Immunofluorescent Detection of Adipose-Derived Stem Cell Expression Markers

Comience lavando las células madre murinas derivadas de tejido adiposo en una placa de seis pocillos con dos mililitros de tampón de lavado. Agregue un mililitro de reactivo bloqueador después de incubar y lavar las células tres veces. Incubar las células con agitación lenta durante 20 minutos.

Agregue 200 microlitros de los anticuerpos primarios a cada pocillo e incube durante la noche a cuatro grados centígrados. Después de lavar las placas tres veces como se demostró anteriormente, incubar con 200 microlitros de los anticuerpos secundarios. Contrateñir los núcleos celulares con 100 microlitros de DRAQ7 durante 20 minutos después de lavar las placas tres veces.

Repita el lavado y monte las diapositivas. Visualice los portaobjetos montados bajo microscopía confocal de epifluorescencia. Las células madre derivadas de tejido adiposo fueron 100% positivas para los marcadores de superficie CD9 en todos los subpasajes probados.

Todas las células expresaron marcadores CD63 en los subpasajes uno, tres y nueve, mientras que el 49,3% de las células lo expresaron en el pasaje siete. Los marcadores CD34 estaban ausentes en los pasajes uno, siete y nueve, pero visibles en el pasaje tres.