NIH hibe HD-32.116, Sandler Aile Vakfı, John Bowes Kök Hücre Fonu, MEXT, MHLW ve HFSP Yardımcı tarafından desteklenen çalışın. ZM Carlos Baldoceda Vakfı ve UCSF Krevans Bursu tarafından desteklenmektedir. AA-B. Heather ve Melanie donatılmış Başkanı Muss tutar.

<ol>
	<li>Doetsch, F., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Network+of+tangential+pathways+for+neuronal+migration+in+adult+mammalian+brain.">Network of tangential pathways for neuronal migration in adult mammalian brain.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 93, 14895-14900 (1996).</li><li>Shen, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+SVZ+stem+cells+lie+in+a+vascular+niche:+a+quantitative+analysis+of+niche+cell-cell+interactions.">Adult SVZ stem cells lie in a vascular niche: a quantitative analysis of niche cell-cell interactions.</a> Cell Stem Cell. 3, 289-300 (2008).</li><li>Tavazoie, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+specialized+vascular+niche+for+adult+neural+stem+cells.">A specialized vascular niche for adult neural stem cells.</a> Cell Stem Cell. 3, 279-288 (2008).</li><li>Mirzadeh, Z., Merkle, F. T., Soriano-Navarro, M., Garcia-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+stem+cells+confer+unique+pinwheel+architecture+to+the+ventricular+surface+in+neurogenic+regions+of+the+adult+brain.">Neural stem cells confer unique pinwheel architecture to the ventricular surface in neurogenic regions of the adult brain.</a> Cell Stem Cell. 3, 265-278 (2008).</li><li>Mirzadeh, Z., Han, Y. G., Soriano-Navarro, M., Garcia-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cilia+organize+ependymal+planar+polarity.">Cilia organize ependymal planar polarity.</a> J Neurosci. 30, 2600-2610 (2010).</li><li>Doetsch, F., Garcia-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regeneration+of+a+germinal+layer+in+the+adult+mammalian+brain.">Regeneration of a germinal layer in the adult mammalian brain.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 96, 11619-11624 (1999).</li><li>Sawamoto, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+neurons+follow+the+flow+of+cerebrospinal+fluid+in+the+adult+brain.">New neurons follow the flow of cerebrospinal fluid in the adult brain.</a> Science. 311, 629-632 (2006).</li><li>Coskun, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD133++neural+stem+cells+in+the+ependyma+of+mammalian+postnatal+forebrain.">CD133+ neural stem cells in the ependyma of mammalian postnatal forebrain.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 105, 1026-1031 (2008).</li><li>Merkle, F. T., Mirzadeh, Z., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mosaic+organization+of+neural+stem+cells+in+the+adult+brain.">Mosaic organization of neural stem cells in the adult brain.</a> Science. 317, 381-384 (2007).</li><li>Young, K. M., Fogarty, M., Kessaris, N., Richardson, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subventricular+zone+stem+cells+are+heterogeneous+with+respect+to+their+embryonic+origins+and+neurogenic+fates+in+the+adult+olfactory+bulb.">Subventricular zone stem cells are heterogeneous with respect to their embryonic origins and neurogenic fates in the adult olfactory bulb.</a> J Neurosci. 27, 8286-8296 (2007).</li><li>Waclaw, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+zinc+finger+transcription+factor+Sp8+regulates+the+generation+and+diversity+of+olfactory+bulb+interneurons.">The zinc finger transcription factor Sp8 regulates the generation and diversity of olfactory bulb interneurons.</a> Neuron. 49, 503-516 (2006).</li><li>Kohwi, M., Osumi, N., Rubenstein, J. L., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pax6+is+required+for+making+specific+subpopulations+of+granule+and+periglomerular+neurons+in+the+olfactory+bulb.">Pax6 is required for making specific subpopulations of granule and periglomerular neurons in the olfactory bulb.</a> J Neurosci. 25, 6997-7003 (2005).</li><li>Kohwi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+subpopulation+of+olfactory+bulb+GABAergic+interneurons+is+derived+from+Emx1-+and+Dlx5/6-expressing+progenitors.">A subpopulation of olfactory bulb GABAergic interneurons is derived from Emx1- and Dlx5/6-expressing progenitors.</a> J Neurosci. 27, 6878-6891 (2007).</li><li>Hack, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+fate+determinants+of+adult+olfactory+bulb+neurogenesis.">Neuronal fate determinants of adult olfactory bulb neurogenesis.</a> Nat Neurosci. , (2005).</li><li>Ventura, R. E., Goldman, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dorsal+radial+glia+generate+olfactory+bulb+interneurons+in+the+postnatal+murine+brain.">Dorsal radial glia generate olfactory bulb interneurons in the postnatal murine brain.</a> J Neurosci. 27, 4297-4302 (2007).</li><li>Kelsch, W., Mosley, C. P., Lin, C. W., Lois, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+mammalian+precursors+are+committed+to+generate+neurons+with+defined+dendritic+projection+patterns.">Distinct mammalian precursors are committed to generate neurons with defined dendritic projection patterns.</a> PLoS Biol. 5, e300 (2007).</li><li>Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Asymmetric+centrosome+inheritance+maintains+neural+progenitors.">Asymmetric centrosome inheritance maintains neural progenitors.</a> Nature. 461, 947-955 (2009).</li></ol>

