Este trabajo fue financiado por los Institutos Nacionales de Salud (R01-HD044750), una subvención de carrera de la Fundación Nacional de Ciencias, y el apoyo de la Asociación Americana del Corazón (A partir de Grant-in-Aid). Los autores agradecen a los miembros del laboratorio de Davidson: HY Kim, M. y J. von Dassow Zhou (para ayudar en las tareas de laboratorio al día), y Zhang Lin por su ayuda en la biología molecular y la síntesis de ARNm. Reconocemos los esfuerzos experimentales de los laboratorios de la rana (especialmente Ray Keller y Doug DeSimone) que han contribuido a alguna parte de este protocolo, mediante el desarrollo y pruebas de los distintos métodos en los últimos años. Damos las gracias a Richard Harland y Wallingford Juan para sus regalos de tipo de miembros de las buenas prácticas agrarias y los plásmidos moesina-gfp respectivamente.

<ol>
	<li>Ninomiya, H., Winklbauer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+coating+controls+mesenchymal+shape+change+through+tissue-positioning+effects+and+reduction+of+surface-minimizing+tension.">Epithelial coating controls mesenchymal shape change through tissue-positioning effects and reduction of surface-minimizing tension.</a> Nat Cell Biol. 10 (1), 61-61 (2008).</li><li>Kay, B. K., Peng, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Xenopus laevis: Practical Uses in Cell and Molecular Biology. , (1991).</li><li>Cross, M. K., Powers, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Obtaining+eggs+from+Xenopus+laevis+females.">Obtaining eggs from Xenopus laevis females.</a> J Vis Exp. , (2008).</li><li>Cohen, S., Au, S., Pante, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microinjection+of+Xenopus+laevis+oocytes.">Microinjection of Xenopus laevis oocytes.</a> J Vis Exp. , (2009).</li><li>Nieuwkoop, P. D., Faber, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Normal Tables of Xenopus laevis (Daudin). , (1967).</li><li>Davidson, L. A., Ezin, A. M., Keller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+wound+healing+by+apical+contraction+and+ingression+in+Xenopus+laevis.">Embryonic wound healing by apical contraction and ingression in Xenopus laevis.</a> Cell Motil Cytoskeleton. 53 (3), 163-163 (2002).</li><li>Joshi, S. D., Dassow, M. v. o. n., Davidson, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+control+of+excitable+embryonic+tissues:+three+stimuli+induce+rapid+epithelial+contraction.">Experimental control of excitable embryonic tissues: three stimuli induce rapid epithelial contraction.</a> Exp Cell Res. 316 (1), 103-103 (2010).</li></ol>

Hemos presentado los protocolos experimentales utilizados regularmente en nuestro laboratorio para la imagen del citoesqueleto cambian dinámicamente en la corteza celular apical y oscilantes las membranas celulares de las células epiteliales en los embriones de Xenopus. Se debe utilizar estos protocolos como punto de partida para la creación de imágenes en vivo de las formas de las células epiteliales, la optimización de este protocolo es esencial, y algunos de los valores cambian en función del tipo de ...

live-cell imaging and quantitative analysis of embryonic epithelial cells in xenopus laevis

Embrionario las células epiteliales servir como un modelo ideal para estudiar la morfogénesis, donde multicelulares tejidos experimentan cambios en su geometría, tales como cambios en el área de la superficie celular y la altura de la celda, y donde las células sufren mitosis y la migración. Además, las células epiteliales también pueden regular los movimientos morfogenéticos en los tejidos adyacentes<sup&gt; 1</sup&gt;. Un método tradicional para estudiar las células epiteliales y los tejidos implican la fijación química y métodos histológicos para determinar la morfología de las células o la localización de las proteínas de interés. Estos enfoques siguen siendo útiles y proporcionar &quot;instantáneas&quot; de las formas celulares y la arquitectura del tejido, sin embargo, aún queda mucho por comprender acerca de cómo las células adquieren formas específicas, como diversas proteínas se mueven o localizar a los puestos específicos, y lo que las células caminos seguir hacia su destino final destino diferenciado. De alta resolución de imágenes en directo complementa los métodos tradicionales y también permite una investigación más directa en los procesos celulares implicados en la dinámica, la formación, mantenimiento y morfogénesis de las hojas epiteliales multicelulares. Aquí nos demuestran los métodos experimentales de la tapa de aislamiento de los tejidos de los animales de<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Embriones de imagen confocal de células epiteliales y métodos sencillos de medición que en conjunto pueden aumentar los estudios moleculares y celulares de la morfogénesis epitelial.

Watch this Scientific Journal Video about Live-cell Imaging and Quantitative Analysis of Embryonic Epithelial Cells in Xenopus laevis at JoVE.com

Live-cell Imaging and Quantitative Analysis of Embryonic Epithelial Cells in Xenopus laevis

Xenopus epitelios embrionarios son un sistema modelo ideal para estudiar los comportamientos celulares, tales como el desarrollo de la polaridad y cambiar de forma durante la morfogénesis epitelial. Histología tradicional de muestras fijas cada vez se complementa con células vivas de imagen confocal. Aquí se demuestra métodos para aislar los tejidos de rana y visualizar en directo las células epiteliales y su citoesqueleto utilizando células vivas, la microscopía confocal.

Células vivas, imágenes y análisis cuantitativo de las células epiteliales embrionarias en Xenopus laevis</em

Embryonic epithelial cells serve as an ideal model to study morphogenesis where multi-cellular tissues undergo changes in their geometry, such as changes ...

live-cell-imaging-quantitative-analysis-embryonic-epithelial-cells

Research

JoVE Journal

Biology

Live-cell Imaging and Quantitative Analysis of Embryonic Epithelial Cells in Xenopus laevis

14.9K vistas.  University of Pittsburgh. Xenopus epitelios embrionarios son un sistema modelo ideal para estudiar los comportamientos celulares, tales como el desarrollo de la polaridad y cambiar de forma durante la morfogénesis epitelial. Histología tradicional de muestras fijas cada vez se complementa con células vivas de imagen confocal. Aquí se demuestra métodos para aislar los tejidos de rana y visualizar en directo las células epiteliales y su citoesqueleto utilizando células vivas, la micr...