<ol style="list-style-type:upper-alpha;"><li> Preparación de la lesión fantasma (phantom preparar alrededor de 38 a 48 horas antes de la sesión actual de la práctica de PAAF de competencia (Figura 1) o utilizar la lista para su uso &quot;AV fantasma&quot; de la Fuente FNA, EE.UU.. La lesión fantasma (almacenado en refrigeración sin congelar) puede mantenerse preparados, incluso 3 o 4 días antes de la sesión de práctica. </li><li> La práctica de PAAF de competencia: A pesar de que han demostrado el procedimiento a través de THFV Shidham (tejido Cosechadora con válvula funcional) (Fuente FNA, EE.UU.), cualquier otro sistema de FNA puede ser utilizado para la práctica (Figura 2). </li><li> La difusión y el procesamiento de la aspiración en el portaobjetos de vidrio (Figura 3). </li></ol> Material necesario <ol style="list-style-type:lower-alpha;"><li> Clara de caucho de silicona masilla, disponible en muchas tiendas de mejoras para la construcción de / home. Muchas marcas están disponibles, incluyendo GETM, DAP, Red Devil, White Lightning, y marcas locales de la cadena. Se utilizó goma de silicona transparente, Productos White Lightning, Cleveland, Ohio, EE.UU., <a href="http://www.wlcaulk.com/products/all_purpose/silicone_rubber/wl09010.html">http://www.wlcaulk.com/products/all_purpose/silicone_rubber/wl09010.html</a> ) </li><li> Pistola para calafatear </li><li> Un trozo de lámina de plástico (se utilizó Saran aferran Además Wrap, SC Johnson &amp; Son Inc., Racine, WI, EE.UU. <a href="http://www.saranbrands.com/plastic-wrap/index.asp">http://www.saranbrands.com/plastic-wrap/index.asp</a> </li><li> Guantes de látex </li><li> Plátano de gran diámetro o salchicha. </li><li> Firme y plana placa base (aproximadamente 6 pulgadas x 6 pulgadas) hecho de cartón grueso, placa de acrílico, o de otro tipo. </li><li> FNA realizar equipos <ul><li> 25 agujas hipodérmicas calibre </li><li> Shidham de THFV (u otros componentes para la realización de PAAF) </li><li> portaobjetos de vidrio </li><li> kits de tinción </li></ul></li></ol> Paso a paso los detalles A. Preparación de la lesión fantasma (phantom preparar 1 a 2 días antes de la práctica de PAAF de competencia (Figura 2) o utilizar listo para utilizar &quot;AV fantasma&quot; de la Fuente FNA, EE.UU.. <ol><li> Corte un tamaño de 6 x 6 pulgadas de apoyar a bordo. </li><li> Cortar un segmento de 2,5 pulgadas de largo de &quot;núcleo lesión fantasma&quot; (banana o salchicha). </li><li> Expulsar a 0,5 pulgadas de espesor de capa de masilla en la placa base. </li><li> Pulse el botón &#39;fantasma lesión fundamentales &quot;a la ligera en esta capa de masilla. </li><li> Añadir más masilla sobre el &quot;núcleo lesión fantasma&quot; de modo que está plenamente integrado en el montículo de masilla, sin burbujas de aire. </li><li> Ajustar y dar forma a la masilla sobre &quot;núcleo lesión fantasma &#39;con la mano enguantada. </li><li> Tome un pedazo de 6 x 6 pulgadas de tamaño de papel de plástico y tapa el montículo masilla y ajustar la superficie del montículo en una configuración convexa lisa con las manos limpias, con guantes. </li><li> Deje secar la masilla montículo de 6.8 horas más que el tiempo de curado mencionados en las instrucciones del producto, (por lo general por 24 horas), en un lugar cálido. </li><li> Después de curar, la masilla debe ser firme, y la envoltura de plástico se pueden pelar fácilmente. </li><li> La lesión FNA fantasma está listo para ser utilizado para practicar el procedimiento FNA después de aproximadamente 8 horas en todo el montículo de masilla ha curado por completo en el centro que contiene el &quot;núcleo fantasmal lesión&quot; (banana o salchicha). </li></ol> B. La práctica de FNA competencia en AV lesión fantasma. Cualquier enfoque en la obtención de alta calidad, adecuado aspirados FNA con los frotis de buena calidad citología directa debe abordar los siguientes puntos críticos- <ol style="list-style-type:upper-roman;"><li> El calibre de la aguja implícita en el título del procedimiento, las agujas más finas (mayor número de calibre) mejor rendimiento aspirados con una dilución mínima de sangre. Para el balance crítico de los beneficios y limitaciones de 22 a 25 agujas de calibre son los preferidos para una óptima estabilidad mecánica de la aguja sin afectar la calidad aspirado FNA. </li><li> El control de las secuencias apropiadas de aplicación de vacío y la liberación durante el procedimiento FNA-Esto es fundamental para avanzar en las células de la muestra con cada movimiento de la aguja, hacia la base de la aguja. Sin embargo, el material aspirado no se debe permitir que alcance en el área de la asamblea por aspiración con aguja con una jeringa. Si esto no se evita, el material puede ser difícil de recuperar para la toma de frotis (este material puede, sin embargo, utilizarse para la preparación del bloque de celdas o de los métodos de concentración como Cytospin, los métodos de filtro, o los últimos preparativos citología de base líquida). </li><li> El desarrollo de habilidades apropiadas en el procesamiento de la muestra de aspirado, incluyendo la preparación de frotis directo y en el lugar adecuado con triaje de evaluación apropiados para las pruebas complementarias como la preparación de bloque de celdas para inmunocitoquímica electiva, citometría de flujo electiva para determinar el inmunofenotipo de las lesiones linfoproliferativas, la presentación de pases estériles para microbiología estudios, y su compañerorial de las pruebas moleculares (citogenética, etc.) </li></ol> Realización de Ba procedimiento FNA (se muestra con THFV Shidham [1] (Fuente FNA, EE.UU.), sin embargo, cualquier otro sistema de FNA puede ser utilizado para la práctica). (Figura 3.4.5). <ol><li> Preparar a la asamblea FNA con la válvula cerrada. </li><li> Localizar