Ventrikül ve subventricular bölgelerde nöron çalışmaların çoğu bu bölgelerde mikroanatomisinin ve hücresel ilişkileri incelemek için klasik kesit alma teknikleri dayanıyordu. Burada sonra anti-mitotik tedavi 6 ve en son kesin apikal çalışma için kullanılan aşağıdaki SVZ progenitör nüfusun yenilenme incelemek için kullanılan ilk SVZ 1 neuroblasts göçmen zincirleri ağ analiz etmek için kullanılan alternatif bir yöntemdir, tarif ve yetişkin SVZ sinir kök hücreleri 2,3,4 bazal hücre-hücre etkileşimleri. İlginçtir ki, bu tekniğin yetişkin SVZ sinir kök hücreleri, ya da tip B1 hücreleri, farklılaştırılmış olmayan bölünmesi ependimal hücreler ile karışık bir neuroepithelium parçası olduğunu ortaya koymuştur. En yüze görüntüleme wholemounts kullanarak bu karışık neuroepithelium ependimal hücreler 4 büyük apikal yüzeyleri ile çevrili tip B1 hücrelerinin apikal sonlar oluşan fırıldak mimarisi olduğunu göstermiştir. Bu tr-yüz analizi hücreleri vasküler bir niş iletişime ventrikül yüzeyinde apikal sonlar ve bazal süreçleri ile oluşan embriyonik ve yetişkin beyinlerinde sinir kök hücrelerinin köken anlayışımıza açıklık vardır. Bu bulgular klasik kesit alma teknikleri kullanarak, neredeyse imkansız olurdu. Wholemounts da ventrikül temas apikal süreci ile nöral kök hücrelerin belirlenmesini kolaylaştıracaktır. Bu kök hücreler için daha spesifik belirteçler olarak, wholemounts sinir kök hücre davranışının belirlenmesi ve analiz ayrılmaz bir parçası olacaktır. Lateral ventrikül duvarları Wholemounts ependimal hücreler düzlemsel polarite çalışmak için ideal bir perspektif sağlamaktadır. Ependimal hücreler koordineli bir şekilde BOS itmek işlevi ventriküller astar multiciliated hücrelerdir. Wholemount tekniği ile, tüm ependim epiteli en-face maruz kalmaktadır ve posterior ve dorsal ventral sınırları boyanmış ve onun anterior kapsamlı incelenebilir. Ayrıca, ependim akış testleri akut disseke, canlı wholemounts sağlam ependim kirpikler tarafından oluşturulan düzlemsel polarize akış göstermektedir. Son çalışmalar wholemount yaklaşımları kullanarak bu ependim düzlemsel polarite 5 hücresel belirleyicileri ortaya çıkardı. İlginçtir ki, wholemount çalışmalar da ependim oluşturulan BOS akım SVZ 7 genç nöronların göç kılavuzu chemorepellents gradyanlar kurar düşündürmektedir. Bu nedenle başlangıçta göçmen nöron zincirleri ağ tespit Wholemount yaklaşımlar zinciri göç düzenleyen mekanizmalar açılımlar sağlamaya devam etmektedir. Wholemount görüntüleme VZ ve SVZ Analizi, hem de gelecekteki çalışmaları ve mevcut çalışmaları anlayışımız açıklığa kavuşturmak için bir yol için yeni bir yaklaşım ekliyor. Örneğin, yeni bir çalışmada, yetişkin SVZ nöral kök hücreler ventrikül 8 ile temas CD133 + / CD24-hücreler olduğunu düşündürmektedir . Bölümlerde kendi immün dayanarak, bu yazarların bu hücrelerin bir ICSI&#39;nin multiciliated ependimal hücreler olduğunu iddia etti. Ancak, bizim çalışmamızda tüm ependim epitel daha kapsamlı bir görünüm verir wholemount yaklaşım kullanarak, bulduğu tüm ependimal hücreler ifade CD24 ve tek ventrikül temas B1 tipi bir alt kümesi + / CD24-CD133 hücrelerin hücreleri 4. Ayrıca, wholemount teknikle, yetişkin beyin 9 sinir kök hücrelerinin son açıklanan mozaik organizasyon inceleyerek gelecekteki çalışmalarda faydalı olmayı vaat ediyor . Çeşitli çalışmalar, yetişkin bir insanın beyninin nöral kök hücreler homojen bir nüfus olduğunu göstermiştir, fakat bölgesel belirtilen ve normal koku alma ampul internöronlar yalnızca belirli alt tipleri üretmek. Bu çalışmalar, nöral kök hücrelerin farklı alt popülasyonlar özel transkripsiyon faktörleri 10,11,12,13,14 ve / veya dorsal-ventral ve ön-arka kapsamlarını boyunca bölgesel localisation ifade ayırt edilebilir olduğunu önerdi lateral duvar 9,15,16. Yetişkin nöral kök hücrelerin bölgesel belirtilen alt popülasyonlar daha moleküler belirteçlerin tespit olarak, wholemount görüntüleme ventrikül duvar boyunca bu farklı progenitör etki bölümlenmesi kapsamlı bir bakış vermelidir. Burada sunulan wholemount diseksiyon ve görüntüleme teknikleri de ventriküler duvarları embriyo analiz etmek için kullanılıyor olabilir. Embriyonik lateral duvar diseksiyonu, adım-adım, aynı şekilde yapılır. Zorluk seviyesinde sadece ufak farklar vardır; embriyonik ventriküller diseksiyonu kolaylaştırır görece daha büyük, ancak doku manipülasyonu daha zor hale yumuşaktır. Özellikle lateral ventrikül benzer bir poz Embry kullanılabiliros kortikal kortikal nöron çalışmada ventrikül duvar incelemek. Son kanıtlar, bu asimetrik centrosome miras kortikal nöron 17 sırasında ventrikül yüzeyinde radyal glia korur göstermektedir . En yüze radyal glial apikal yüzeyleri görüntüleme bu bölünen hücreleri içinde centrosomes asimetrik miras nasıl içgörüler sağlayabilir. Özellikle en hassas becerisi içeren bu teknikleri, olduğu gibi, ustalık pratik gerektirir. Ancak, daha iyi sonuçlar için anahtar diseksiyonu birkaç elemanları vardır: 1) aydınlatma gölgeler oluşturmak için örnek aydınlatma ayarlama gibi forseps kullanarak), aksi takdirde 2 nispeten homojen doku diseksiyonu sırasında paha biçilmez bir kontrast sağlar birlikte çimdik veya doku almak için kullanılan bu tekniğin iki böcek pimleri forseps asla, ama manevra pimleri dokuyu stabilize etmek için sürekli yeniden olabilir), nazik retraksiyon bir denge 3 kesme ve kesme bıçak olmamalıdır olarak kullanılır sadece kesmek için değil, aynı zamanda bu diseksiyon çoğunluğu aslında sadece aralıklı kesme nazik retraksiyonu ile gerçekleştirilir olduğunu hatırlayarak, medial ve lateral duvarlar ayrı nazik retraksiyon sağlamak için kullanılır.

