El trabajo apoyado por el NIH subvención HD-32116, la Familia Sandler Apoyo a la Fundación John Bowes El Fondo de Células Madre, MEXT, MHLW, y HFSP. ZM con el apoyo de la Fundación Carlos Baldoceda y UCSF Krevans Comunidad. AA-B. tiene el Heather y Melanie Muss Cátedra.

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	<li>Doetsch, F., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Network+of+tangential+pathways+for+neuronal+migration+in+adult+mammalian+brain.">Network of tangential pathways for neuronal migration in adult mammalian brain.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 93, 14895-14900 (1996).</li><li>Shen, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+SVZ+stem+cells+lie+in+a+vascular+niche:+a+quantitative+analysis+of+niche+cell-cell+interactions.">Adult SVZ stem cells lie in a vascular niche: a quantitative analysis of niche cell-cell interactions.</a> Cell Stem Cell. 3, 289-300 (2008).</li><li>Tavazoie, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+specialized+vascular+niche+for+adult+neural+stem+cells.">A specialized vascular niche for adult neural stem cells.</a> Cell Stem Cell. 3, 279-288 (2008).</li><li>Mirzadeh, Z., Merkle, F. T., Soriano-Navarro, M., Garcia-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+stem+cells+confer+unique+pinwheel+architecture+to+the+ventricular+surface+in+neurogenic+regions+of+the+adult+brain.">Neural stem cells confer unique pinwheel architecture to the ventricular surface in neurogenic regions of the adult brain.</a> Cell Stem Cell. 3, 265-278 (2008).</li><li>Mirzadeh, Z., Han, Y. G., Soriano-Navarro, M., Garcia-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cilia+organize+ependymal+planar+polarity.">Cilia organize ependymal planar polarity.</a> J Neurosci. 30, 2600-2610 (2010).</li><li>Doetsch, F., Garcia-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regeneration+of+a+germinal+layer+in+the+adult+mammalian+brain.">Regeneration of a germinal layer in the adult mammalian brain.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 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T., Mirzadeh, Z., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mosaic+organization+of+neural+stem+cells+in+the+adult+brain.">Mosaic organization of neural stem cells in the adult brain.</a> Science. 317, 381-384 (2007).</li><li>Young, K. M., Fogarty, M., Kessaris, N., Richardson, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subventricular+zone+stem+cells+are+heterogeneous+with+respect+to+their+embryonic+origins+and+neurogenic+fates+in+the+adult+olfactory+bulb.">Subventricular zone stem cells are heterogeneous with respect to their embryonic origins and neurogenic fates in the adult olfactory bulb.</a> J Neurosci. 27, 8286-8296 (2007).</li><li>Waclaw, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+zinc+finger+transcription+factor+Sp8+regulates+the+generation+and+diversity+of+olfactory+bulb+interneurons.">The zinc finger transcription factor Sp8 regulates the generation and diversity of olfactory bulb interneurons.</a> Neuron. 49, 503-516 (2006).</li><li>Kohwi, M., Osumi, N., Rubenstein, J. L., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pax6+is+required+for+making+specific+subpopulations+of+granule+and+periglomerular+neurons+in+the+olfactory+bulb.">Pax6 is required for making specific subpopulations of granule and periglomerular neurons in the olfactory bulb.</a> J Neurosci. 25, 6997-7003 (2005).</li><li>Kohwi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+subpopulation+of+olfactory+bulb+GABAergic+interneurons+is+derived+from+Emx1-+and+Dlx5/6-expressing+progenitors.">A subpopulation of olfactory bulb GABAergic interneurons is derived from Emx1- and Dlx5/6-expressing progenitors.</a> J Neurosci. 27, 6878-6891 (2007).</li><li>Hack, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+fate+determinants+of+adult+olfactory+bulb+neurogenesis.">Neuronal fate determinants of adult olfactory bulb neurogenesis.</a> Nat Neurosci. , (2005).</li><li>Ventura, R. E., Goldman, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dorsal+radial+glia+generate+olfactory+bulb+interneurons+in+the+postnatal+murine+brain.">Dorsal radial glia generate olfactory bulb interneurons in the postnatal murine brain.</a> J Neurosci. 27, 4297-4302 (2007).</li><li>Kelsch, W., Mosley, C. P., Lin, C. W., Lois, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+mammalian+precursors+are+committed+to+generate+neurons+with+defined+dendritic+projection+patterns.">Distinct mammalian precursors are committed to generate neurons with defined dendritic projection patterns.</a> PLoS Biol. 5, e300 (2007).</li><li>Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Asymmetric+centrosome+inheritance+maintains+neural+progenitors.">Asymmetric centrosome inheritance maintains neural progenitors.</a> Nature. 461, 947-955 (2009).</li></ol>

