Este protocolo permite experimentos de microalgas replicadas con poca participación del usuario. Está diseñado para investigadores que buscan actualizar de matraces monitoreados manualmente a matraces de sobremesa sin comprar fotorreactores técnicos y costosos comerciales. Este fotobiorreactor permite la relación de luz y la flexibilidad, el monitoreo continuo del crecimiento y la replicación triplicada.
Para comenzar, abra el software de adquisición de datos. Rellene la página de configuración y asigne archivos de calibración a sus respectivos sensores. En el nombre del archivo de directorio, seleccione la carpeta de número de puerto del módulo de entrada digital correspondiente.
Haga clic en la carpeta actual y repita para todos los puertos. Luego haga clic en aceptar para pasar a la página de registro. A continuación, llene las botellas de vidrio al volumen deseado con el medio de cultivo y centrifugar el cultivo en tres tubos equilibrados de 50 mililitros para producir tres pellets.
Añadir un pellet a cada frasco utilizando una pipeta serológica y un medio fresco. Luego deje caer un agitador magnético de 25 por ocho milímetros en cada botella antes de sellar la abertura de la botella con un tapón de goma y una tapa de rosca de apertura roscada. Si se instalan puertos de muestreo opcionales, cierre las válvulas.
Después de ubicar el extremo de cada línea de gas dentro de la tubería de PVC, conecte una aguja al puerto de señuelo de correo de la válvula. Conecte cada botella a su sensor de gas perforando cada tapón de goma con la aguja correspondiente. Luego, inicie cada sensor de gas individualmente marcando la casilla de verificación en el lado izquierdo de la pantalla, haciendo clic en inicio e ingresando un nombre de archivo.
Haga clic en Aceptar y repita para todos los sensores. A continuación, encienda el fotobiorreactor y asegúrese de que el controlador de iluminación multiplex digital esté conectado a una fuente de alimentación. Con el botón del controlador multiplex digital, cambie entre la escena auxiliar y la escena de luz personalizada para asegurarse de que el dispositivo funciona correctamente.
Para el muestreo de botella, prepare 500 mililitros adicionales del medio fresco antes de comenzar el experimento. Para recoger la muestra, cierre la válvula de la línea de gas y conecte una jeringa de 10 mililitros a la válvula del puerto de muestreo. Después de conectar la jeringa, abra la válvula del puerto de muestreo y extraiga ocho mililitros de cultivo.
Luego cierre la válvula del puerto de muestreo y desconecte la jeringa. A continuación, conecte a la jeringa que contiene ocho mililitros de medio fresco a la válvula del puerto de muestreo. Luego abra la válvula e inyecte el medio fresco.
Finalmente, cierre la válvula del puerto de muestreo y desconecte la jeringa. Para exportar los datos, seleccione archivo y datos sin conexión. Después de seleccionar todos los archivos de registro relevantes, exporte los datos al software de hoja de cálculo y guárdelos.
Un experimento exitoso se caracteriza por un patrón diurno estrechamente replicado de producción de oxígeno. La tasa de flujo de oxígeno actúa como un proxy de la tasa de crecimiento de un cultivo. Durante las horas iluminadas, la producción de gas aumenta constantemente y durante las horas no iluminadas, la producción de gas se detiene.
El volumen total de oxígeno producido durante cuatro días varió de 316 mililitros en el tratamiento A a 902 mililitros en el tratamiento C.In el régimen de luz de 300 micro moles por metro cuadrado por segundo, la temperatura aumentó en un máximo de 1,4 grados centígrados durante el día. Las temperaturas de cultivo volvieron a la línea de base durante la noche. A pesar de diferir en sus concentraciones iniciales de biomasa, los tratamientos B y C generaron la misma cantidad de biomasa total causando cambios idénticos en el pH del medio.
Los datos de la tasa de flujo de oxígeno en línea revelaron que cada tratamiento tenía tasas de crecimiento diarias variables, lo que también se reflejó en las mediciones de pH dos veces al día. El primer día, la tasa de crecimiento del tratamiento B fue menor que la del tratamiento C.Mientras que para el tercer día, las tasas de crecimiento del tratamiento B superaron a las del tratamiento C.Los datos de la tasa de flujo de oxígeno indicaron que el mayor crecimiento ocurrió el tercer día en el tratamiento B.Se esperaba que las estimaciones de crecimiento basadas en el oxígeno total medido subestimaran ligeramente el crecimiento de la biomasa, lo que fue válido para cinco de los siete ejemplos. Dos ejemplos sobreestimaron el crecimiento.
Esto puede haber sido influenciado por experimentos que se determinaron al final de la noche. La respiración nocturna sustancial mejora el consumo de oxígeno, genera un vacío de espacio en la cabeza de la botella, aspirando el paquete con líquido de los sensores de gas. Si la respiración puede ser alta, abrimos el espacio de la cabeza durante la noche.
