Diese Arbeit wurde von der National Institutes of Health (R01-HD044750), ein Career-Stipendium der National Science Foundation und unterstützt von der American Heart Association (Beginning Grant-in-Aid) unterstützt. Die Autoren danken Davidson Lab Mitglieder: HY Kim, M. von Dassow und J. Zhou (für Hilfe bei den täglichen Aufgaben lab) und Lin Zhang für ihre Unterstützung in der Molekularbiologie und der Synthese von mRNA. Wir erkennen an experimentellen Anstrengungen aller Frosch Labors (insbesondere Ray Keller und Doug DeSimone ist), die bis zu einem gewissen Teil dieses Protokolls beigetragen haben, durch die Entwicklung und Erprobung verschiedener Methoden im Laufe der Jahre. Wir danken Richard Harland und John Wallingford für die freundliche Gaben der MEM-gfp und Moesin-gfp Plasmide jeweils.

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	<li>Ninomiya, H., Winklbauer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+coating+controls+mesenchymal+shape+change+through+tissue-positioning+effects+and+reduction+of+surface-minimizing+tension.">Epithelial coating controls mesenchymal shape change through tissue-positioning effects and reduction of surface-minimizing tension.</a> Nat Cell Biol. 10 (1), 61-61 (2008).</li><li>Kay, B. K., Peng, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Xenopus laevis: Practical Uses in Cell and Molecular Biology. , (1991).</li><li>Cross, M. K., Powers, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Obtaining+eggs+from+Xenopus+laevis+females.">Obtaining eggs from Xenopus laevis females.</a> J Vis Exp. , (2008).</li><li>Cohen, S., Au, S., Pante, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microinjection+of+Xenopus+laevis+oocytes.">Microinjection of Xenopus laevis oocytes.</a> J Vis Exp. , (2009).</li><li>Nieuwkoop, P. D., Faber, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Normal Tables of Xenopus laevis (Daudin). , (1967).</li><li>Davidson, L. A., Ezin, A. M., Keller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+wound+healing+by+apical+contraction+and+ingression+in+Xenopus+laevis.">Embryonic wound healing by apical contraction and ingression in Xenopus laevis.</a> Cell Motil Cytoskeleton. 53 (3), 163-163 (2002).</li><li>Joshi, S. D., Dassow, M. v. o. n., Davidson, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+control+of+excitable+embryonic+tissues:+three+stimuli+induce+rapid+epithelial+contraction.">Experimental control of excitable embryonic tissues: three stimuli induce rapid epithelial contraction.</a> Exp Cell Res. 316 (1), 103-103 (2010).</li></ol>

Wir haben experimentelle Protokolle regelmäßig in unserem Labor zu Bild dynamisch verändernden Zytoskeletts in der apikalen Zell-Kortex und oszillierenden Zellmembranen von Epithelzellen in Xenopus Embryonen verwendet präsentiert. Man sollte diese Protokolle als Ausgangspunkt für die Live-Darstellung von Epithelzellen Formen verwenden; Optimierung dieses Protokoll ist wichtig, und einige der Einstellungen ändern, abhängig von der Art des Mikroskop-System man hat und die Art der Proteine ​​ist man in ...

live-cell imaging and quantitative analysis of embryonic epithelial cells in xenopus laevis

Embryonale Epithelzellen dienen als ideales Modell, um Morphogenese Studie, in der multi-Zellgewebe Veränderungen in ihrer Geometrie, wie Veränderungen in der Zelle Oberfläche und Zellenhöhe unterziehen, und wo Zellen durchlaufen Mitose und Migration. Darüber hinaus können Epithelzellen regulieren auch morphogenetischen Bewegungen in benachbarte Gewebe<sup&gt; 1</sup&gt;. Eine traditionelle Methode zur epithelialen Zellen und Geweben Studie beinhalten chemische Fixierung und histologische Methoden, um Zellmorphologie oder Lokalisierung bestimmter Proteine ​​von Interesse zu bestimmen. Diese Ansätze weiterhin nützlich zu sein und bieten &quot;Schnappschüsse&quot; von Zellformen und Gewebe-Architektur, aber es bleibt noch viel zu überlegen, wie Zellen erwerben spezifische Formen, wie verschiedene Proteine ​​oder verschieben zu lokalisieren, um bestimmte Positionen, und welche Wege Zellen zu ihrer endgültigen folgen verstanden werden differenzierte Schicksal. Hochauflösende Live-Bildgebung ergänzt herkömmliche Methoden und erlaubt auch mehr direkte Untersuchung der Dynamik zellulärer Prozesse bei der Bildung, Wartung und Morphogenese vielzelliger epithelialen Blatt beteiligt. Hier zeigen wir experimentelle Methoden aus der Isolation des Tieres Kappe Gewebe aus<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Embryonen konfokale Bildgebung von Epithelzellen und einfache Messung Ansätze, die zusammen molekularen und zellulären Studien der epithelialen Morphogenese erweitern können.

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Live-cell Imaging and Quantitative Analysis of Embryonic Epithelial Cells in Xenopus laevis

Xenopus embryonalen Epithelien sind ein ideales Modellsystem, um die Zelle Verhaltensweisen wie Polarität Entwicklung und Formänderung beim epithelialen Morphogenese zu studieren. Traditionelle Histologie des festen Proben wird zunehmend durch Live-Cell-konfokale Bildgebung ergänzt. Hier zeigen wir Methoden, um Frosch Gewebe zu isolieren und zu visualisieren leben Epithelzellen und deren Zytoskelett mit Live-cell konfokalen Mikroskopie.

Live-Cell-Imaging und Quantitative Analyse der embryonalen Epithelzellen in Xenopus laevis</em

Embryonic epithelial cells serve as an ideal model to study morphogenesis where multi-cellular tissues undergo changes in their geometry, such as changes ...

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Live-cell Imaging and Quantitative Analysis of Embryonic Epithelial Cells in Xenopus laevis

14.9K Aufrufe.  University of Pittsburgh. Xenopus embryonalen Epithelien sind ein ideales Modellsystem, um die Zelle Verhaltensweisen wie Polarität Entwicklung und Formänderung beim epithelialen Morphogenese zu studieren. Traditionelle Histologie des festen Proben wird zunehmend durch Live-Cell-konfokale Bildgebung ergänzt. Hier zeigen wir Methoden, um Frosch Gewebe zu isolieren und zu visualisieren leben Epithelzellen und deren Zytoskelett mit Live-cell konfokalen Mikroskopie.