Extracción de ADN de muestras de moscas necrófilas

Para comenzar, coloque las muestras de tórax de mosca recortadas en un tubo de centrífuga de dos mililitros. Agregue 180 microlitros de tampón de lisis de tejidos al tubo, seguido de 20 microlitros de proteinasa K.Vortex a fondo a 3.000 RPM durante 10 segundos e incube a 56 grados centígrados hasta que los tejidos se lisen. Después de la incubación, vuelva a agitar las muestras durante 15 segundos.

Agregue 200 microlitros de tampón de lisis y mezcle bien por vórtice. Luego agregue 200 microlitros de etanol y vuelva a vórtice durante 15 segundos. A continuación, coloque una columna de absorción de ADN en un tubo de recolección de dos mililitros y pipetee la mezcla en la columna.

Centrífuga a 6.000 g durante un minuto. Deseche el flujo a través y el tubo de recolección. Coloque la columna en un tubo nuevo y agregue 500 microlitros de tampón de eliminación de proteínas.

Centrifugar durante un minuto y desechar el flujo. Transfiera la columna a un tubo nuevo. Añadir 500 microlitros de tampón de desalinización y centrifugar a 20.000 g durante tres minutos para secar la membrana.

A continuación, añada 100 microlitros de tampón de elución de ADN sobre la membrana. Incubar a temperatura ambiente durante un minuto y luego centrifugar a 6.000 G durante un minuto para eluir el ADN. Guarde las muestras de ADN según corresponda.