la lesión e inserte la aguja en la lesión. </li><li> Abra la válvula para conectar el vacío, a través de la aguja a la punta, para aspirar representante de los componentes celulares de la lesión con cada uno de aquí para allá y los accidentes cerebrovasculares en la lesión. </li><li> Mantener las áreas de vacío y diferentes muestras de la lesión mediante la inserción de la aguja en la lesión en diferentes direcciones. </li><li> Cierre la válvula de desconectar el vacío en el lumen de la aguja. </li><li> Igualar la presión con las condiciones ambientales (por ejemplo, desconectar la jeringa de la válvula de la aguja por un breve momento y volver a conectar. Si el dispositivo especial con medidas incorporadas, tales como &quot;THFV&quot; se utiliza, esta y otras medidas de Ba1 a través Aa6 son concertados automáticamente siguiendo los diferentes pasos en el sistema de válvulas) [1]. </li><li> Retire la aguja de la lesión con la válvula cerrada, con el fin de evitar la pérdida de la muestra por capilaridad en la lesión a menos que haya presión ligeramente negativa en el extremo centro. </li><li> Desplazar el contenido atmosférico en el portaobjetos de vidrio para preparar frotis directo (ver más abajo) (figura 6). </li></ol> Bb. Procesamiento de la muestra de aspirado con la clasificación apropiada La difusión de la aspiración en el portaobjetos de vidrio y la preparación de los frotis directos de buena calidad (Figura 6) seguido de la tinción adecuada y triage (Figura 7,8). <ol><li> Una gota de aspirado de desprenderse de la lámina de vidrio se extiende por una variedad de enfoques, como se muestra en (Figura 6) [2]. El enfoque habitual es &#39;a&#39;. Sin embargo, si la muestra es sangre diluida con algunos microfragmentos, el exceso de sangre se drena por la inclinación de la diapositiva, y el microfragmentos luego se reparten entre la diapositiva y diapositiva segunda copa similar a la &#39;a&#39;. Si la aspiración es predominantemente una suspensión sin microfragmentos, como de las lesiones linfoproliferativas, se transmite similar a &#39;b&#39; o &#39;c&#39;. </li><li> El frotis puede ser procesado y fijado en la variedad de formas para diferentes métodos de tinción durante la evaluación de idoneidad en el sitio. Sin embargo, lo mejor es secar al aire todos los frotis. Los frotis secados al aire se puede teñir con colorantes Romanowski (como Difff-Quik mancha, Wright) después de la fijación con metanol o Pap mancha después de la rehidratación con solución salina y después de la fijación (en el 95% de etanol o de preferencia en etanol al 95% con 5 ácido acético%) [3]. Eliminación de la interferencia debida a la sangre oscurece es un beneficio significativo [3]. </li><li> Dependiendo de los resultados durante la evaluación inicial citomorfológicos adecuación en el lugar, la clasificación adicional (como el bloque de celdas electiva, microscopía electrónica, cultivos microbiológicos, citometría de flujo, citogenética molecular pruebas, etc) se recomienda, como se indica. </li></ol> Los resultados representativos: <img border="0" src="/files/ftp_upload/1404/1404fig1tmb.jpg" alt="la figura 1" /> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1404/1404fig1.jpg">Haga clic aquí para ver una versión ampliada de la figura 1</a> . Figura 1. Material necesario para la preparación de AV Phantom para la práctica de PAAF de competencia (* Usamos Saran Wrap de plástico que no se adhieren a la masilla al final, mientras se quita después de un curado completo de la masilla.) <hr style="border-bottom:1px dotted #999999;" /><img border="0" src="/files/ftp_upload/1404/1404fig2tmb.jpg" alt="la figura 2" /> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1404/1404fig2.jpg">Haga clic aquí para ver una versión ampliada de la figura 2.</a> Figura 2. Preparación de AV lesión Phantom <hr style="border-bottom:1px dotted #999999;" /><img border="0" src="/files/ftp_upload/1404/1404fig3tmb.jpg" alt="la figura 3" /> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1404/1404fig3.jpg">Haga clic aquí para ver una versión ampliada de la figura 3.</a> Figura 3. Pasos críticos en el procedimiento de FNA. <hr style="border-bottom:1px dotted #999999;" /><img border="0" src="/files/ftp_upload/1404/1404fig4tmb.jpg" alt="la figura 4" /> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1404/1404fig4.jpg">Haga clic aquí para ver una versión ampliada de la figura 4.</a> Figura 4. EUS-FNA-Resumen de los pasos críticos * (ver Fig. 3) <hr style="border-bottom:1px dotted #999999;" /><img border="0" src="/files/ftp_upload/1404/1404fig5tmb.jpg" alt="la figura 5" /> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1404/1404fig5.jpg">Haga clic aquí para ver una versión ampliada de la figura 5.</a> Figura 5. Dificultades relacionadas con los pasos críticos en el FNA procedure. <hr style="border-bottom:1px dotted #999999;" /><img border="0" src="/files/ftp_upload/1404/1404fig6tmb.jpg" alt="la figura 6" /> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1404/1404fig6.jpg">Haga clic aquí para ver una versión ampliada de la figura 6.</a> Figura 6. Preparación de frotis directos de la muestra FNA entre dos diapositivas. <hr style="border-bottom:1px dotted #999999;" /><img border="0" src="/files/ftp_upload/1404/1404fig7tmb.jpg" alt="la figura 7" /> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1404/1404fig7.jpg">Haga clic aquí para ver una versión ampliada de la figura 7.</a> Figura 7. Mojado frotis fijos y se seca al aire. <hr style="border-bottom:1px dotted #999999;" /><img border="0" src="/files/ftp_upload/1404/1404fig8tmb.jpg" alt="la figura 8" /> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1404/1404fig8.jpg">Haga clic aquí para ver una versión ampliada de la figura 8.</a> Figura 8. Mojado frotis fijos y se seca al aire.

