A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Method Article
פיתחנו שיטה פולשנית ליצור אוזן איסכמי ארנב מודל הפצע על ידי חלוקת עורק העצבים המרכזית ואת צרור neurovascular גולגולתי. מנהרה תת עורית ואז חותך את כל רקמות תת עורית. הליך זה גורם הפרעה העור מינימלי בטוח לשימוש בבעלי חיים חולי סוכרת.
מכשול אחד עיקרי המחקר הנוכחי פצע סוכרתי היא חוסר מודל פצע איסכמי, שניתן להשתמש בהם בבטחה אצל בעלי חיים סוכרתיים. תרופות שעובדות היטב שאינם איסכמיים פצעים לא יכול לעבוד פצעים סוכרתיים אדם כי vasculopathy גורם אחד מרכזי מעכבת ריפוי של פצעים אלה. אנו פרסם מאמר בשנת 2007 המתאר אוזן ארנב מודל איסכמי הפצע שנוצר על ידי טכניקה כירורגית פולשנית. מאז, יש לנו לפשט עוד יותר את ההליך לפעולה קלה יותר. על אוזן אחת, שלושה חתכים קטנים בעור נעשו על pedicles כלי דם, 1-2 ס"מ מבסיס האוזן. העורק המרכזי ligated וחותכים יחד עם העצב. צרור הגולגולת כולה לגזור ligated, ומשאיר רק את הסניף הזנב ללא פגע. מנהרה תת עורית ההיקפי נעשה דרך חתכים את, לחתוך רקמות תת עורי, שרירים, עצבים וכלי קטנים. האוזן השנייה שימשה כביקורת לא איסכמית. ארבעה פצעים נעשו על הצד O הגחוןF כל אוזן. טכניקה זו מייצרת 4 פצעים איסכמיים ו -4 שאינם איסכמיים הפצעים בעלי חיים 1 עבור השוואות לזווג. לאחר הניתוח, האוזן איסכמי היה קריר בכחלון, והראה התנועה הקטינה וחוסר הדופק בעורק האוזן. טמפרטורת העור של האוזן איסכמי היה 1-10 מעלות צלזיוס נמוך מזה על האוזן נורמלי ההבדל הזה נשמר במשך חודש אחד או יותר. רקמות האוזן אנרגיה גבוהה תכולת פוספט היו נמוכים יותר באוזן איסכמי מאשר אוזן שליטה. ריפוי הפצע הזמנים היו יותר באוזן איסכמי מאשר באוזן שאינו איסכמי כאשר אותו טיפול נעשה שימוש. טכניקה יש עכשיו כבר בשימוש על יותר מ -80 ארנבות שבו היו 23 סוכרתית (זמן שנע בין סוכרת 2 שבועות עד 2 שנים). לא ארנבת אחת פיתחה סיבוכים כירורגיים כגון דימום, זיהום, או קרע של חתכים בעור. מודל יש יתרונות רבים, כגון הפרעה עור קטן, זמן איסכמי יותר, שיעור הצלחה גבוה יותר, לעומת דגמים אחרים. זה can בטוח לשימוש בחיות עם התנגדות נמוכה, והוא יכול גם להיות שונה כדי לעמוד בדרישות בדיקות שונות.
1. הבסיס האנטומי
אוזן ארנב כבר חומר הלימוד המועדף לטיפול בפצע מאז המאה ה 20 המוקדמות ה. האוזן מסופק על ידי שלוש חבילות של כלי הדם (מרכזי, הגולגולת, ואת הזנב); צרור המרכזי הוא הגדול ביותר, בעוד הכלים של חבילות גולגולת הזנב משתנים בגודלם. מדי פעם, את העורק הזנב עשוי להיעדר. 1 כל הכלים האלה מזוהים בקלות בצד הגבי לאחר אוזן הוא גילח (איור 1). בצד הגחוני, העור דיסטלי אינו מקבל אספקת דם מכלי הדם הפרוקסימלי. שלוש חבילות כלי באוזן הגב יש סניפים רבים לחדור דרך הסחוס לספק אספקת הדם לעור הגחון דיסטלי (איור 2). ב ארנבות מסוימים, כלי קטן מאוד תת עורית קורה גם בצד הגחוני, המספק דם לא יותר מ 1/3 של העור הגחון. ב חתך בעור פתוח ההיקפי, יש אסןtially אין דימום מן החתך הגחון.
