faites sur la face ventrale of chaque oreille. Cette technique produit 4 plaies ischémiques et non ischémiques 4 blessures à un animal pour des comparaisons par paires. Après la chirurgie, l'oreille ischémique était fraîche et cyanosé, et a montré le mouvement réduit et un manque d'impulsion dans l'artère oreille. Température de la peau de l'oreille ischémique était 1-10 ° C inférieure à celle sur l'oreille normale et cette différence a été maintenue pendant plus d'un mois. Ear contenu tissus phosphate à haute énergie ont été plus faibles dans l'oreille ischémique que l'oreille de contrôle. Fois la cicatrisation des plaies était plus longue dans l'oreille ischémique que dans l'oreille non-ischémique quand le même traitement a été utilisé. La technique a été utilisée sur plus de 80 lapins dans lequel 23 étaient diabétiques (le diabète de temps allant de 2 semaines à 2 ans). Pas de lapin seul a développé des complications chirurgicales comme des saignements, une infection ou une rupture dans les incisions cutanées. Le modèle présente de nombreux avantages, comme la perturbation peu de peau, le temps plus ischémique, et le taux de réussite plus élevé, par rapport à beaucoup d'autres modèles. Il can être utilisé sans danger chez les animaux présentant une résistance réduite, et peut également être modifié pour répondre aux exigences d'essai différentes.
1. Base anatomique
L'oreille de lapin a été un matériau privilégié pour l'étude le soin des plaies depuis le début du 20 ème siècle. L'oreille est fournie par trois faisceaux vasculaires (central, crânienne, et caudale); le faisceau central est le plus grand, tandis que les navires dans les faisceaux crânienne et caudale sont de taille variable. Parfois, l'artère caudale peut être absent. 1 Tous ces navires sont facilement identifiables sur la face dorsale après l'oreille est rasée (Fig. 1). Sur la face ventrale, la peau distale ne reçoit pas l'approvisionnement en sang des vaisseaux proximaux. Les trois faisceaux des navires sur l'oreille dorsale ont de nombreuses branches qui pénètrent à travers le cartilage de fournir l'approvisionnement en sang à la peau ventrale distale (Fig. 2). Chez des lapins, un récipient très petite sous-cutanée se produit également sur le côté ventral, qui fournit le sang à pas plus de 1/3 de la peau ventrale. Dans une incision cutanée périphérique ouvert, il est essentiellement pas de saignement à partir d'une incision ventrale.
2. Procédure chirurgicale
3. Soins post-opératoires
4. Les complications possibles et comment les éviter
Cette chirurgie mini-invasive est sûr et les complications sont rares. Sauf pour une période de transition post-opératoire oedème de l'oreille doux, aucun de nos lapins a eu des complications graves chirurgicales. Néanmoins, il existe plusieurs complications potentielles de cette procédure:
5. Les résultats représentatifs
Depuis 2007, nous avons utilisé cette procédure dans plus de 70 lapins, dont 23 diabétiques uneimals. Dans le groupe des diabétiques, la chirurgie a été effectuée à des moments différents diabétiques: sept lapins ont eu deux semaines de temps diabétique, quatre d'entre eux disposaient de deux mois, dix avaient 12 mois, et 2 ont eu 24 mois de temps diabétique.
Immédiatement après la chirurgie, l'oreille ischémique est apparu frais et cyanosé, avec un léger œdème. L'oreille la plus importante artère de la centrale-artère a une forte impulsion à l'oreille normale, mais cette impulsion n'était pas présent dans l'oreille ischémique. Mouvement d'oreille a été réduit, mais n'a pas totalement disparu. La peau a montré dépressions claires sur le tunnel, mais pas d'ischémie ou de nécrose a été trouvé dans n'importe quel animal (Fig. 4).
Les températures de la peau des oreilles normales et ischémique ont été mesurées avec un thermomètre numérique (Omron par Omron Healthcare, Bannockburn, IL, ou un type K Thermomètre infrarouge place par Fisher Scientific, Pittsburgh, PA). Les différences de température entre l'oreille non-ischémiques et ischémique variait de 1 à 10 ° C, wvec la plupart des lapins tombant dans l'intervalle de 2-6 ° C. Fig. La figure 5 montre les différences de température moyenne de 30 lapins. La différence de température était plus élevée dans les premiers jours après la chirurgie, a diminué progressivement après 15 jours, mais il a été toujours maintenue à la fin d'un mois.
Le contenu de tissus phosphate à haute énergie ont été mesurées chez certains animaux après qu'ils ont été sacrifiés. Six échantillons de tissus ont été prélevés dans chaque oreille et le contenu de phosphate à haute énergie ont été mesurées par HPLC. Les deux ATP et les concentrations totales d'énergie ont été plus élevés dans les oreilles normales que dans les oreilles ischémiques. Fig. La figure 6 montre un exemple d'un lapin sacrifié 23 jours après la chirurgie. Les moyennes des tissus le contenu en ATP étaient 0,349 ± 0,047 mmol / g (moyenne ± écart type) dans l'oreille normale vs 0,237 ± 0,059 mmol / g dans l'oreille ischémique (p <0,005). Moyenne totale d'énergie (ATP + ADP + AMP) était 0,882 ± 0,137 mmol / g dans l'oreille normale vs 0,556 ± 0,115 mmol / g dans le ische micro oreille (p <0,001).
