Cryopreservation of Primordial Germ Cells Collected from Drosophila Donor Embryos

Proceda a la criopreservación de las células germinales primordiales o PGC. Después de recolectar y depositar las PGC de los embriones donados en la superficie de un embrión. Lave la aguja de trasplante con un agente crioprotector o CPA y cargue CPA nuevo en la aguja.

Agregue el CPA cargado a las PGC depositadas en el embrión mientras se asegura de que el volumen de CPA sea equivalente al de las PGC. Elimine el exceso de CPA del grupo de PGC uno o dos segundos después de la adición de CPA. A continuación, vacíe la aguja y cárguela con aceite de silicona durante cinco segundos o más.

Cargue todos los PGC recolectados en la aguja, luego cargue aceite de silicona nuevamente durante cinco segundos o más. Asegúrese de que los PGC estén intercalados entre dos capas de aceite de silicona. Separe la aguja del micromanipulador con papel de seda suave, seque el aceite de la superficie de la aguja sin tocar la punta de la aguja con el pañuelo.

Fije la aguja a un portaagujas y, con cinta de vinilo, bloquéela en su posición en la base. Congele rápidamente el soporte con la aguja apuntando hacia abajo sumergiéndolo en nitrógeno líquido. No suelte el soporte hasta que el líquido deje de salir burbujeando de la rejilla.

Guarde el soporte en un tanque de almacenamiento de nitrógeno líquido en el área de la fase líquida.