Nos gustaría dar las gracias a Thomas Lecuit (sqh-line Utrofina :: GFP), la Bolsa de Centro de Bloomington y el hibridoma Estudios del Desarrollo del Banco para los reactivos. Agradecemos además a todos los miembros del Laboratorio Tootle útil para los debates y las críticas del manuscrito. La financiación de la National Science Foundation fondos iniciales de la anatomía y el Departamento de Biología Celular MCB-1158527, y de la Universidad de Iowa apoya este trabajo. Institutos Nacionales de la Salud Predoctorales de Formación Grant en Farmacológica Ciencias T32GM067795 apoyaron AJS. Soporte de almacenamiento de datos fue proporcionada por la ICTS, que se financia a través de la CTSA apoyado por el Centro Nacional para Recursos de Investigación y el Centro Nacional para el Avance de las Ciencias de traslación, Institutos Nacionales de Salud, a través de Grant UL1RR024979.

1. Preparación de Drosophila Antes de la etapa de aislamiento <ol><li> Hacer pasta de levadura húmeda combinando 50 g de levadura seca activa con 90 ml de agua destilada. Mezclar con una espátula para mezclar. Dejar reposar la mezcla durante aproximadamente 30 minutos antes de la evaluación de la consistencia. La consistencia debe ser sólo lo suficientemente gruesa como para adherirse a la parte de un vial mosca pero no correr por el lado. Para lograr la consistencia deseada puede ser necesario añadir un máximo de 10 ml de agua adicional o una pequeña cantidad de levadura seca. Almacene en un recipiente tapado a 4 ° C. La levadura almacenada se puede utilizar para ~ 1-2 semanas. </li><li> Reunir &lt;24 hr viejas moscas adultas (hombres y mujeres) de los genotipos deseados y los puso en un vial con comida fly plus pasta de levadura húmeda untado en el lado del vial. La temperatura a la que se mantienen las moscas variará dependiendo del experimento. Para los experimentos de rutina, las moscas se mantuvieron a temperatura ambiente. Considerando que experimentos en los que un gen seestá sobreexpresada usando el sistema de UAS/GAL4 15 de mayo requerir el mantenimiento de las moscas a 25 ° C o superior, según sea apropiado. </li><li> Proporcionar a las moscas con un frotis fresco de pasta de levadura al día durante 2 días. NOTA: A medida que el desarrollo del folículo está estrechamente regulada por el estado nutricional de la mosca hembra, es indispensable proporcionar a la mosca con la rica pasta de levadura de nutrientes durante al menos 36 horas antes de la disección. </li></ol> 2. Aislar a mediados y finales de Staged Drosophila folículos <ol><li> Permita que el medio para llegar a la temperatura ambiente (~ 30 min). Si los folículos por etapas van a ser utilizados para los ensayos in vitro de desarrollo en recién preparar medios IVEM (medios de Grace de insectos, 10% de suero bovino fetal inactivado por calor, y 1x penicilina / estreptomicina). Si los folículos por etapas van a ser utilizados para el ARNm o el aislamiento de proteínas usan ya sea de insectos de Grace o medios IVEM. IMPORTANTE: Temperatura del fluido es crítico. Si el medio es el frío que se alteratanto la actina y microtúbulos citoesqueletos y desarrollo del bloque. </li><li> Anestesie las moscas en el vial yeasted mediante la inyección de CO 2 gas y colocar 3-5 moscas hembra en una almohadilla de mosca bajo CO 2. IMPORTANTE: No deje más hembras que pueden ser diseccionado en un período de tiempo de 10 min en la plataforma de la mosca como la exposición prolongada a CO 2 pueden causar esterilidad y la muerte. </li><li> Llenar un pocillo de una placa de 9-punto con los medios de comunicación y colóquelo en la parte superior de una superficie oscura (un pedazo de plexiglás negro funciona bien). Enfoque el microscopio de disección en la parte inferior del pozo. </li><li> Uso # 5 pinzas Dumont recoger una sola hembra con una mano (esto se hace mejor con la mano dominante). A menudo es más fácil de recoger a la hembra por las alas, piernas o tórax a la transición abdomen. Sumerja la mujer en los medios de comunicación llenos también. Ajuste el enfoque del microscopio según sea necesario. </li><li> El uso de un segundo par de pinzas en la mano no dominante, agarra a la hembra en el extremo anterior del abdomende manera que el extremo posterior está posicionado hacia la mano dominante (Figura 2A). Asegúrese de mantener la marcha sumergido en los medios de comunicación. </li><li> Con la mano dominante, utilizar las pinzas para agarrar la cutícula en el segundo segmento pigmentada más posterior y rasgar lejos del resto del abdomen (Figuras 2B-C). </li><li> Usando las pinzas en la mano dominante, apriete suavemente el extremo anterior del abdomen hasta que los ovarios emergen (Figuras 2D-E). Si es necesario, coloque la pinza entre los dos ovarios y sacarlos de la canal. </li><li> Mueva los ovarios para que un nuevo pozo con medio fresco (Figura 2F) o retire el cadáver de una toalla Kimwipe o papel. Esto es particularmente importante si los folículos se están aislados para el desarrollo in vitro. </li><li> Repita hasta que se han aislado de 3-5 pares de ovarios. NOTA: Cada ovario se compone de ~ 16 ovarioles o cadenas de forma secuencial con vencimiento folículos. Cada ovarioleestá contenido dentro de una vaina del músculo. </li><li> El uso de prensas de patas y las agujas suministradas con ellos, tire suavemente aparte del ovario mediante la ejecución de las agujas entre los ovarioles (Figura 2 G). Esto a veces liberar los folículos individuales también. </li><li> Ovarioles individuales y las etapas morfológicas fácilmente distinguibles de desarrollo del folículo ahora debe ser visible (Figura 2G, se separan del ovario). Consulte las Figuras 1 y 2H de las diferencias morfológicas que se pueden utilizar para distinguir las diferentes etapas. Para aislar folículos que están dentro de ovariolas intactas y todavía contenidos dentro de una vaina del músculo, utilizar una aguja para cortar a través de la ovariole en la parte anterior del folículo anterior y en la posterior de la folículo inmediatamente después de la folículo de interés. Esto romperá la vaina del músculo y el folículo de interés lejos ahora se puede cortar lejos de los folículos vecinos sin dañarlo. </li&gt; <li> A medida que se separan las fases individuales, mover los folículos de interés, utilizando una pipeta de vidrio, a un nuevo pozo con medio fresco. Esto es particularmente importante cuando el aislamiento de folículos para el desarrollo in vitro. NOTA: Es importante para exprimir el bulbo de la pipeta antes de entrar en los medios de comunicación para evitar las burbujas de aire de la redistribución de los folículos de interés a lo largo del pozo. Además, si los folículos están pegando a la pipeta de vidrio, la pipeta puede reviste previamente con 3% de albúmina de suero bovino (BSA) pipeteando la solución de BSA arriba y abajo varias veces y enjuague con medios de disección. </li><li> Una vez que suficientes folículos se han aislado, continuar con los experimentos posteriores. </li></ol> 3. Desarrollo in vitro de folículos S10B <ol><li> Aislar folículos S10B usando el protocolo de aislamiento de fase (paso 2) en los medios de comunicación IVEM. Asegúrese de que los folículos se mueven rápidamente lejos de los escombros. A medida que estos folículos continuarán madurando, es importante que S10Bs se recogen durante 30-60 minutos y luego se coloca en los medios de comunicación de maduración de elección. NOTA: S10B deben distinguirse cuidadosamente de folículos S10A (Figura 1C comparación con 1B), como folículos S10A no madurarán en los medios de cultivo IVEM. En tanto S10A y S10B folículos, la mitad de la longitud se compone de células de la enfermera y la otra mitad es el ovocito, pero en S10B la longitud del folículo es igual a la de los folículos S14. </li><li> Usando una pipeta de vidrio, mover ~ 30 folículos S10B en un pocillo de una placa de cultivo tisular de 24 pocillos. NOTA: Asegúrese de verificar que todos los folículos que se transfieren son S10B y no han madurado hasta S11. </li><li> Preparar 1 l de media maduración por pozo, es decir, los medios de comunicación IVEM más reactivos farmacológicos. </li><li> Usando una pipeta de vidrio tirado *, eliminar la mayor cantidad de medios desde el pozo (paso 3.2) como sea posible, y rápidamente agregar medios maduración de elección. NOTA: Es imprescindible el uso de un pip vidrio tiradoette como folículos por etapas puede ser fácilmente absorbido tanto con pipetas de vidrio o puntas de pipeta con una Pipetman. * Para hacer pipetas tirados: 1) calentar la parte delgada de largo, pipetas de vidrio en la llama de un mechero Bunsen sólo hasta que el cristal comienza a ablandarse, 2) pasar de inmediato la pipeta de la llama y tire horizontalmente para dibujar la pipeta en un tubo fino, 3) romper para generar un punto fino. PRECAUCIÓN: Use protección para los ojos como fragmentos de vidrio pueden volar. </li><li> Repita los pasos 3.1 a 3.4 para tantos pozos como el experimento requiere. </li><li> Permitir a los folículos a desarrollar durante&gt; 10 h, y la puntuación de la progresión en el desarrollo bajo un microscopio de disección. NOTA: Los experimentos suelen ser marcados al día siguiente para dar tiempo suficiente para que los folículos se desarrollen. S10B es de ~ 5 horas, S11 es de ~ 30 min, S12 es de ~ 2 h, y S13 es de ~ 1 hora de duración a 25 ° C 1 y desarrollo a temperatura ambiente tardará un poco más. Experimentos similares al descrito para los folículos pueden ser S10Brealizado utilizando folículos S11-S13. </li></ol> 4. Etapa Aislamientos para imágenes en vivo <ol><li> Aislar los folículos en fase tardía (S10B-14) que expresa el marcador fluorescente de elección mediante el protocolo de aislamiento etapa (etapa 2) en los medios de comunicación IVEM, moviéndose rápidamente folículos lejos de los escombros. </li><li> Mueva los folículos de interés en nuevos medios de comunicación y luego transferir mediante una pipeta de vidrio a una placa de Petri de fondo cubreobjetos. Tenga cuidado al añadir los medios para que las burbujas en la zona del fondo cubreobjetos pero no se derrame sobre. </li><li> Para películas a intervalos más largos, a veces es necesario para mantener la humedad dentro de la placa de Petri mediante la adición de un enrollado Kimwipe, humedecido con agua, hasta el borde interior de la placa de Petri. Coloque la tapa en la parte superior. </li><li> Imagen de un microscopio invertido. Resolución detallada requerirá la microscopía confocal. Es necesario para equilibrar la frecuencia de formación de imágenes, la fuerza de la iluminación, y la longitud de proyección de imagen; este tendrá que ser trabajado de forma independiente para cada Lherramienta Abeling y el proceso de desarrollo. </li></ol> 5. Etapa de aislamiento para la Preparación de ARNm <ol><li> Aislar folículos individuales de cada etapa usando el protocolo de aislamiento de fase (paso 2) con cualquiera de los medios de Grace o IVEM. </li><li> Usando una pipeta de vidrio, mover las etapas individuales de interés en nuevos pozos con medios de comunicación, sino que es posible recoger múltiples etapas a la vez. </li><li> Mantenga horarios de recogida en el punto 1 hr. Mover los folículos, usando una pipeta de vidrio, a 1,5 ml de tubos de microfuga. </li><li> Haga girar el tubo brevemente en un mini-microcentrífuga para sedimentar todos los folículos. Usando una pipeta de vidrio tirado (véase el paso 3.4) retire con cuidado todos los medios de comunicación. NOTA: Si utiliza una microcentrífuga a tamaño completo, centrifugar los folículos a baja velocidad. </li><li> Añadir 100 l de Trizol y moler a mano durante ~ 20 s utilizando un mortero plástico. Haga girar hacia abajo a toda velocidad en una microcentrífuga y mover Trizol a un nuevo tubo de microcentrífuga de 1,5 ml con cuidado de no tocar ninguna d peletizadoebris. Almacenar a -80 ° C. </li><li> Repita los pasos 5.1 a 5.5 hasta que haya suficientes folículos se han obtenido para el experimento. Rutinariamente, ~ 75 S10B, ~ 75 S12, y S14 ~ 100 ~ folículos dió 10 g de ARN. </li><li> Descongele las muestras en hielo. Combine las muestras, según el caso, en un tubo de microcentrífuga y llevar el volumen Trizol hasta 800 l. Proceda con el aislamiento de ARN como lo indique el fabricante. IMPORTANTE: Recuerde que debe tratar la DNasa ARN aislado con RNasa libre de DNasa. </li></ol> 6. Etapa de aislamiento para el Western Blot <ol><li> Precaliente un bloque de calor a 100 ° C. </li><li> Aislar folículos individuales de cada etapa usando el protocolo de aislamiento de fase (paso 2) con cualquiera de los medios de Grace o IVEM. NOTA: Es necesario determinar empíricamente la cantidad de un folículo etapa particular se necesitan para observar cada proteína específica. Para las proteínas altamente expresadas 1-3 folículos / pocillo S10B es suficiente para ver una señal fuerte en un western blot. Sin embargo, es importante hacer unamuestra representativa, teniendo folículos de varias hembras. De este modo, 15-20 folículos de una etapa particular se recogen por lo general. </li><li> Mueva folículos, usando una pipeta de vidrio, a un tubo de microcentrífuga de 1,5 ml. Haga girar brevemente en un mini-microcentrífuga para sedimentar los folículos (véase el paso 5.4). Retire con cuidado todos los medios de comunicación utilizando una pipeta de vidrio tirado (véase el paso 3.4) y añadir 50 l de PBS 1x y 50 l de tampón Laemmli 2x. </li><li> Triturar con la mano durante aproximadamente 20 segundos con una mano de mortero de plástico. NOTA: las majas de plástico pueden ser reutilizados para la molienda de muestras occidentales por el lavado y la esterilización en autoclave ellos. </li><li> Hervir las muestras durante 10 min en el bloque de calor. </li><li> Chill brevemente en hielo y centrifugar a toda velocidad durante 15 segundos en una microcentrífuga. Cualquiera de cargar inmediatamente en un gel de SDS-PAGE o almacenar a -20 ° C. NOTA: Si se almacenan las muestras, recuerde que debe recalentar las muestras antes de la carga en el gel. </li><li> Realizar análisis de Western blot siguiendo protocolos estándar. </li></ol>

<ol>
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No hay nada que revelar.

El folículo Drosophila se compone de sólo un pequeño número de tipos de células, por lo que es ideal para el estudio morfológico y análisis moleculares. Además, debido a la estructura del ovario, es relativamente fácil de obtener un gran número de etapas específicas de desarrollo del folículo con un microscopio de disección común y una formación mínima. A medida que cada etapa representa una ventana temporal corto, aislamiento etapa puede proporcionar conocimientos moleculares importantes en los...

Cada ovario de Drosophila se compone de ~ 16 ovarioles, o cadenas de forma secuencial con vencimiento cámaras de huevos o folículos. Cada folículo se compone de un único ovocito, 15 de la línea germinal derivadas células de la enfermera o de apoyo, y ~ 650 células somáticas denominadas células del folículo (Figura 1A). Drosophila ovogénesis se divide en 14 etapas morfológicamente definidas de desarrollo 1. Cada etapa de desarrollo del folículo se observa muchas veces dentro de una sola marcha, por lo que es relativamente fácil de aislar un número sustancial de los folículos etapa específica. Los mediados y finales de etapas de ovogénesis (Etapas 10B-14) son especialmente adecuados para el aislamiento de fase (Figura 1). En la Etapa 10B (S10B), el folículo está totalmente alargada (es decir, su longitud es igual a la de una etapa 14 (S14) folículo, véase la figura 1 y la figura 2H) y media la longitud del folículo se compone de células de la enfermeramientras que la otra mitad es el ovocito (Figura 1C). En esta etapa las células de la enfermera se someten a la remodelación de actina dramática, el fortalecimiento de la actina cortical y la generación de haces paralelos de filamentos de actina 2. Al mismo tiempo, una población de células del folículo, denominada células centrípetas, migrar entre las células de la enfermera y el ovocito, y dos grupos dorsales de las células del folículo se convierta especificado para someterse a la migración para formar los apéndices dorsales, aparatos respiratorios tubulares para el embrión 3 . Las células de la enfermera después de contrato (S11), apretando sus contenidos citoplasmáticos en el ovocito en un proceso llamado célula nodriza dumping, que proporciona el ovocito con los factores necesarios para que se complete la embriogénesis (Figura 1D). Las células de la enfermera a continuación, se someten a la muerte celular (S12-S13) 4, y las células del folículo secretan y el patrón de la cáscara de huevo 5 (Figuras 1E-G). Por lo tanto, el final de la ovogénesis es rica con un importante desarrollod procesos morfogenéticos. Folículos aislados entre mediados y finales de etapa (S10B-S14) se puede utilizar para una variedad de propósitos, incluyendo los análisis moleculares. Por ejemplo, ARNm a partir de folículos por etapas puede ser aislado por RT-PCR, microarrays, o los análisis de ARN-ss. Esto le permite a uno a ver la expresión de genes dentro de una ventana de desarrollo a corto, con sólo unos pocos tipos de células presentes, y determinar cómo la expresión génica se cambia por perturbaciones ya sea farmacológicos o genéticos. Aislamiento etapa también se puede utilizar para analizar las proteínas por Western Blot. Este análisis es importante porque permite cuantificar el nivel de expresión de la proteína de tipo salvaje frente a los mutantes en etapas específicas. Si bien se podría utilizar de inmunofluorescencia analiza para lograr resultados similares, la cuantificación de la fluorescencia es menos robusto debido a los requisitos estrictos que todos los píxeles dentro de la gama lineal de detección 6. Además, el análisis de transferencia Western puede proporcionar otra información, tals si la proteína se posttranslationally modificado o se expresa a partir de una isoforma de empalme específico. Etapas aisladas también se pueden usar para una mayor purificación de proteínas, incluyendo fraccionamiento subcelular o coimmunoprecipitation. Aislamiento folículo Etapa específica también puede ser utilizado para los ensayos in vitro en desarrollo 7 y en vivo de imágenes 8. Aislados folículos S10B-S13 continuarán desarrollando a S14 en medios de cultivo sencillo (ver abajo). Es importante tener en cuenta que los folículos S10A no progresar a través de célula nodriza de dumping utilizando las condiciones de cultivo se analizan en este manuscrito. Hemos utilizado en los ensayos in vitro de desarrollo S10B para definir el papel de las prostaglandinas, tanto farmacológica y genética, en la regulación de la remodelación de la actina utilizando células enfermera dumping y el desarrollo como leer-outs 7,9. Del mismo modo, las etapas posteriores del desarrollo también se pueden aislar para determinar los efectos de los tratamientos farmacológicos o hombre genéticaipulations sobre determinados procesos como la migración centrípeta celular, la migración apéndice dorsal / formación 10, y la muerte celular enfermera. Tales ensayos pueden ser utilizados para realizar pantallas de interacción dominantes o ensayos, por ejemplo, mientras que la heterocigosidad para mutaciones en PXT o Fascin solos no tienen efecto sobre S10B desarrollo in vitro, los folículos de los heterocigotos dobles célula nodriza de exposiciones de dumping defectos y un bloqueo en el desarrollo 9. Además, debido a S10B-13 puede desarrollarse en la cultura, todos los procesos que tienen lugar durante este tiempo se puede observar por las imágenes en vivo. Esta imagen se puede realizar simplemente usando luz transmitida (si uno está interesado sólo en los cambios en la morfología bruto) o con microscopía confocal utilizando moscas transgénicas que expresan las sondas o los folículos teñidas con tintes de imágenes en directo fluorescentes. Formación de imágenes en vivo se utiliza para avanzar sustancialmente nuestra comprensión de los procesos de desarrollo. De hecho, vivir imaging de los folículos en fase tardía se ha ampliado el conocimiento de la migración apéndice dorsal, un ejemplo de tubulogenesis 10. Esperamos que las imágenes en directo de los procesos finales de etapa adicionales, incluyendo la dinámica de actina durante célula nodriza de dumping, proporcionará nuevos conocimientos sobre estos eventos de desarrollo. Es importante señalar que si bien S10A y las primeras etapas de desarrollo de los folículos no continuarán desarrollando en un S14 en la cultura, en vivo de imágenes de los acontecimientos que ocurren durante esas etapas de desarrollo es posible utilizando condiciones de cultivo alternativos 11-14 (véase la discusión para más información). Aquí nos proporcionan protocolos detallados para aislar folículos en fase tardía, ya sea para el desarrollo in vitro y vivimos de imágenes, o los análisis moleculares (ARNm y de aislamiento de proteínas).

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1098">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:253px;">Active Dry Yeast</td>
			<td style="width:195px;">Genesee Scientific</td>
			<td style="width:227px;">62-103</td>
			<td style="width:424px;">Any source of Active Dry Yeast is fine</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Grace&#8217;s Insect Media</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>04-457F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Heat Inactivated Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Atlanta Biologicals</td>
			<td>S11050H</td>
			<td>Any Heat Inactivated FBS should work</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">10x Pen/Strep</td>
			<td>Gibco/Invitrogen</td>
			<td>15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Pin Vises and Needles</td>
			<td>Ted Pella, Inc.</td>
			<td>13561-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Spot Plate, Nine Well</td>
			<td>Corning</td>
			<td>7220-85</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">#5 Dumont forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11252-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">24 multi-well plates</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>35 3226</td>
			<td>Any 24-well tissue culture dish should work</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Coverslip Bottom Dishes (35mm)</td>
			<td>MatTek Corporation</td>
			<td>P35G-1.0-14-C</td>
			<td>Coverslip thickness will depend on the microscope/objective being used</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Glass pipettes</td>
			<td>Corning</td>
			<td colspan="2">7095B-5x (for transferring follicles)</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Glass pipettes - long</td>
			<td>Corning</td>
			<td colspan="2">7095B-9 (for producing pulled pipettes)</td>
		</tr>
		<tr height="18">
			<td height="18" style="height:19px;">Sample pestle (1.5 &#956;l; RNase/DNase free)</td>
			<td>Research Products International</td>
			<td>199228</td>
			<td>Any plastic pestle that fits 1.5 &#956;l microfuge tubes can be used</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Trizol</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15596-018</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the utility of stage-specific mid-to-late drosophila follicle isolation

Ovogénesis Drosophila o el desarrollo del folículo ha sido ampliamente utilizado para avanzar en la comprensión de los complejos procesos biológicos celulares y de desarrollo. En este trabajo se describen los métodos de cómo aislar folículos etapa a mediados y finales de la etapa (10B-14) y utilizarlos para proporcionar nuevos conocimientos sobre los fenómenos moleculares y morfológicos que ocurren durante las ventanas cerradas de tiempo de desarrollo. Folículos aislados se pueden utilizar para una variedad de técnicas experimentales, incluyendo los ensayos in vitro en desarrollo, de formación de imágenes en vivo, análisis de la expresión de ARNm y análisis de transferencia Western de proteínas. Los folículos en Etapa 10B (S10B) o posterior completarán el desarrollo de la cultura, lo que permite combinar perturbaciones genéticas o farmacológicas con el desarrollo in vitro para definir los efectos de esas manipulaciones en los procesos que ocurren en períodos específicos del desarrollo. Además, debido a que estos folículos se desarrollan en la cultura, que son ideales para los estudios de imágenes en directo, Que a menudo revelan nuevos mecanismos que median los eventos morfológicos. Folículos aislados también se pueden utilizar para los análisis moleculares. Por ejemplo, los cambios en la expresión génica que resultan de perturbaciones genéticas se pueden definir para ventanas de desarrollo específicas. Además, el nivel de proteína, la estabilidad, y / o estado de modificación postraduccional durante una etapa particular del desarrollo del folículo pueden ser examinados a través de análisis de Western blot. Por lo tanto, el aislamiento de la etapa específica de los folículos de Drosophila proporciona una rica fuente de información en muy conservadas procesos de desarrollo y la morfogénesis.

Cuando el aislamiento de etapas específicas de desarrollo del folículo de Drosophila que es esencial para ser capaz de distinguir con precisión las diferentes etapas morfológicas. Esto es algo difícil para S10A y S10B, como las células de la enfermera y el ovocito cada uno ocupan la mitad de la longitud del folículo en estas etapas (Figura 1B comparó a 1C). Sin embargo, los folículos S10A son más cortos en longitud que los folículos S10B, como los folículos S10B est...

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The Utility of Stage-specific Mid-to-late Drosophila Follicle Isolation

-Fase específica aislamiento de mediados y finales de los folículos de Drosophila es útil para una variedad de propósitos. Estos folículos se desarrollan en la cultura, lo que permite la manipulación genética y / o farmacológicos a acoplar con los ensayos in vitro de desarrollo en y de imagen en vivo. Además, los folículos se pueden utilizar para los estudios moleculares, tales como el aislamiento de ARNm y proteína.

La utilidad de la etapa específica-Mediados o finales<em&gt; Drosophila</em&gt; Aislamiento folículo

Drosophila oogenesis or follicle development has been widely used to advance the understanding of complex developmental and cell biologic processes. This ...

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Research

JoVE Journal

Biology

The Utility of Stage-specific Mid-to-late Drosophila Follicle Isolation

11.2K vistas.  University of Iowa Carver College of Medicine.  -Fase específica aislamiento de mediados y finales de los folículos de Drosophila es útil para una variedad de propósitos. Estos folículos se desarrollan en la cultura, lo que permite la manipulación genética y / o farmacológicos a acoplar con los ensayos in vitro de desarrollo en y de imagen en vivo. Además, los folículos se pueden utilizar para los estudios moleculares, tales como el aislamiento de ARNm y proteína. 