Después de extraer el fémur y la tibia del ratón sacrificado, obtenga una microtomografía computarizada de seis a 10 micrómetros de resolución reconstruida para cada muestra para calcular la geometría del ejercicio. Descongele todos los huesos para analizarlos y asegúrese de analizar todos los huesos del mismo experimento en una sola sesión. Ahora ubique una célula de carga con sensibilidad y capacidad adecuadas para la muestra.
Teniendo en cuenta el rango de falla de la muestra, seleccione una celda de carga con un 50% más de capacidad mientras maximiza la sensibilidad. Ubique los accesorios de carga y soporte del tramo. Instale la célula de carga y los accesorios atornillando la célula de carga en el soporte superior del probador, fijando el dispositivo de carga superior a la célula de carga y montando el accesorio inferior en el soporte inferior del probador.
A continuación, seleccione una longitud de tramo de soporte, que permanecerá constante para todas las muestras. Utilice el hueso más corto del conjunto de muestras para determinar la distancia del tramo de soporte y oriente correctamente el hueso entre los accesorios. Realizar una prueba de flexión de tres puntos del fémur.
Coloque la superficie anterior del hueso contra el tramo de soporte, asegurándose de que la posición esté dentro de la diáfisis de la muestra. Excluir el tercer trocánter en el extremo proximal y el punto de transición donde el hueso se ensancha en la metáfisis y los cóndilos en el extremo distal. Asegúrese de que el tramo de carga esté centrado dentro del tramo de soporte y contenga una región uniforme del hueso.
A continuación, mida y registre la distancia del tramo de apoyo. Una vez que se haya establecido y registrado el tramo de soporte, acerque el accesorio inferior al accesorio superior con suficiente espacio entre los dos para colocar un hueso. Vuelva a colocar el hueso en solución salina o rehidratado con un bolo salino.
Asegúrese de que todas las piezas del accesorio estén apretadas y libres de movimiento. En el software del probador mecánico, diseñe un perfil de prueba de flexión con una velocidad de rampa de desplazamiento lenta para evitar efectos viscoelásticos para cargar el hueso hasta que falle. Después de crear un perfil de prueba, cree carpetas distintas para cada grupo de estudio.
Seleccione un hueso correctamente descongelado, luego mida y registre su longitud completa con calibradores. Cargue la muestra ósea en el accesorio en la orientación adecuada. Modifique el nombre del archivo para reflejar los detalles de la muestra que se está analizando y guarde cada prueba en su carpeta correspondiente.
Ponga a cero la carga y active el motor del sistema, asegurándose de que no esté en control de carga o desplazamiento. Aplique con cuidado una ligera precarga al hueso para asegurar su posición. Evite comprometer la muestra.
Apunte a una precarga de aproximadamente 0,25 Newtons. Asegúrese de que la orientación ósea deseada se mantenga constante antes de avanzar. Hidrata la muestra rociándola generosamente con solución salina.
En el software, inicie la prueba de flexión seleccionando iniciar o ejecutar. Es crucial observar la muestra durante la prueba con precisión, anotando cualquier incidencia de problemas. Vigile de cerca a medida que el hueso comienza a fracturarse.
Las pruebas se detienen automáticamente cuando alcanzan los límites establecidos. Pero si hay una falla, detenga la prueba manualmente para evitar dañar la celda de carga. Una vez completada la prueba, mida la longitud desde el extremo distal hasta el punto de ruptura con calibradores y regístrela.
