Apoyado en parte por subvención NIH (R43/44CA122444) y subvención DOD BRCP (W81XWH-06-1-0682) para YL.

1. Muestra, Equipo y Preparación de los reactivos <ol><li> Cortar muestra de tejido en bloques de 3-4 mm de espesor, fijar en el 10% formalina tamponada neutra fresco para 16-32 horas a temperatura ambiente (25 ° C) e incrustar en parafina. Cortar FFPE en secciones de 5 ± 1 m de espesor de FFPE bloques, montar secciones sobre portaobjetos y secar al aire. Nota: Las diapositivas se pueden almacenar a temperatura ambiente en la desecación durante un máximo de 3 meses. Los portaobjetos de tejidos montados deben ser horneados en un lugar seco sobre a 60 ° C durante 1 hora antes del ensayo RNAscope. </li><li> Traiga horno de hibridación a 40 ° C. Coloque un papel de humidificación en la bandeja del control de la humedad. Añadir 50 ml de dH2O al Libro de humidificación para mojar completamente. Inserte la bandeja cubierto en el horno para precalentar durante al menos 30 minutos antes de su uso. </li><li> Hacer 700 ml 1x Pretreat 2 Solución (10 nl, pH 6 tampón citrato) diluyendo 10 veces la solución de pretratamiento en dH 2 O. Calentar el 1x Pretreat 2 Solución a hervir y maintain la temperatura entre 100-104 ° C, mientras que la prevención de sobre-ebullición. </li><li> Hacer 3 L 1x tampón de lavado (0,1 x SSC) diluyendo precalentado 50x tampón de lavado en dH 2 O. </li><li> Prepare 2 x 200 ml de xileno y 2 x 200 ml de EtOH al 100% para desparafinización bajo una campana de humos. </li><li> Preparar 50% de solución de tinción de hematoxilina-reactivo azulado (0,01% de agua amoníaco) para el post-tinción bajo una campana de humos. </li><li> Preparar 200 ml de xileno, 200 ml de 70%, y 2 x 200 ml de EtOH al 100% para la deshidratación bajo una campana de humos. </li><li> Sondas Precaliente objetivo a 40 ° C durante 10 min y traen Detección RTU reactivo kit a temperatura ambiente, incluida la RTU Amp1, Amp2, Amp3, AMP4, Amp 5-Brown, y Amp6-Brown, excepto DAB cromógeno Brown-A y Brown-B . </li></ol> 2. RNAscope Ensayo Desparafinización y Deshidratación Después de la cocción, Desparafinar secciones de tejido en xileno durante 2 x 5 minutos con agitación frecuente y deshidrataren EtOH al 100% para 2 x 3 min con agitación frecuente. Secar al aire durante 5 min y dibujar una barrera hidrófoba alrededor de la sección de tejido con una barrera hidrófoba de la pluma. Pretratamientos <ol><li> Incubar las secciones de tejido con 1 Trate previamente durante 10 min a TA durante la extinción de la actividad de la peroxidasa endógena, enjuague en dH2O </li><li> Incubar las secciones de tejido con Pretrate 2 mantiene a una temperatura de ebullición durante 15 min para la recuperación de ARN, enjuague dos veces en dH 2 O. </li><li> Incubar las secciones de tejido con 3 Trate previamente durante 30 min a 40 ° C durante la digestión de proteínas en el horno HybEZ, enjuague dos veces en dH 2 O. </li></ol> Destino de la sonda de hibridación Sondas diana de VPH-HR 7 de la piscina se incluyen: HPV 16, 18, 31, 33, 35, 52, y 58. Añadir sondas de VPH, la ubiquitina C (UBC) y bacterianas sondas dapB gen por separado en tres secciones de tejido adyacente. Hibridar a 40 º C en el horno durante 2hr, luego enjuague en tampón de lavado 1X para 2 x 2 minutos a temperatura ambiente. Amplificación de Señal <ol><li> Incubar las secciones de tejido con Amp1 (preamplificador) durante 30 min a 40 ° C, Amp2 (fondo reductor) durante 15 min a 40 ° C, Amp3 (amplificador) durante 30 min a 40 ° C, y AMP4 (sonda marcadora) durante 15 min a 40 ° C en horno HybEZ. Después de cada etapa de hibridación, enjuague en tampón de lavado 1X para 2 x 2 minutos a temperatura ambiente. </li><li> Incubar las secciones de tejido con AMP5 durante 30 min y Amp6 durante 15 min a TA. Después de cada paso de incubación, lavar en tampón de lavado 1X para 2 x 2 minutos a temperatura ambiente. </li></ol> Detección de la señal Incubar las secciones de tejido con 01:01 DAB mezcla mediante la mezcla de un volumen igual de Brown-A y de Brown-B durante 10 min a TA, enjuague dos veces en dH 2 O. Contratinción <pclass = &quot;jove_content&quot;&gt; cortes de tejido se tiñen con hematoxilina solución al 50% durante 2 minutos a temperatura ambiente, enjuagar con dH 2 O hasta que las diapositivas son claras, mientras que los tejidos se mantienen de color púrpura. Dip desliza en 0,01% de amoníaco en dH 2 O para 5x y siguió con 5 inmersiones en dH 2 O. Montaje de diapositivas Deshidratar secciones de tejido en 70%, 100%, y 100% de EtOH durante 2 min cada uno, xileno durante 5 min, montar con los medios de montaje a base de xileno.

<ol>
	<li>Parkin, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+global+health+burden+of+infection-associated+cancers+in+the+year+2002.">The global health burden of infection-associated cancers in the year 2002.</a> Int. J. Cancer. 118 (12), 3030-3044 (2006).</li><li>Chaturvedi, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+papillomavirus+and+rising+oropharyngeal+cancer+incidence+in+the+United+States.">Human papillomavirus and rising oropharyngeal cancer incidence in the United States.</a> J. Clin. Oncol. 29 (32), 4294-4301 (2011).</li><li>Ang, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+papillomavirus+and+survival+of+patients+with+oropharyngeal+cancer.">Human papillomavirus and survival of patients with oropharyngeal cancer.</a> N. Engl. J. Med. 363 (1), 24-35 (2010).</li><li>Smeets, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+algorithm+for+reliable+detection+of+human+papillomavirus+in+paraffin+embedded+head+and+neck+cancer+specimen.">A novel algorithm for reliable detection of human papillomavirus in paraffin embedded head and neck cancer specimen.</a> Int. J. Cancer. 121 (11), 2465-2472 (2007).</li><li>Wang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNAscope:+a+novel+in+situ+RNA+analysis+platform+for+formalin-fixed,+paraffin-embedded+tissues.">RNAscope: a novel in situ RNA analysis platform for formalin-fixed, paraffin-embedded tissues.</a> J. Mol. Diagn. 14 (1), 22-29 (2012).</li><li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specific+regulation+of+NRG1+isoform+expression+by+neuronal+activity.">Specific regulation of NRG1 isoform expression by neuronal activity.</a> J. Neurosci. 31 (23), 8491-8501 (2011).</li><li>Yan, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+intestinal+stem+cell+markers+Bmi1+and+Lgr5+identify+two+functionally+distinct+populations.">The intestinal stem cell markers Bmi1 and Lgr5 identify two functionally distinct populations.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 109 (2), 466-471 (2012).</li><li>Payne, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Viable+circulating+tumour+cell+detection+using+multiplex+RNA+in+situ+hybridisation+predicts+progression-free+survival+in+metastatic+breast+cancer+patients.">Viable circulating tumour cell detection using multiplex RNA in situ hybridisation predicts progression-free survival in metastatic breast cancer patients.</a> Br. J. Cancer. 106 (11), 1790-1797 (2012).</li><li>Bordeaux, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+in+situ+measurement+of+estrogen+receptor+mRNA+predicts+response+to+tamoxifen.">Quantitative in situ measurement of estrogen receptor mRNA predicts response to tamoxifen.</a> PLoS One. 7 (5), (2012).</li><li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+quantitative+RNA+in+situ+hybridization+for+resolution+of+equivocal+and+heterogeneous+ERBB2+(HER2)+status+in+invasive+breast+carcinoma.">Automated quantitative RNA in situ hybridization for resolution of equivocal and heterogeneous ERBB2 (HER2) status in invasive breast carcinoma.</a> J. Mol. Diagn. 15 (2), 210-219 (2013).</li><li>Tubbs, R. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasensitive+RNA+in+situ+Hybridization+for+Detection+of+Restricted+Clonal+Expression+of+Low+Abundance+Immunoglobulin+Light+Chain+mRNA+in+B-Cell+Lymphoproliferative+Disorders.">Ultrasensitive RNA in situ Hybridization for Detection of Restricted Clonal Expression of Low Abundance Immunoglobulin Light Chain mRNA in B-Cell Lymphoproliferative Disorders.</a> Am. J. Surg. Pathol. In press, (2013).</li><li>Ukpo, O. C., Flanagan, J. J., Ma, X. J., Luo, Y., Thorstad, W. L., Lewis, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-risk+human+papillomavirus+E6/E7+mRNA+detection+by+a+novel+in+situ+hybridization+assay+strongly+correlates+with+p16+expression+and+patient+outcomes+in+oropharyngeal+squamous+cell+carcinoma.">High-risk human papillomavirus E6/E7 mRNA detection by a novel in situ hybridization assay strongly correlates with p16 expression and patient outcomes in oropharyngeal squamous cell carcinoma.