<ol>
	<li>Shidham, V. B., Pandit, A. W., Rao, R. N., Basir, Z., Shidham, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+Harvester+with+Functional+Valve+(THFV):+Shidham's+device+for+reproducibly+higher+specimen+yield+by+fine+needle+aspiration+biopsy+with+easy+to+perform+steps.">Tissue Harvester with Functional Valve (THFV): Shidham's device for reproducibly higher specimen yield by fine needle aspiration biopsy with easy to perform steps.</a> BMC Clinical Pathology. 7 (2), (2007).</li><li>Shidham, V. B., Epple, J., Shidham, V. B., Atkinson, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AppendiX+I:+Collection+and+processing+of+effusion+fluids+for+cytopathologic+evaluation.">AppendiX I: Collection and processing of effusion fluids for cytopathologic evaluation.</a> , 207-235 (2007).</li><li>Shidham, V., Kampalath, B., England, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Routine+air+drying+of+all+the+smears+prepared+during+fine+needle+aspiration+and+intraoperative+cytology+studies:+An+opportunity+to+practice+a+unified+protocol,+offering+the+flexibility+of+choosing+variety+of+staining+methods.">Routine air drying of all the smears prepared during fine needle aspiration and intraoperative cytology studies: An opportunity to practice a unified protocol, offering the flexibility of choosing variety of staining methods.</a> Acta Cytologica. (45), 60-68 (2001).</li></ol>