2. נוהל כירורגי
3. לאחר הניתוח טיפול
4. סיבוכים אפשריים וכיצד להימנע מהן
זה ניתוח פולשנית הוא בטוח סיבוכים נדירים. מלבד המעבר לאחר הניתוח בצקת קלה באוזן, אף אחד הארנבים שלנו היו סיבוכים ניתוחיים חמורים. עם זאת, ישנם כמה סיבוכים אפשריים עבור הליך זה:
5. נציג תוצאות
מאז 2007, השתמשנו בהליך זה ביותר מ -70 ארנבות, כולל סוכרת 23imals. בקבוצה סוכרתית, הניתוח בוצע בשעות סוכרת שונים: שבעה ארנבונים היו שבועיים של זמן סוכרתית, 4 מהם היו חודשיים, 10 היה 12 חודשים, 2 היו 24 חודשים של זמן סוכרתית.
מיד לאחר הניתוח, האוזן איסכמי נראה מגניב בכחלון, עם בצקת קלה. האוזן החשוב ביותר עורקים עורק מרכזי, היה דופק חזק באוזן רגילה, אבל הדופק לא היה נוכח באוזן איסכמי. תנועת האוזן צומצם, אבל לא לגמרי נעלם. העור הראו שקעים ברורים על פני המנהרה, אבל לא איסכמיה או נמק נמצאה כל בעל חיים (איור 4).
הטמפרטורות עור של האוזניים נורמליים איסכמי נמדדו עם מדחום דיגיטלי (Omron ידי Omron Healthcare, Bannockburn, IL, או סוג K מדחום אינפרא אדום במקום על ידי פישר סיינטיפיק, פיטסבורג, פנסילבניה). ההבדלים בטמפרטורה בין האוזן הלא איסכמי ו איסכמי נע בין 1-10 ° C, Wרוב ארנבים ith נופלים בטווח של 2-6 ° C. איור. 5 מראה את ההבדלים הטמפרטורה הממוצעת מ -30 ארנבים. ההבדל הטמפרטורה היתה גבוהה יותר בימים הראשונים לאחר הניתוח, ירד בהדרגה לאחר 15 יום, אבל נשמר עדיין בסוף חודש.
אנרגיה גבוהה רקמות תוכן פוספט נמדדו אצל בעלי חיים מסוימים אחרי שהם הקריבו. שש דגימות רקמות שנלקחו מאוזנו כל אנרגיה גבוהה תכולת פוספט נמדדו על ידי HPLC. הן ATP ריכוזי האנרגיה היו גבוהים יותר מאשר את האוזניים רגילות באזני איסכמי. איור. 6 מציג דוגמה של ארנב הקריב 23 ימים לאחר הניתוח. רקמות התכנים מתכוון ה-ATP היו 0.349 ± 0.047 μMol / g (ממוצע ± סטיית תקן) באוזן רגילה לעומת 0.237 ± 0.059 μMol / g באוזן איסכמי (p <0.005). כלומר האנרגיה (ATP + ADP + AMP) היה 0.882 ± 0.137 μMol / g באוזן רגילה לעומת 0.556 ± 0.115 μMol / g ב ische מיקרופון אוזן (p <0.001).
ריפוי הפצע הזמנים היו תמיד יותר לאוזן איסכמי מאשר האוזן הלא איסכמי בכל הקבוצות (ללא סוכרת או סוכרת). איור. 7 מציגה השוואה של ריפוי בין 26 זוגות של פצעים על אוזניים איסכמי ולא איסכמי. פעמים הריפוי נע בין 13 ל -18 יום (ממוצע 14.9 ± 1.6 ימים) על אוזניים רגילות לעומת 17 עד 27 ימים (ממוצע 20.5 ± 3.4 ימים) על האוזניים איסכמי (p = 0.001). ריפוי פצעים פעמים ארנבונים בגיל ו סוכרתית היו הרבה יותר, במיוחד כאשר זמן סוכרתית היה יותר מ -12 חודשים.
