Para comenzar, coloque los instrumentos quirúrgicos esterilizados en autoclave sobre la mesa quirúrgica. Afeitar el abdomen de la rata anestesiada y colocar la rata en posición supina sobre la tabla quirúrgica. Limpiar el abdomen con povidona yodada seguida de etanol al 70%.
Coloque ungüento oftálmico debajo de los ojos de la rata para prevenir la sequedad. Asegure la rata en su lugar en la tabla quirúrgica. Inicie el software de adquisición de datos y comience a grabar.
Encienda el ventilador a cuatro mililitros por kilogramo y asegúrese de que la presión positiva al final de la espiración sea de alrededor de dos centímetros de agua. Con unas tijeras, realice una laparotomía de la línea media desde la apófisis xifoides hasta la sínfisis púbica. Luego, con la ayuda de un instrumento contundente, realice una rotación visceral medial-lateral y visualice la vena cava inferior infrahepática.
Inyecte heparina en la vena cava inferior con una aguja de calibre 20. Con unas tijeras, corta la piel desde la muesca esternal hasta justo debajo del ángulo de la mandíbula y comienza a diseccionar hacia la tráquea. Luego, diseccione sin rodeos los músculos necesarios de la correa para exponer la tráquea.
Realice una incisión transversal en la tráquea anterior entre los anillos cartilaginosos, asegurándose de no cortar la porción posterior de la tráquea. Coloque una sutura de seda 5-0 alrededor de la tráquea. Inserte el tubo endotraqueal en los anillos cartilaginosos y asegúrelo con la sutura de seda 5-0.
Conecte el tubo endotraqueal al ventilador y asegúrese de que el tórax se eleve correctamente. Con unas tijeras, realice una esternotomía mediana y penetre en la cavidad torácica. Coloque retractores de la pared torácica para exponer el corazón y los pulmones, evitando cualquier manipulación inadvertida de los pulmones.
Con la combinación de disección aguda y roma, extirpe el timo del mediastino anterior. Identifique la arteria pulmonar y coloque una sutura de seda 5-0 alrededor de ella para prepararse para la canulación. Realice una incisión de dos a tres milímetros en el tracto de salida del ventrículo derecho con unas tijeras para colocar la cánula arterial dentro de la arteria pulmonar y asegurarla con la sutura 5-0.
Después de sacrificar a la rata, conecte rápidamente el líquido de preservación pulmonar desaireado a la cánula arterial para lavar los pulmones por gravedad. Conecte la cánula arterial al circuito EVLP. Encienda la bomba de rodillo y permita que una pequeña cantidad de perfusión fluya a través del pulmón y salga del ventrículo izquierdo hacia la cavidad torácica.
Una vez que la perfusión comience a fluir fuera de la aurícula izquierda, apague la bomba de rodillo. A continuación, coloque una pequeña pinza en el ventrículo izquierdo y estire suavemente el anillo de la válvula mitral. Coloque una corbata de seda 5-0 alrededor del corazón y átela sin apretar.
Inserte la cánula de la aurícula izquierda en el ventrículo izquierdo y avance la cánula hasta que se pueda ver dentro de la aurícula. Asegure la aurícula izquierda con la sutura 5-0 preatada. Identifique el esófago y sujételo con un hemostático lo más cerca posible del diafragma.
Luego, corte el esófago por debajo del hemostático. Usando la columna vertebral como guía, corte con unas tijeras todas las uniones ligamentosas que conectan el bloqueo corazón-pulmón con las estructuras circundantes. A continuación, diseccionar la tráquea desde el cuello y cortar la tráquea por encima del tubo endotraqueal para liberar el bloqueo corazón-pulmón.
Mueva el bloqueo corazón-pulmón a la cubierta torácica dentro del circuito EVLP y conecte la cánula de la aurícula izquierda al circuito. Encienda la bomba de rodillos y conecte el monitor del ventilador. Revise la trampa de burbujas para asegurarse de que no se introduzcan émbolos de aire en el sistema.
Cambie lentamente los ajustes de ventilación y perfusión a los niveles experimentales deseados durante los 15 minutos iniciales. Además, aumente el caudal de perfusión al caudal y la presión deseados. En los puntos de tiempo designados, verifique los niveles de gas de perfusión y las pruebas de función pulmonar.
Todas las perfusiones probadas mostraron una ligera disminución en la presión parcial de oxígeno de la aurícula izquierda, y la perfusión basada en glóbulos rojos disminuyó significativamente a la hora. Durante las siguientes horas, tanto el polihHB como las perfusiones de control mantuvieron estable la presión parcial de oxígeno en la aurícula izquierda. La presión parcial delta de oxígeno disminuyó significativamente a la hora en el grupo de perfusión de glóbulos rojos, mientras que se mantuvo estable en el grupo de perfusión de polihHB y control con una tendencia no significativa.
La presión parcial de dióxido de carbono en la aurícula izquierda fue significativamente menor en el hematíes y en la perfusión de control en comparación con el polihHB después de la primera hora, y esta tendencia continúa durante las horas siguientes. La presión parcial delta del dióxido de carbono aumentó significativamente en la perfusión de glóbulos rojos después de una hora y después de eso permaneció estable tanto en la perfusión de polihHB como en la de control. Los datos fisiológicos pulmonares en tiempo real demuestran que la perfusión de glóbulos rojos aumentó significativamente la resistencia vascular pulmonar en la primera hora.
Si bien tanto el polihHB como el control mantuvieron una resistencia vascular pulmonar baja y estable durante el período, el cambio en el peso pulmonar fue significativo en el perfusión inicial de glóbulos rojos, con un aumento continuo en todas las perfusiones, ligeramente más en el polihHB. La distensibilidad disminuyó significativamente en la perfusión de glóbulos rojos en la primera hora, mientras que disminuyó de manera no significativa en otras perfusiones. PolyhHB tuvo el cumplimiento más alto después de cuatro horas.