La mayoría de los estudios de la neurogénesis en zonas ventricular y subventricular se han basado en las técnicas clásicas de corte para examinar la microanatomía y de las relaciones celulares en estas regiones. A continuación se describe una técnica alternativa, utilizó por primera vez para analizar la red de cadenas migratorias de los neuroblastos generados en la SVZ 1, entonces se utiliza para estudiar la regeneración de la población de progenitores SVZ después de un tratamiento anti-mitótico 6, y más recientemente para estudiar la precisión apical y basal interacciones célula-célula de células adultas de la SVZ madre neurales 2,3,4. Curiosamente, esta técnica ha revelado que las células madre neurales, o las células de tipo B1, de la SVZ adultos forman parte de un neuroepitelio mezclado con diferencia que no se dividen las células ependimarias. En la cara de imagen usando wholemounts ha demostrado que esta mezcla tiene una arquitectura neuroepitelio molinete formado por las terminaciones apicales de las células de tipo B1 y rodeado de grandes superficies apicales de las células ependimarias 4. Este análisis en cara ha aclarado nuestra comprensión del linaje de células madre neurales en el cerebro embrionario y adulto como un conjunto de células con terminaciones en la superficie apical del ventrículo y procesos basal en contacto con un nicho vascular. Estos hallazgos han sido casi imposible con las técnicas clásicas de corte. Wholemounts también facilitar la identificación de las células madre neurales a través de su ventrículo-ponerse en contacto con el proceso apical. Como los marcadores más específicos de estas células madre se encuentran, wholemounts será una parte integral de la identificación y análisis del comportamiento de las células madre neurales. Wholemounts de las paredes del ventrículo lateral también ofrecen la perspectiva ideal para el estudio de la polaridad plana de células ependimarias. Las células ependimarias son las células de revestimiento de los ventrículos multiciliated que la función de impulsar CSF de manera coordinada. Con la técnica de wholemount, el epitelio ependimario completa está expuesta en la cara y se puede teñir y estudiado ampliamente desde su anterior a las fronteras ventral posterior y dorsal al. Además, los ensayos realizados en el flujo de ependimarias aguda disección, wholemounts vivir con firmeza demostrar el flujo plano polarizado generada por los cilios ependimarias. Un trabajo reciente utilizando enfoques wholemount ha descubierto determinantes celulares de este ependimarias polaridad plana 5. Curiosamente, los estudios wholemount también han sugerido que ependimarias-generó un flujo de CSF establece gradientes de chemorepellents que guían la migración de las neuronas jóvenes en la SVZ 7. Enfoques wholemount que inicialmente identificó la red de cadenas migratorias neuronal, por lo tanto continuar proporcionando pistas sobre los mecanismos que regulan la migración en cadena. El análisis de los VZ y SVZ por wholemount imágenes añade un nuevo enfoque para los estudios de futuro y una forma de clarificar nuestra comprensión de los estudios existentes. Por ejemplo, un estudio reciente sugiere que las células madre neurales en la SVZ adultos fueron CD133 + / CD24-células en contacto con el ventrículo 8. En base a su tinción en secciones, estos autores afirman que estas células eran una subpoblación de células ependimarias multiciliated. Sin embargo, en nuestro estudio, utilizando el enfoque wholemount, lo que da una visión más completa del epitelio ependimario todo, encontramos que todas las células ependimarias expresan CD24 y el único ventrículo-ponerse en contacto con las células que fueron CD133 + / CD24-fueron un subconjunto de tipo B1 las células 4. Además, la técnica wholemount promete ser útiles en futuros estudios que examinen la organización del mosaico descrito recientemente de las células madre neurales en el cerebro adulto 9. Varios estudios han demostrado que las células madre neurales en el cerebro adulto no son una población homogénea, sino que se especifican a nivel regional y normalmente sólo producen subtipos específicos de las interneuronas bulbo olfatorio. Estos estudios han propuesto que las diferentes subpoblaciones de células madre neurales pueden ser distinguidos, ya sea por la expresión de factores de transcripción específicos 10,11,12,13,14 y / o por su localización regional a lo largo de la extensión dorsal-ventral y antero-posterior de la pared lateral 9,15,16. A medida que más marcadores moleculares de las subpoblaciones regionalmente específico de células madre neurales adultas se identifican, imágenes wholemount debe proporcionar una visión completa de la parcelación de estos dominios progenitoras diferentes a lo largo de la pared ventricular. La disección wholemount y técnicas de imagen que aquí se presenta puede ser utilizado para analizar las paredes ventriculares en el embrión. La disección de la pared lateral de embriones se lleva a cabo, paso a paso, de la misma manera. Sólo hay pequeñas diferencias en el nivel de dificultad, los ventrículos embrionarias son relativamente más grandes haciendo la disección más fácil, pero el tejido es más suave haciendo más difícil la manipulación. En particular, una exposición similar del ventrículo lateral se puede utilizar en Embryos para disecar la pared cortical del ventrículo para estudiar la neurogénesis cortical. La evidencia reciente sugiere que la herencia asimétrica del centrosoma mantiene glía radial en la superficie ventricular durante la neurogénesis cortical 17. En-frente a imágenes de la superficie apical radial gliales pueden proporcionar ideas sobre cómo centrosomas dentro de estas células que se dividen asimétricamente son heredados. Como con la mayoría de las técnicas, especialmente las relacionadas con la destreza precisa, la maestría requiere de práctica. Hay, sin embargo, algunos elementos en la disección que son clave para obtener mejores resultados: 1) el ajuste de iluminación de la iluminación de la muestra para crear sombras ofrece un contraste muy valiosa durante la disección de tejido que es de otra manera relativamente homogénea, 2) el uso de los fórceps como dos pasadores de insectos en las pinzas de esta técnica no se utilizan para apretar juntos o recoger a los tejidos, sino que se utilizan como pasadores maniobrable que se pueden reajustar continuamente para estabilizar el tejido durante el corte, 3) un balance de retracción suave y el corte del cuchillo no debe sólo se utiliza para cortar, sino también para proporcionar la retracción suave para separar las paredes medial y lateral, recordando que la mayoría de la disección, se efectúa a través de la retracción suave con sólo el corte intermitente.

the subventricular zone en-face: wholemount staining and ependymal flow

Las paredes de los ventrículos laterales contienen la mayor región germinales en el cerebro adulto de mamíferos. La zona subventricular (SVZ) en estos muros es un sistema modelo estudiado para comprender el comportamiento de las células madre neurales y la regulación de la neurogénesis adulta. Tradicionalmente, estos estudios se han basado en las técnicas clásicas de corte para el análisis histológico. Aquí se presenta un enfoque alternativo, la técnica wholemount, que ofrece una completa, en la cara vista de esta región germinal. En comparación con las secciones, wholemounts preservar la citoarquitectura completa y las relaciones celulares dentro de la SVZ. Este enfoque ha revelado recientemente que las células madre neurales adultas o células de tipo B1, son parte de un neuroepitelio se mezcla con las células diferenciadas ependimarias revestimiento de los ventrículos laterales. Además, este enfoque ha sido utilizado para estudiar la polarización plana de células ependimarias y el flujo del líquido cefalorraquídeo que generan en el ventrículo. Con la evidencia reciente de que células madre neurales adultas son una población heterogénea que se especifica regional, el enfoque wholemount probablemente será una herramienta esencial para la comprensión de la organización y la parcelación de este nicho de células madre.

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The Subventricular Zone En-face: Wholemount Staining and Ependymal Flow

Las paredes del ventrículo lateral se encuentra la mayor región germinales en el cerebro adulto de mamíferos. Tradicionalmente, los estudios sobre la neurogénesis en esta región se han basado en las técnicas clásicas de corte para el análisis histológico. Aquí se presenta un enfoque alternativo, la técnica wholemount, que ofrece una completa, en la cara vista de esta región germinal.

En la zona subventricular cara: tinción wholemount y flujo ependimarios

The walls of the lateral ventricles contain the largest germinal region in the adult mammalian brain. The subventricular zone (SVZ) in these walls is an ...

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41.5K vistas.  University of California, San Francisco - UCSF. Las paredes del ventrículo lateral se encuentra la mayor región germinales en el cerebro adulto de mamíferos. Tradicionalmente, los estudios sobre la neurogénesis en esta región se han basado en las técnicas clásicas de corte para el análisis histológico. Aquí se presenta un enfoque alternativo, la técnica wholemount, que ofrece una completa, en la cara vista de esta región germinal.