the subventricular zone en-face: wholemount staining and ependymal flow

Lateral ventriküllerin duvarları en büyük yetişkin memelilerin beyin germinal bölge içerir. Bu duvarlar subventricular bölgesi (SVZ), davranış ve sinir kök hücrelerinin, yetişkin nöron düzenlenmesi anlamak için yoğun çalışılan bir model sistem. Geleneksel olarak, bu çalışmalar, histolojik analizi için klasik kesit teknikleri konusunda yararlanmıştır. Burada, bu germinal bölgenin kapsamlı, en-yüz görünümü sağlar wholemount tekniği, alternatif bir yaklaşım sunuyoruz. Bölümlerini, wholemounts SVZ içinde, tam hücre mimarisini ve hücresel ilişkileri korumak. Bu yaklaşım son zamanlarda yetişkin sinir kök hücreleri, ya da tip B1 hücreleri, lateral ventriküller astar farklılaştırılmış ependim hücreleri ile karışık bir neuroepithelium parçası olduğunu ortaya koymuştur. Buna ek olarak, bu yaklaşım ventrikül üreten ependim hücreleri ve beyin omurilik sıvısı akış düzlemsel kutuplaşma incelemek için kullanılır olmuştur. Yetişkin sinir kök hücrelerinin bölgesel belirtilen heterojen bir nüfus olduğunu son kanıtlar, wholemount yaklaşım muhtemelen bu kök hücre nişinin organizasyon ve Parselasyon anlamak için önemli bir araç olacaktır.

Watch this Scientific Journal Video about The Subventricular Zone En-face: Wholemount Staining and Ependymal Flow at JoVE.com

The Subventricular Zone En-face: Wholemount Staining and Ependymal Flow

Lateral ventrikül duvarları en büyük yetişkin memelilerin beyin germinal bölge içerir. Geleneksel olarak, bu bölgedeki nöron çalışmaları klasik histolojik analiz için kesit alma teknikleri dayanıyordu. Burada, bu germinal bölgenin kapsamlı, en-yüz görünümü sağlar wholemount tekniği, alternatif bir yaklaşım sunuyoruz.

En yüze Subventricular Bölge: Wholemount Boyama ve ependim Akış

The walls of the lateral ventricles contain the largest germinal region in the adult mammalian brain. The subventricular zone (SVZ) in these walls is an ...

the-subventricular-zone-en-face-wholemount-staining-and-ependymal-flow

Research

JoVE Journal

Neuroscience

41.6K Görüntüleme.  University of California, San Francisco - UCSF. Lateral ventrikül duvarları en büyük yetişkin memelilerin beyin germinal bölge içerir. Geleneksel olarak, bu bölgedeki nöron çalışmaları klasik histolojik analiz için kesit alma teknikleri dayanıyordu. Burada, bu germinal bölgenin kapsamlı, en-yüz görünümü sağlar wholemount tekniği, alternatif bir yaklaşım sunuyoruz.