ב ארנבים אלה, כל החתכים הגלידו בדרך כלל ללא סיבוכים כלשהם, כולל ארנבים עם 24 חודשים של זמן סוכרתית. איור 8 דוגמה היסטולוגיה מראה מנהרה תת עורית נרפא שבו השריר התאור, והוא הוחלף על ידי רקמות סיביים. עם זאת, העור לא נפגע.
/ 3341fig1.jpg "/>
באיור 1. אוזן ארנב מסופק על ידי שלוש חבילות של כלי הדם. המרכזי הוא הגדול ביותר, גולגולת קטנה, ואת צרור הזנב הוא הקטן ביותר. כלים אלה נראים בקלות על פני השטח לאחר האוזן מגולח.
איור 2. שלוש חבילות על כלי הדם אספקת הגב האוזן לא רק עור הגב, אלא גם על העור הגחון באמצעות כלי נוקבות. החץ מראה את כלי חודר דרך הסחוס. מראה הבלעה לחצות קטע של הכלים האלה.
איור 3. ארבע 6 מ"מ פצעים נוצרים בצד הגחון של האוזן, perichondrium מוסר גם. הבסיס שעליו פרור ו epithelization להתקיים הוא הסחוס, אבל הסחוס אינו מחורר. Smal 3 חתכים וסעד עור סגורות עם הפרעה העור מעט מאוד.
איור 4. לאחר חתכים בעור סגורים, indention על מנהרה תת עורית נראה בבירור.
איור 5. העור ממוצע הטמפרטורה ההבדל בין האוזן נורמלי איסכמי ב -30 ארנבים. טווחי ההבדל מוקדם 7 ° C עד 10 ° C לאחר הניתוח. ההבדל יורדת בהדרגה, אך עדיין שמר בסוף חודש.
איור 6. האוזן אנרגיה גבוהה רקמות תוכן פוספט מופחתים באוזן איסכמי, בהשוואה לאוזן הלא איסכמי ב 23 ימים לאחר הניתוח (p <0.001).
41/3341fig7.jpg "/>
איור 7. ריפוי פצע זמן ארוך באזני איסכמי מאשר הלא איסכמי האוזניים (26 פצעים כל אחת). הריפוי מוגדר להשבת שלמות רקמות פצועים, כלומר reepithelialization מלאה של אתרי הפצע.
איור 8. מדגם היסטולוגיה מראה חלק האוזן המכיל מנהרה תת עורית. רקמת נרפא הוא רזה יותר לאוזן רגילה, שרירי השלד המקורי נעדר, והוא הוחלף על ידי רקמות סיביים. עם זאת, העור לא נפגע.
סוכרת משפיעה על 23.6 מיליון בני אדם בארצות הברית, 2,3 ו - 15-20% מהחולים הללו מפתחים כיבים ברגל בחייהם, 4.5 בעלות הטיפול השנתית של יותר מ 25 מיליארד דולר. 3,6 עם זאת, גם הטוב ביותר טיפולים להשיג רק שיעור הריפוי 50% וזה בדרך כלל זמני, 7 עם שיעורי הישנות גבוהים כ...
אין סתירה הכספי של העניין מעורב במחקר זה.
מחקר זה נתמך בחלקו על ידי NIH מענקים 1RO1DK74566 ו 1RO1AM52984. המחברים מבקשים להודות לגב 'ז'קלין מקארטי ב RRC על עזרתה במהלך הניתוח, בני הזוג. Jianpu וואנג Harshini םרוג'יני על עזרתם בטיפול ניתוח שלאחר ניתוח של כמה ארנבות, ד"ר Rong וואן לעבודה היסטולוגיה שלה, גב 'מינג לי למדידות HPLC שלה אנרגיה גבוהה פוספטים.
לניטור במהלך הניתוח
לניתוח
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionThis article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved