Lavoro sostenuto da NIH concedere HD-32116, la Famiglia Sandler Sostenere Foundation, The John Bowes Fondo di cellule staminali, MEXT, MHLW, e HFSP. ZM sostenuto dalla Fondazione Baldoceda Carlos e UCSF Krevans Fellowship. AA-B. detiene il Heather e Melanie Muss presidente Dotata.

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	<li>Doetsch, F., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Network+of+tangential+pathways+for+neuronal+migration+in+adult+mammalian+brain.">Network of tangential pathways for neuronal migration in adult mammalian brain.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 93, 14895-14900 (1996).</li><li>Shen, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+SVZ+stem+cells+lie+in+a+vascular+niche:+a+quantitative+analysis+of+niche+cell-cell+interactions.">Adult SVZ stem cells lie in a vascular niche: a quantitative analysis of niche cell-cell interactions.</a> Cell Stem Cell. 3, 289-300 (2008).</li><li>Tavazoie, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+specialized+vascular+niche+for+adult+neural+stem+cells.">A specialized vascular niche for adult neural stem cells.</a> Cell Stem Cell. 3, 279-288 (2008).</li><li>Mirzadeh, Z., Merkle, F. T., Soriano-Navarro, M., Garcia-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+stem+cells+confer+unique+pinwheel+architecture+to+the+ventricular+surface+in+neurogenic+regions+of+the+adult+brain.">Neural stem cells confer unique pinwheel architecture to the ventricular surface in neurogenic regions of the adult brain.</a> Cell Stem Cell. 3, 265-278 (2008).</li><li>Mirzadeh, Z., Han, Y. G., Soriano-Navarro, M., Garcia-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cilia+organize+ependymal+planar+polarity.">Cilia organize ependymal planar polarity.</a> J Neurosci. 30, 2600-2610 (2010).</li><li>Doetsch, F., Garcia-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regeneration+of+a+germinal+layer+in+the+adult+mammalian+brain.">Regeneration of a germinal layer in the adult mammalian brain.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 96, 11619-11624 (1999).</li><li>Sawamoto, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+neurons+follow+the+flow+of+cerebrospinal+fluid+in+the+adult+brain.">New neurons follow the flow of cerebrospinal fluid in the adult brain.</a> Science. 311, 629-632 (2006).</li><li>Coskun, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD133++neural+stem+cells+in+the+ependyma+of+mammalian+postnatal+forebrain.">CD133+ neural stem cells in the ependyma of mammalian postnatal forebrain.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 105, 1026-1031 (2008).</li><li>Merkle, F. T., Mirzadeh, Z., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mosaic+organization+of+neural+stem+cells+in+the+adult+brain.">Mosaic organization of neural stem cells in the adult brain.</a> Science. 317, 381-384 (2007).</li><li>Young, K. M., Fogarty, M., Kessaris, N., Richardson, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subventricular+zone+stem+cells+are+heterogeneous+with+respect+to+their+embryonic+origins+and+neurogenic+fates+in+the+adult+olfactory+bulb.">Subventricular zone stem cells are heterogeneous with respect to their embryonic origins and neurogenic fates in the adult olfactory bulb.</a> J Neurosci. 27, 8286-8296 (2007).</li><li>Waclaw, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+zinc+finger+transcription+factor+Sp8+regulates+the+generation+and+diversity+of+olfactory+bulb+interneurons.">The zinc finger transcription factor Sp8 regulates the generation and diversity of olfactory bulb interneurons.</a> Neuron. 49, 503-516 (2006).</li><li>Kohwi, M., Osumi, N., Rubenstein, J. L., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pax6+is+required+for+making+specific+subpopulations+of+granule+and+periglomerular+neurons+in+the+olfactory+bulb.">Pax6 is required for making specific subpopulations of granule and periglomerular neurons in the olfactory bulb.</a> J Neurosci. 25, 6997-7003 (2005).</li><li>Kohwi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+subpopulation+of+olfactory+bulb+GABAergic+interneurons+is+derived+from+Emx1-+and+Dlx5/6-expressing+progenitors.">A subpopulation of olfactory bulb GABAergic interneurons is derived from Emx1- and Dlx5/6-expressing progenitors.</a> J Neurosci. 27, 6878-6891 (2007).</li><li>Hack, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+fate+determinants+of+adult+olfactory+bulb+neurogenesis.">Neuronal fate determinants of adult olfactory bulb neurogenesis.</a> Nat Neurosci. , (2005).</li><li>Ventura, R. E., Goldman, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dorsal+radial+glia+generate+olfactory+bulb+interneurons+in+the+postnatal+murine+brain.">Dorsal radial glia generate olfactory bulb interneurons in the postnatal murine brain.</a> J Neurosci. 27, 4297-4302 (2007).</li><li>Kelsch, W., Mosley, C. P., Lin, C. W., Lois, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+mammalian+precursors+are+committed+to+generate+neurons+with+defined+dendritic+projection+patterns.">Distinct mammalian precursors are committed to generate neurons with defined dendritic projection patterns.</a> PLoS Biol. 5, e300 (2007).</li><li>Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Asymmetric+centrosome+inheritance+maintains+neural+progenitors.">Asymmetric centrosome inheritance maintains neural progenitors.</a> Nature. 461, 947-955 (2009).</li></ol>

La maggior parte degli studi di neurogenesi in zone ventricolare e subventricolare hanno fatto affidamento su tecniche classiche di sezionamento per esaminare la microanatomia e le relazioni cellulare in queste regioni. Qui si descrive una tecnica alternativa, prima utilizzato per analizzare la rete di catene migratorie dei neuroblasti generati nella SVZ 1, poi utilizzati per studiare la rigenerazione della popolazione progenitore SVZ seguenti anti-mitotico trattamento di 6, e più recentemente utilizzato per studiare il apicale preciso basali e interazioni cellula-cellula di cellule staminali neurali SVZ 2,3,4. È interessante notare che questa tecnica ha rivelato che le cellule staminali neurali, o cellule di tipo B1, dell&#39;adulto SVZ sono parte di un neuroepitelio mescolato con differenziate non si dividono le cellule ependimali. En-faccia con l&#39;imaging wholemounts ha dimostrato che questa architettura ha misto neuroepitelio girandola consistente delle terminazioni apicale delle cellule di tipo B1 circondata da ampie superfici apicale delle cellule ependimali 4. Questo en-faccia analisi ha chiarito la nostra comprensione della stirpe di cellule staminali neurali nel cervello embrionali e adulte come composto di cellule con terminazioni apicali in superficie ventricolo e dei processi basali contattando una nicchia vascolare. Questi risultati sarebbe stato quasi impossibile con le tecniche classiche di sezionamento. Wholemounts anche facilitare l&#39;identificazione delle cellule staminali neurali tramite il loro ventricolo-contattando processo apicale. Come marcatori più specifici per queste cellule staminali si trovano, wholemounts sarà parte integrante di identificare e analizzare il comportamento delle cellule staminali neurali. Wholemounts delle pareti ventricolo laterale forniscono anche la prospettiva ideale per studiare la polarità planare delle cellule ependimali. Cellule ependimali sono cellule multiciliated rivestimento dei ventricoli che la funzione di spingere CSF in modo coordinato. Con la tecnica wholemount, l&#39;epitelio intero ependimali è esposto en-face e può essere colorato e studiato ampiamente dalla sua anteriore confini ventrale e dorsale posteriore al. Inoltre, le analisi di flusso ependimali eseguita su acutamente sezionato, wholemounts vivere robustamente dimostrare il flusso planare polarizzata generata da ciglia ependimali. Un recente lavoro utilizzando approcci wholemount ha scoperto determinanti cellulari di questa polarità planare ependimali 5. È interessante notare che gli studi wholemount hanno anche suggerito che ependimali-ha generato un flusso CSF stabilisce gradienti di chemorepellents che guidano la migrazione dei neuroni giovani nel SVZ 7. Approcci Wholemount che inizialmente individuato la rete di catene migratorie neuronali sono quindi continuando a fornire conoscenze sui meccanismi che regolano la migrazione a catena. Analisi del VZ e SVZ da wholemount di imaging aggiunge un nuovo approccio per entrambi gli studi futuri e un modo per chiarire la nostra comprensione degli studi già esistenti. Per esempio, un recente studio ha suggerito che le cellule staminali neurali nel SVZ adulti erano CD133 + / CD24-cellule a contatto con il ventricolo 8. Sulla base delle loro immunostaining in sezioni, questi autori hanno affermato che queste cellule erano una sottopopolazione di cellule ependimali multiciliated. Tuttavia, nel nostro studio, utilizzando l&#39;approccio wholemount, che dà una visione più completa dell&#39;epitelio intero ependimali, abbiamo scoperto che tutte le cellule ependimali esprimere CD24 ed il solo ventricolo a contatto le cellule che sono state CD133 + / CD24-sono un sottoinsieme del tipo B1 cellule 4. Inoltre, la tecnica wholemount promette di essere utili in studi futuri esaminando l&#39;organizzazione mosaico recentemente descritta delle cellule staminali neurali nel cervello adulto 9. Diversi studi hanno dimostrato che le cellule staminali neurali nel cervello adulto non sono una popolazione omogenea, ma sono specificati regionale e normalmente producono solo specifici sottotipi di interneuroni bulbo olfattivo. Questi studi hanno proposto che diverse sottopopolazioni di cellule staminali neurali possono essere distinti sia per l&#39;espressione di specifici fattori di trascrizione 10,11,12,13,14 e / o dalla loro localizzazione regionale lungo le estensioni dorso-ventrale e antero-posteriore del parete laterale 9,15,16. Come più marcatori molecolari di sottopopolazioni regionale specificato di cellule staminali neurali adulte sono identificate, l&#39;imaging wholemount dovrebbe fornire una visione completa della parcelation di questi domini progenitore diversi lungo la parete ventricolare. La dissezione wholemount e tecniche di immagini presentate qui possono anche essere utilizzati per analizzare le pareti ventricolari nell&#39;embrione. La dissezione della parete laterale embrionale viene eseguita, passo dopo passo, nella stessa maniera. Ci sono solo piccole differenze nel livello di difficoltà, i ventricoli embrionali sono relativamente più grandi rendendo più facile la dissezione, ma il tessuto è più morbido rende più difficile la manipolazione. In particolare, una simile esposizione del ventricolo laterale può essere utilizzato in Embryos a sezionare la parete corticale del ventricolo per studiare neurogenesi corticale. Prove recenti suggeriscono che l&#39;eredità asimmetrica centrosoma mantiene glia radiale sulla superficie ventricolare durante la neurogenesi corticale 17. En-faccia immagini di superfici radiali gliali apicale possa fornire indicazioni su come centrosomi all&#39;interno di queste cellule che si dividono asimmetricamente sono ereditate. Come la maggior parte delle tecniche, specialmente quelle che implicano l&#39;abilità precise, padronanza richiede pratica. Ci sono, tuttavia, alcuni elementi della dissezione che sono fondamentali per ottenere risultati migliori: 1) l&#39;illuminazione regolare l&#39;illuminazione del campione per creare ombre fornisce contrasto prezioso durante la dissezione dei tessuti che altrimenti relativamente omogenea, 2) usando le pinze, come due perni insetti la pinza in questa tecnica non sono mai usati per pizzicare insieme o prendere tessuti, ma sono utilizzati come perni maneggevole che può essere continuamente riadattato per stabilizzare il tessuto durante il taglio, 3) un equilibrio di dolce ritrattazione e il taglio del coltello non deve essere usato solo per tagliare ma anche per fornire retrazione dolce per separare le pareti mediale e laterale, ricordando che la maggior parte di questa dissezione viene effettivamente eseguita attraverso rientro dolce solo con il taglio intermittente.