Las biopsias con aguja fina de aspiración (PAAF) son ampliamente a cabo como una técnica económica, mínimamente invasivo seguro y rápido para el diagnóstico de los tejidos de diversos tumores y lesiones. En este procedimiento, una aguja de calibre 18 a 27 se inserta en la lesión, mueve adelante y atrás varias veces en diferentes áreas de la lesión bajo vacío controlado (de succión) de intensidad variable, que van desde un mínimo en la forma de que sólo una acción capilar a alrededor de 10 ml vacío en la jeringa para recuperar el material tejido de diagnóstico. Una aguja de calibre fino con mayor número es preferible recuperar el material de citología buena para preparar los frotis directos. Más amplia aguja de calibre 18G recupera más de muestra adecuada para bloquear celulares, citometría de flujo, microscopía electrónica, citogenética, microbiología, etc culturas Aunque el procedimiento es sencillo, el control de varios pasos con la correcta aplicación y liberación de vacío en las medidas adecuadas, de manera concertada es muy importante para obtener resultados óptimos. Debido a la falta de disponibilidad de diseño especial de alto rendimiento agujas, agujas hipodérmicas convencionales o de sus modificaciones se utilizan para realizar este procedimiento. Sin embargo, las agujas hipodérmicas tienen muchas limitaciones que lleva a un bajo rendimiento de la muestra si se utiliza de manera convencional. El requisito de mordazas jeringa especial por lo general aumenta la complejidad del procedimiento. Por lo tanto, debido a la falta de disponible en el mercado de dispositivos adecuados aguja PAAF, este procedimiento de gran versatilidad sufre un problema frecuente de la recuperación de muestras inadecuadas. Recientemente, un dispositivo de aumentar el rendimiento con una reproducibilidad ha sido reportado [1]. Además, actualmente hay una falta de modelos adecuados para la práctica de competencia en la realización de PAAF de personal sanitario en formación como residentes y becarios. Teníamos un modelo estandarizado con un trozo de hígado vacuno fresco de peluche en guante de látex para la práctica de la PAAF de competencia. Sin embargo, este modelo es difícil de organizar en un corto plazo. Adquisición de hígado de vacuno fresca es generalmente la situación limitante. Además, el manejo de hígado puede introducir contaminación relacionada con factores como un atractivo importante de nuevo. La tendencia de los guantes de látex para después de una fuga de unos pocos pinchazos de agujas lleva a la confusión potencial durante la sesión de práctica. Se presenta y describe un nuevo método sencillo, pero de la incorporación de un pequeño trozo de plátano (o salchicha) en una masilla de caucho de silicona disponibles en el mercado y otros materiales fáciles de conseguir. El fantasma de la PAAF conserva el sello de vacío lo que permite la aspiración de material de la muestra integrado, equivalente al procedimiento PAAF real de una lesión en el entorno clínico. En este video, que demuestre el procedimiento de toma de PAAF lesión fantasma y la práctica de procedimiento de la PAAF. También se muestra en el escrito del procesamiento de la muestra recuperada incluyendo la preparación de frotis y tinción [2,3]. Debido a que la masilla necesita tiempo para curar la lesión fantasma debe ser preparado con antelación de 24 a 48 horas antes de la sesión práctica. Comparables listo para su uso lesión fantasma se puede obtener de una fuente comercial (Fuente FNA, EE.UU.). La lesión fantasma para la práctica de la PAAF competencia puede ser utilizado para la formación de los residentes y becarios antes del comienzo del desempeño de la PAAF en los pacientes en la clínica.

