Para comenzar, prepare el inóculo para estudiar la cinética de crecimiento de Chlorella sorokiniana y Haematococcus pluvialis Prepare el volumen requerido de medio de cultivo estéril de acuerdo con los procedimientos estándar de laboratorio. Configure la fuente de luz tanto para el fotobiorreactor como para el matraz con el espectro de color deseado. Cubra ambos sistemas para evitar interferencias de luz externa.
Después de ajustar la configuración del fotoperiodo, conecte el sistema de duración de dióxido de carbono al fotobiorreactor para proporcionar dióxido de carbono durante 12 horas a la chlorella. A continuación, inocule el recipiente de cultivo para lograr una densidad celular inicial de 300.000 células por mililitro o una densidad óptica de 0,180 a 550 nanómetros. Muestrear el cultivo a intervalos regulares de 12 horas para Chlorella sorokiniana y de ocho horas para Haematococcus pluvialis.
Coloque 40 mililitros de la muestra en un tubo de centrifugación cónico de plástico. Centrifugar el tubo a 3000 G durante 20 minutos a 15 grados centígrados. Decantar el sobrenadante y agregar tres mililitros de solución de acetona pura al 90% para resuspender las células, luego transfiera las células a un tubo de vidrio cubierto con papel de aluminio para evitar la oxidación y mezcle usando un vórtice.
Sonicar la muestra suspendida en un baño de hielo durante dos ciclos de cinco minutos cada uno, y dejar reposar la muestra a cuatro grados centígrados durante 16 horas. Después de reposar, vuelva a sonicar la muestra durante dos ciclos de cinco minutos cada uno en las mismas condiciones, y centrifugar la muestra a 3000 G durante 20 minutos a 15 grados centígrados. Separe el extracto de pigmento con una pipeta Pasteur y transfiéralo a otro tubo limpio y protegido de la luz.
Luego coloque el extracto de pigmento en una celda de cuarzo y léalo en un espectrofotómetro a 600, 647 y 664 nanómetros. Calcule las concentraciones de clorofila usando la ecuación. El contenido de clorofila de Chlorella sorokiniana fue mayor en el tratamiento cuatro, en condiciones de alta adición de dióxido de carbono, luz púrpura y alta intensidad de luz.
El gráfico de efectos principales mostró que la intensidad de la luz tuvo un efecto menor en comparación con los efectos de luz de dióxido de carbono y púrpura. En Chlorella sorokiniana, se observó un aumento constante de las clorofilas A y B a lo largo del experimento, con la clorofila A superando a la clorofila B a las 50 horas. Se observó una disminución en la concentración de clorofila en Haematococcus pluvialis a las 50 horas, con la clorofila B disminuyendo significativamente mientras que la clorofila A se mantuvo más alta.
