Questo lavoro è stato supportato da una National Institutes of Health (R01-HD044750), una borsa di studio dalla National Science Foundation, e il supporto della American Heart Association (inizio Grant-in-Aid). Gli autori ringraziano i membri Davidson Lab: HY Kim, M. von Dassow e J. Zhou (per un aiuto con responsabilità di laboratorio tutti i giorni), e Lin Zhang per la sua assistenza nel campo della biologia molecolare e la sintesi di mRNA. Noi riconosciamo gli sforzi sperimentali da tutti i laboratori rana (soprattutto Ray Keller e Doug DeSimone) che hanno contribuito ad una parte di questo protocollo, attraverso lo sviluppo e metodi di prova diversi nel corso degli anni. Ringraziamo Richard Harland e John Wallingford per i loro doni tipo di mem-GFP e moesina-GFP plasmidi rispettivamente.

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	<li>Ninomiya, H., Winklbauer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+coating+controls+mesenchymal+shape+change+through+tissue-positioning+effects+and+reduction+of+surface-minimizing+tension.">Epithelial coating controls mesenchymal shape change through tissue-positioning effects and reduction of surface-minimizing tension.</a> Nat Cell Biol. 10 (1), 61-61 (2008).</li><li>Kay, B. K., Peng, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Xenopus laevis: Practical Uses in Cell and Molecular Biology. , (1991).</li><li>Cross, M. K., Powers, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Obtaining+eggs+from+Xenopus+laevis+females.">Obtaining eggs from Xenopus laevis females.</a> J Vis Exp. , (2008).</li><li>Cohen, S., Au, S., Pante, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microinjection+of+Xenopus+laevis+oocytes.">Microinjection of Xenopus laevis oocytes.</a> J Vis Exp. , (2009).</li><li>Nieuwkoop, P. D., Faber, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Normal Tables of Xenopus laevis (Daudin). , (1967).</li><li>Davidson, L. A., Ezin, A. M., Keller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+wound+healing+by+apical+contraction+and+ingression+in+Xenopus+laevis.">Embryonic wound healing by apical contraction and ingression in Xenopus laevis.</a> Cell Motil Cytoskeleton. 53 (3), 163-163 (2002).</li><li>Joshi, S. D., Dassow, M. v. o. n., Davidson, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+control+of+excitable+embryonic+tissues:+three+stimuli+induce+rapid+epithelial+contraction.">Experimental control of excitable embryonic tissues: three stimuli induce rapid epithelial contraction.</a> Exp Cell Res. 316 (1), 103-103 (2010).</li></ol>

Nessun conflitto di interessi dichiarati.

Abbiamo presentato protocolli sperimentali usati regolarmente nel nostro laboratorio di citoscheletro immagine che cambiano dinamicamente nella corteccia cellula apicale e oscillante membrane cellulari delle cellule epiteliali in embrioni di Xenopus. Si dovrebbe utilizzare questi protocolli come punto di partenza per il live-imaging delle forme delle cellule epiteliali, ottimizzazione di questo protocollo è essenziale e alcune delle impostazioni cambia a seconda del tipo di sistema microscopio si ha e il tipo ...

live-cell imaging and quantitative analysis of embryonic epithelial cells in xenopus laevis

Embrionale cellule epiteliali servire come un modello ideale per studiare la morfogenesi in cui multicellulari tessuti subiscono cambiamenti nella loro geometria, quali i cambiamenti nella zona delle cellule di superficie e altezza della cella, e dove le cellule subiscono mitosi e migrano. Inoltre, le cellule epiteliali possono anche regolare i movimenti morfogenetici nei tessuti adiacenti<sup&gt; 1</sup&gt;. Un metodo tradizionale per lo studio delle cellule epiteliali e dei tessuti coinvolgere fissaggio chimico e metodi istologici per determinare la morfologia cellulare o la localizzazione di proteine ​​di particolare interesse. Questi approcci continuano ad essere utili e fornire &quot;istantanee&quot; di forme e l&#39;architettura delle cellule dei tessuti, tuttavia, resta ancora molto da capire su come le cellule acquisiscono forme specifiche, come le proteine ​​varie spostare o localizzare in posizioni specifiche, e ciò che le cellule seguono percorsi verso la loro definitiva destino differenziato. Ad alta risoluzione di immagini dal vivo integra i metodi tradizionali e consente anche un&#39;indagine più diretto nei processi dinamici cellulari coinvolti nella formazione, manutenzione, e morfogenesi dei pluricellulari fogli epiteliali. Qui mostriamo metodi sperimentali dall&#39;isolamento dei tessuti animali da tappo<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Embrioni per l&#39;imaging confocale di cellule epiteliali e gli approcci di misurazione semplice, che insieme possono aumentare gli studi molecolari e cellulari della morfogenesi epiteliale.

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Live-cell Imaging and Quantitative Analysis of Embryonic Epithelial Cells in Xenopus laevis

Xenopus embrionale epiteli sono un sistema modello ideale per studiare i comportamenti delle cellule, come lo sviluppo di polarità e cambiare forma durante la morfogenesi epiteliale. Istologia tradizionale di campioni fisso è sempre più integrato da live-cell imaging confocale. Qui mostriamo metodi per isolare i tessuti rana e visualizzare dal vivo le cellule epiteliali e le loro citoscheletro con live-cell microscopia confocale.

Live-cell imaging e analisi quantitativa della embrionali in cellule epiteliali Xenopus laevis</em

Embryonic epithelial cells serve as an ideal model to study morphogenesis where multi-cellular tissues undergo changes in their geometry, such as changes ...

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Live-cell Imaging and Quantitative Analysis of Embryonic Epithelial Cells in Xenopus laevis

14.9K Views.  University of Pittsburgh. Xenopus embrionale epiteli sono un sistema modello ideale per studiare i comportamenti delle cellule, come lo sviluppo di polarità e cambiare forma durante la morfogenesi epiteliale. Istologia tradizionale di campioni fisso è sempre più integrato da live-cell imaging confocale. Qui mostriamo metodi per isolare i tessuti rana e visualizzare dal vivo le cellule epiteliali e le loro citoscheletro con live-cell microscopia confocale.