Comience tomando de 500 a 1000 nanogramos de la escasa biblioteca de ADN celular. Secar el ADN con un concentrador de vacío y resuspenderlo en 3,4 microlitros de agua libre de nucleasas. Después de agregar los bloqueadores, y mientras está en el termociclador, a 65 grados centígrados, transfiera la solución de hibridación con el ARN biotinilado a la biblioteca bloqueada.
Después de cerrar la tapa del tubo firmemente, incubar en el termociclador durante la noche a 65 grados centígrados. Luego transfiera 50 microlitros de perlas de estreptavidina T1 por muestra a un tubo de baja unión de ADN de 1.5 mililitros y colóquelas en un imán de tubo de 1.5 mililitros. Una vez que todas las cuentas estén pegadas a la pared, retire el sobrenadante dejando las cuentas atrás.
Ahora lave las perlas tres veces con 200 microlitros del tampón de unión del kit de enriquecimiento objetivo y vuelva a suspender las perlas en 200 microlitros de tampón de unión. Transfiera la muestra a las perlas resuspendidas mientras está en el termociclador e incube durante 30 minutos. Después de lavar las perlas con 200 microlitros de tampón de lavado 1, incubarlas durante 15 minutos, girando a temperatura ambiente.
Luego lave las perlas tres veces con 200 microlitros de tampón de lavado 2 calentado a 65 grados centígrados e incube en un bloque térmico. Finalmente, después de amplificar la biblioteca por PCR, realice una purificación de ADN utilizando perlas paramagnéticas agregando 270 microlitros de perlas de stock a la muestra y mezclando por vórtice. Un perfil de electroforesis automatizado de una biblioteca, justo antes de la captura, proporcionó 49,7 nanogramos por microlitro de ADN en un volumen de reacción de 20 microlitros.
Sin embargo, se obtienen 3,06 nanogramos por microlitro de ADN a partir de un perfil de electroforesis automatizada de alta sensibilidad de una biblioteca lixijizada terminada.