Fois la cicatrisation des plaies étaient toujours plus pour l'oreille ischémique que pour l'oreille non-ischémique dans tous les groupes (non-diabétique ou diabétique). Fig. 7 montre une comparaison de la guérison entre les 26 paires de blessures sur les oreilles ischémiques et non ischémiques. Temps de guérison varie de 13 à 18 jours (moyenne de 14,9 ± 1,6 jours) sur les oreilles normales vs 17 à 27 jours (moyenne 20,5 ± 3,4 jours) sur les oreilles ischémiques (p = 0,001). Fois la cicatrisation des plaies chez les lapins âgés et diabétiques étaient beaucoup plus, surtout quand le temps était diabétique de plus de 12 mois.
Dans ces lapins, tous les incisions guéries normalement sans aucune complication, y compris les lapins avec 24 mois de temps diabétiques. Figure 8 est un échantillon histologique montrant le tunnel sous-cutanée guérie dans laquelle le muscle est absent et est remplacé par des tissus fibreux. Toutefois, la peau est intacte.
/ 3341fig1.jpg "/>
Figure 1. L'oreille de lapin est alimenté par trois faisceaux vasculaires. La centrale est le plus grand, le crâne est plus petit, et le faisceau caudale est le plus petit. Ces navires sont facilement visibles sur la surface après l'oreille est rasée.
Figure 2. Les trois faisceaux de navires sur le sang d'approvisionnement oreille dorsale non seulement à la peau du dos, mais aussi à la peau ventrale à travers les vaisseaux pénétrants. La flèche montre les vaisseaux pénétrants à travers le cartilage. L'encart montre traverser la section de ces navires.
Figure 3. Quatre de 6 mm blessures sont créées sur la face ventrale de l'oreille, et le périchondre est également supprimé. La base sur laquelle la granulation et l'épithélialisation lieu est le cartilage, le cartilage, mais n'est pas perforée. Le smal 3 incisions cutanées l sont fermées par des perturbations très peu de la peau.
Figure 4. Fois les entailles de peau sont fermés, l'indentation sur le tunnel sous-cutané est clairement visible.
Figure 5. La différence moyenne de la peau de température entre l'oreille normale et ischémique chez 30 lapins. Les différentes plages de début de 7 ° C à 10 ° C après la chirurgie. La différence diminue progressivement mais toujours maintenue à l'extrémité d'un mois.
Figure 6. Oreille contenu tissus phosphate à haute énergie sont réduits dans l'oreille ischémique par rapport aux non-ischémique oreille à 23 jours après la chirurgie (p <0,001).
41/3341fig7.jpg "/>
Temps la figure 7. La cicatrisation des plaies est plus longue dans les oreilles ischémiques que les oreilles non-ischémiques (26 plaies chacun). La guérison est définie comme la restauration de l'intégrité des tissus blessés, à savoir la réépithélialisation complète des sites de la plaie.
Figure 8. Échantillon histologie montrant la partie oreille contenant tunnel sous-cutané. Le tissu cicatrisé est plus mince que l'oreille normale, le muscle squelettique d'origine est absent et est remplacé par les tissus fibreux. Toutefois, la peau est intacte.
Le diabète affecte 23,6 millions de personnes aux États-Unis, 2,3 et 15-20% de ces patients développent des ulcères du pied dans leur vie, 4,5 pour un coût de traitement annuel de plus de 25 milliards de dollars. 3,6 Cependant, même le meilleur disponible traitements atteindre seulement un taux de guérison de 50%, ce qui est souvent temporaire, 7 avec des taux de récidive aussi élevés que 66% chez les diabétiques. 3,6 Lorsque les ulcères chez les patient...
Il n'ya pas de conflit d'intérêts financiers impliqués dans cette étude.
Cette étude a été financée en partie par des subventions du NIH et 1RO1DK74566 1RO1AM52984. Les auteurs tiennent à remercier Mme Jacqueline McCarty dans CRR pour son aide lors de la chirurgie, les Drs. Jianpu Wang et Harshini Sarojini pour leur aide dans les soins de chirurgie et post-opératoire de certains lapins, le Dr Rong Wan pour son travail histologie, et Mme Ming Li pour ses mesures de HPLC de phosphates à haute énergie.
Pour la surveillance pendant la chirurgie
Pour la chirurgie
Demande d’autorisation pour utiliser le texte ou les figures de cet article JoVE
Demande d’autorisationThis article has been published
Video Coming Soon