the subventricular zone en-face: wholemount staining and ependymal flow

Le pareti dei ventricoli laterali contengono la più grande regione germinale nel cervello adulto dei mammiferi. La zona subventricolare (SVZ) di queste mura è un modello di sistema ampiamente studiati per capire il comportamento delle cellule staminali neurali e la regolazione della neurogenesi adulta. Tradizionalmente, questi studi si sono basati su tecniche classiche di sezionamento per l&#39;analisi istologica. Qui vi presentiamo un approccio alternativo, la tecnica wholemount, che fornisce un approccio globale, en-faccia vista di questa regione germinale. Rispetto alle sezioni, wholemounts preservare la citoarchitettura cellulare completo e le relazioni all&#39;interno della SVZ. Questo approccio ha recentemente rivelato che le cellule nervose adulte o cellule di tipo B1, fanno parte di un neuroepitelio mescolato con differenziate cellule ependimali rivestimento dei ventricoli laterali. Inoltre, questo approccio è stato utilizzato per studiare la polarizzazione planare delle cellule ependimali e il flusso del fluido cerebrospinale che esse generano nel ventricolo. Con i recenti evidenze che cellule staminali neurali adulte sono una popolazione eterogenea che è regionale specifica, l&#39;approccio wholemount probabilmente sarà uno strumento essenziale per comprendere l&#39;organizzazione e la parcellizzazione di questa nicchia delle cellule staminali.

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The Subventricular Zone En-face: Wholemount Staining and Ependymal Flow

Le pareti del ventricolo laterale contiene la più grande regione germinale nel cervello adulto dei mammiferi. Tradizionalmente, gli studi sulla neurogenesi in questa regione hanno fatto affidamento su tecniche classiche di sezionamento per l&#39;analisi istologica. Qui vi presentiamo un approccio alternativo, la tecnica wholemount, che fornisce un approccio globale, en-faccia vista di questa regione germinale.

La zona subventricolare En-face: colorazione Wholemount e flusso ependimale

The walls of the lateral ventricles contain the largest germinal region in the adult mammalian brain. The subventricular zone (SVZ) in these walls is an ...

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