preparation and using phantom lesions to practice fine needle aspiration biopsies

En la actualidad, los trabajadores de salud, incluyendo residentes y becarios no tienen un modelo adecuado para practicar el fantasma de aspiración con aguja fina (PAAF) del procedimiento. En el pasado, se estandarizó un modelo que consiste en guantes de látex que contienen hígado de vacuno fresca para la práctica de la PAAF. Sin embargo, este modelo es difícil de organizar y preparar a corto plazo, con la adquisición de hígado de vacuno fresca es el aspecto más desafiante. Manejo de hígado con los problemas de contaminación relacionados con es también un atractivo importante de nuevo. Además, las fugas de material de los guantes después de una aguja de unos pocos pasos, con el consiguiente lío. Hemos establecido un nuevo método simple de incorporar un pequeño trozo de salchicha o banana en una masilla de caucho de silicona disponibles en el mercado. Este modelo permite la retención de sellado al vacío y la aspiración de los contenidos de la muestra integrado, se asemeja a un procedimiento de PAAF real en lesiones de masa clínica. El material aspirado en la base de la aguja puede ser procesado similar a los ejemplares adquiridos en un proceso real de la PAAF, facilitando la competencia adicional en la preparación de frotis y tinción.

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Preparation and Using Phantom Lesions to Practice Fine Needle Aspiration Biopsies

La práctica de biopsias por aspiración con aguja fina (PAAF) de los alumnos es relativamente difícil, debido a la falta de un fácil acceso, adecuados lesión. Preparación de un AV lesión fantasma para practicar el procedimiento de la PAAF y la competencia es relativamente fácil de dominar.

Preparación y uso de las lesiones Phantom a la práctica de Bellas biopsia aspiración con aguja

Currently, health workers including residents and fellows do not have a suitable phantom model to practice the fine- needle aspiration biopsy (FNAB) ...

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Research

JoVE Journal

Biology

17.7K vistas.  University of Wisconsin - Milwaukee. La práctica de biopsias por aspiración con aguja fina (PAAF) de los alumnos es relativamente difícil, debido a la falta de un fácil acceso, adecuados lesión. Preparación de un AV lesión fantasma para practicar el procedimiento de la PAAF y la competencia es relativamente fácil de dominar.

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Gross and Fine Dissection of Inner Ear Sensory Epithelia in Adult Zebrafish (Danio rerio)

Neurosensory epithelia in the inner ear are the crucial structures for hearing and balance functions. Therefore, it is important to understand the cellular and molecular features of the epithelia, which are mainly composed of two types of cells: hair cells (HCs) and supporting cells (SCs). Here we choose to study the inner ear sensory epithelia in adult zebrafish not only because the epithelial structures are highly conserved in all vertebrates studied, but also because the adult zebrafish is able to regenerate HCs, an ability that mammals lose shortly after birth. We use the inner ear of adult zebrafish as a model system to study the mechanisms of inner ear HC regeneration in adult vertebrates that could be helpful for clinical therapy of hearing/balance deficits in human as a result of HC loss.
Here we demonstrate how to do gross and fine dissections of inner ear sensory epithelia in adult zebrafish. The gross dissection removes the tissues surrounding the inner ear and is helpful for preparing tissue sections, which allows us to examine the detailed structure of the sensory epithelia. The fine dissection cleans up the non-sensory-epithelial tissues of each individual epithelium and enables us to examine the heterogeneity of the whole epithelium easily in whole-mount epithelial samples.

Gross and Fine Dissection of Inner Ear Sensory Epithelia in Adult Zebrafish Danio rerio

The inner ear sensory epithelium of adult zebrafish is a good model system for understanding the mechanisms of hair cell regeneration in adult vertebrates. This protocol demonstrates the fine dissection of the epithelia, through which we can get tissue samples for studying the regenerative events at cellular and subcellular levels.

La disección fina y gruesa de los epitelios sensoriales del oído interno en adultos de pez cebra ( Danio rerio)

Neurosensory epithelia in the inner ear are the crucial structures for hearing and balance functions. Therefore, it is important to understand the ...

Investigación

Biología

Western Blotting: Sample Preparation to Detection

Western blotting is an analytical technique used to detect specific proteins in a given sample of tissue homogenate or extract. It uses gel electrophoresis to separate native or denatured proteins by the length of the polypeptide (denaturing conditions) or by the 3-D structure of the protein (native/ non-denaturing conditions). The proteins are then transferred to a membrane (typically nitrocellulose or PVDF), where they are probed (detected) using antibodies specific to the target protein.

Western blotting is an analytical technique used to detect specific proteins in a given sample of tissue homogenate or extract.

Western Blot: Preparación de muestras para la detección

Western blotting is an analytical technique used to detect specific proteins in a given sample of tissue homogenate or extract. It uses gel ...

Advanced Confocal Microscopy Techniques to Study Protein-protein Interactions and Kinetics at DNA Lesions

Local microirradiation with lasers represents a useful tool for studies of DNA-repair-related processes in live cells. Here, we describe a methodological approach to analyzing protein kinetics at DNA lesions over time or protein-protein interactions on locally microirradiated chromatin. We also show how to recognize individual phases of the cell cycle using the Fucci cellular system to study cell-cycle-dependent protein kinetics at DNA lesions. A methodological description of the use of two UV lasers (355 nm and 405 nm) to induce different types of DNA damage is also presented. Only the cells microirradiated by the 405-nm diode laser proceeded through mitosis normally and were devoid of cyclobutane pyrimidine dimers (CPDs). We also show how microirradiated cells can be fixed at a given time point to perform immunodetection of the endogenous proteins of interest. For the DNA repair studies, we additionally describe the use of biophysical methods including FRAP (Fluorescence Recovery After Photobleaching) and FLIM (Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy) in cells with spontaneously occurring DNA damage foci. We also show an application of FLIM-FRET (Fluorescence Resonance Energy Transfer) in experimental studies of protein-protein interactions.

Laser microirradiation is a useful tool for studies of DNA repair in living cells. A methodological approach for the use of UVA lasers to induce various DNA lesions is shown. We have optimized a method for local microirradiation that maintains the normal cell cycle; thus, irradiated cells proceed through mitosis.

Avanzadas técnicas de Microscopía Confocal para estudiar las interacciones proteína-proteína y cinética en las lesiones del ADN

Local microirradiation with lasers represents a useful tool for studies of DNA-repair-related processes in live cells. Here, we describe a methodological ...

Immunolabelling Myofiber Degeneration in Muscle Biopsies

The necrosis of muscle fibres (myonecrosis) plays a central role in the pathogenesis of several muscle conditions, including muscular dystrophies. Therapeutic options addressing the causes of muscular dystrophy pathogenesis are expected to alleviate muscle degeneration. Therefore, a method to assay and quantify the extent of cell death in muscle biopsies is needed. Conventional methods to observe myofiber degeneration in situ are either poorly quantitative or rely on the injection of vital dyes. In this article, an immunofluorescence protocol is described that stains necrotic myofibers by targeting immunoglobulin G (IgG) uptake by myofibers. The IgG uptake method is based on cell features characterizing the necrotic demise, including 1) the loss of plasma membrane integrity with the release of damage-associated molecular patterns and 2) the uptake of plasmatic proteins. In murine cross-sections, the co-immunolabelling of myofibers, extracellular matrix proteins, and mouse IgG allows clean and straightforward identification of myofibers with necrotic fate. This simple method is suitable for quantitative analysis and applicable to all species, including human samples, and does not require the injection of vital dye. The staining of necrotic myofibers by IgG uptake can also be paired with other co-immunolabelling.

Described here is a protocol for direct immunolabelling of necrotic myofibers in muscle cryosections. Necrotic cells are permeable to serum proteins, including immunoglobulin G (IgG). Revealing the uptake of IgG by myofibers allows the identification and quantification of myofibers that undergo necrosis regardless of muscle condition.

Inmunoetiquetado Desgeneración de miofibra en biopsias musculares

The necrosis of muscle fibres (myonecrosis) plays a central role in the pathogenesis of several muscle conditions, including muscular dystrophies. ...

Single Cell Micro-aspiration as an Alternative Strategy to Fluorescence-activated Cell Sorting for Giant Virus Mixture Separation

During the amoeba co-culture process, more than one virus may be isolated in a single well. We previously solved this issue by end point dilution and/or fluorescence activated cell sorting (FACS) applied to the viral population. However, when the viruses in the mixture have similar morphologic properties and one of the viruses multiplies slowly, the presence of two viruses is discovered at the stage of genome assembly and the viruses cannot be separated for further characterization. To solve this problem, we developed a single cell micro-aspiration procedure that allows for separation and cloning of highly similar viruses. In the present work, we present how this alternative strategy allowed us to separate the small viral subpopulations of Clandestinovirus ST1 and Usurpativirus LCD7, giant viruses that grow slowly and do not lead to amoebal lysis compared to the lytic and fast-growing Faustovirus. Purity control was assessed by specific gene amplification and viruses were produced for further characterization.

Here, we describe a single cell micro-aspiration method for the separation of infected amoebae. In order to separate viral subpopulations in Vermamoeba vermiformis infected by Faustoviruses and unknown giant viruses, we developed the protocol detailed below and demonstrated its ability to separate two low-abundance novel giant viruses.

Microaspiración de células únicas como estrategia alternativa a la clasificación celular activada por fluorescencia para la separación de mezclas de virus gigantes

During the amoeba co-culture process, more than one virus may be isolated in a single well. We previously solved this issue by end point dilution and/or ...

Assessing Agrochemical Risk to Mated Honey Bee Queens

Current risk assessment strategies for honey bees rely heavily upon laboratory tests performed on adult or immature worker bees, but these methods may not accurately capture the effects of agrochemical exposure on honey bee queens. As the sole producer of fertilized eggs inside a honeybee colony, the queen is arguably the most important single member of a functioning colony unit. Therefore, understanding how agrochemicals affect queen health and productivity should be considered a critical aspect of pesticide risk assessment. Here, an adapted method is presented to expose honey bee queens and worker queen attendants to agrochemical stressors administered through a worker diet, followed by tracking egg production in the laboratory and assessing first instar eclosion using a specialized cage, referred to as a Queen Monitoring Cage. To illustrate the method&#39;s intended use, results of an experiment in which worker queen attendants were fed diet containing sublethal doses of imidacloprid and effects on queens were monitored are described.

This protocol was developed to enhance the understanding of how agrochemicals affect honey bee (Apis mellifera) reproduction by establishing methods to expose honey bee queens and their worker caretakers to agrochemicals in a controlled, laboratory setting and carefully monitoring their relevant responses.

Evaluación del riesgo agroquímico para las reinas de abejas melíferas apareadas

Current risk assessment strategies for honey bees rely heavily upon laboratory tests performed on adult or immature worker bees, but these methods may not ...

Profiling of H3K4me3 Modification in Plants using Cleavage under Targets and Tagmentation

Epigenomic regulation at the chromatic level, including DNA and histone modifications, behaviors of transcription factors, and non-coding RNAs with their recruited proteins, lead to temporal and spatial control of gene expression. Cleavage under targets and tagmentation (CUT&#38;Tag) is an enzyme-tethering method in which the specific chromatin protein is firstly recognized by its specific antibody, and then the antibody tethers a protein A-transposase (pA-Tn5) fusion protein, which cleaves the targeted chromatin in situ by the activation of magnesium ions. Here, we provide our previously published CUT&#38;Tag protocol using intact nuclei isolated from allortetraploid cotton leaves with modification. This step-by-step protocol can be used for epigenomic research in plants. In addition, substantial modifications for plant nuclei isolation are provided with critical comments.

Cleavage under targets and tagmentation (CUT&amp;Tag) is an efficient chromatin epigenomic profiling strategy. This protocol presents a refined CUT&amp;Tag strategy for the profiling of histone modifications in plants.

Elaboración de perfiles de modificación de H3K4me3 en plantas utilizando escisión bajo objetivos y etiquetado

Epigenomic regulation at the chromatic level, including DNA and histone modifications, behaviors of transcription factors, and non-coding RNAs with their ...

An Improved Chemotaxis Assay for the Rapid Identification of Rhizobacterial Chemoattractants in Root Exudates

Chemotaxis identification is very important for the research and application of rhizosphere growth-promoting bacteria. We established a straightforward method to quickly identify the chemoattractants that could induce the chemotactic movement of rhizosphere growth-promoting bacteria on sterile glass slides via simple steps. Bacteria solution (OD600 = 0.5) and sterile chemoattractant aqueous solution were added dropwise on the glass slide at an interval of 1 cm. An inoculating loop was used to connect the chemoattractant aqueous solution to the bacterial solution. The slide was kept at room temperature for 20 min on the clean bench. Finally, the chemoattractant aqueous solution was collected for bacterial counting and microscopic observation. In this study, through multiple comparisons of experimental results, the method overcame multiple shortcomings of traditional bacterial chemotaxis methods. The method reduced the error of plate counting and shortened the experimental cycle. For the identification of chemoattractant substances, this new method can save 2-3 days compared to the traditional method. Additionally, this method allows any researcher to systematically complete a bacterial chemotaxis experiment within 1-2 days. The protocol can be considered a valuable resource for understanding plant-microbe interactions.

Here, we present an improved chemotaxis assay protocol. The goal of this protocol is to reduce the steps and costs of traditional bacterial chemotaxis methods and to serve as a valuable resource for understanding plant-microbe interactions.

Un ensayo de quimiotaxis mejorado para la identificación rápida de quimioatrayentes rizobacterianos en exudados radiculares

Chemotaxis identification is very important for the research and application of rhizosphere growth-promoting bacteria. We established a straightforward ...

Comprehensive Echocardiographic Assessment of Right Ventricle Function in a Rat Model of Pulmonary Arterial Hypertension

Pulmonary arterial hypertension (PAH) is a progressive disease caused by vasoconstriction and remodeling of the small arteries in the lungs. This remodeling leads to increased pulmonary vascular resistance, worsened right ventricular function, and premature death. Currently approved therapies for PAH largely target pulmonary vasodilator pathways; however, recent emerging therapeutic modalities are focused on other novel pathways involved in the pathogenesis of the disease, including right ventricle (RV) remodeling. Imaging techniques that allow longitudinal assessment of novel therapeutics are very useful for determining the efficacy of new drugs in preclinical studies. Noninvasive trans-thoracic echocardiography remains the standard approach to evaluating heart function and is widely used in rodent models. However, echocardiographic evaluation of the RV can be challenging due to its anatomical position and structure. In addition, standardized guidelines are lacking for echocardiography&#160;in preclinical rodent models, making it difficult to carry out a uniform assessment of RV&#160;function across studies in different laboratories. In preclinical studies, the monocrotaline (MCT) injury model in rats is widely used to evaluate drug efficacy for treating PAH. This protocol describes the echocardiographic evaluation of the RV in na&#239;ve and MCT-induced PAH rats.

The present protocol describes the echocardiographic characterization of right ventricular morphology and function in a rat model of pulmonary arterial hypertension.

Evaluación ecocardiográfica integral de la función del ventrículo derecho en un modelo de rata de hipertensión arterial pulmonar

Pulmonary arterial hypertension (PAH) is a progressive disease caused by vasoconstriction and remodeling of the small arteries in the lungs. This ...

Uso de biopsias de piel para generar podocitos derivados de pacientes

Generation of Patient-Derived Podocytes from Skin Biopsies

Podocytes are epithelial cells sitting on the urinary site of the glomerular filtration barrier that contribute to the selective filter function of the glomerulus. Mutations in podocyte-specific genes can cause focal segmental glomerulosclerosis (FSGS), and podocytes are also affected in many other primary and secondary nephropathies. Due to their differentiated nature, primary cell culture models are limited for podocytes.&#160;Therefore, commonly conditionally immortalized cells are used. However, these conditionally immortalized podocytes (ciPodocytes) have several limitations: the cells can dedifferentiate in culture, especially when they reach confluency, and several podocyte-specific markers are either only slightly or not expressed at all. This brings the use of ciPodocytes and their applicability for physiological, pathophysiological, and clinical reach into question. Here, we describe a protocol for the generation of human podocytes-including patient-specific podocytes-from a skin punch biopsy by episomal reprogramming of dermal fibroblasts into hiPSCs and subsequent differentiation into podocytes. These podocytes resemble in vivo podocytes much better in terms of morphological characteristics, like the development of foot processes and the expression of the podocyte-specific marker. Finally, yet importantly, these cells maintain patients&#39; mutations, resulting in an improved ex vivo model to study podocyte diseases and potential therapeutic substances in an individualized approach.

Autor destacado: Generación de podocitos derivados de pacientes a partir de biopsias de piel  

This manuscript describes a two-step protocol to generate patient-specific podocytes from dermal fibroblasts via episomal reprogramming into human-induced pluripotent stem cells (hiPSCs) and subsequent differentiation into podocytes.

Generación de podocitos derivados de pacientes a partir de biopsias de piel

Podocytes are epithelial cells sitting on the urinary site of the glomerular filtration barrier that contribute to the selective filter function of the ...