</a> Am. J. Surg. Pathol. 35 (9), 1343-1350 (2011).</li><li>Lewis, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptionally-active+high-risk+human+papillomavirus+is+rare+in+oral+cavity+and+laryngeal/hypopharyngeal+squamous+cell+carcinomas--a+tissue+microarray+study+utilizing+E6/E7+mRNA+in+situ+hybridization.">Transcriptionally-active high-risk human papillomavirus is rare in oral cavity and laryngeal/hypopharyngeal squamous cell carcinomas--a tissue microarray study utilizing E6/E7 mRNA in situ hybridization.</a> Histopathology. 60 (6), 982-991 (2012).</li><li>Lewis, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Partial+p16+staining+in+oropharyngeal+squamous+cell+carcinoma:+extent+and+pattern+correlate+with+human+papillomavirus+RNA+status.">Partial p16 staining in oropharyngeal squamous cell carcinoma: extent and pattern correlate with human papillomavirus RNA status.</a> Mod. Pathol. 25 (9), 1212-1220 (2012).</li><li>Bishop, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+transcriptionally+active+high-risk+HPV+in+patients+with+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma+as+visualized+by+a+novel+E6/E7+mRNA+in+situ+hybridization+method.">Detection of transcriptionally active high-risk HPV in patients with head and neck squamous cell carcinoma as visualized by a novel E6/E7 mRNA in situ hybridization method.</a> Am. J. Surg. Pathol. 36 (12), 1874-1882 (2012).</li><li>Schache AG, ., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+a+novel+diagnostic+standard+in+HPV-positive+oropharyngeal+squamous+cell+carcinoma.">Validation of a novel diagnostic standard in HPV-positive oropharyngeal squamous cell carcinoma.</a> Br. J. Cancer. 108 (6), 1332-1339 (2013).</li><li>Mehrad, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Papillary+Squamous+Cell+Carcinoma+of+the+Head+and+Neck:+Clinicopathologic+and+Molecular+Features+With+Special+Reference+to+Human+Papillomavirus.">Papillary Squamous Cell Carcinoma of the Head and Neck: Clinicopathologic and Molecular Features With Special Reference to Human Papillomavirus.</a> Am. J. Surg. Pathol. Jun. , (2013).</li><li>Jordan, R. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+methods+for+oropharyngeal+cancer+HPV+status+determination+in+US+cooperative+group+trials.">Validation of methods for oropharyngeal cancer HPV status determination in US cooperative group trials.</a> Am. J. Surg. Pathol. 36, 945-954 (2012).</li><li>Hammond, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=American+Society+of+Clinical+Oncology/College+of+American+Pathologists+guideline+recommendations+for+immunohistochemical+testing+of+estrogen+and+progesterone+receptors+in+breast+cancer+(unabridged+version).">American Society of Clinical Oncology/College of American Pathologists guideline recommendations for immunohistochemical testing of estrogen and progesterone receptors in breast cancer (unabridged version).</a> Arch. Pathol. Lab. Med. 134 (7), 48-72 (2010).</li></ol>

Todos los autores son empleados de acciones propias y en los diagnósticos avanzados celulares, Inc.

El ensayo RNAscope HPV permite la visualización directa de E6/E7 mRNA in situ en la cabeza asociado al VPH y cuello, carcinoma de células escamosas. El ensayo RNAscope es totalmente compatible con el tejido tumoral fijo rutinariamente y conserva la morfología del tejido para las correlaciones histopatológicas (Figura 2). Una ventaja clave del ensayo RNAscope sobre los métodos convencionales de CISH es que amplifica específicamente las señales de hibridación (Figuras 2B y 2E) sin amplificar el ruido de fondo (figuras 2C y 2F). En la práctica, el procedimiento de ensayo RNAscope VPH se puede completar en 8 horas o convenientemente dividido en dos días. El ensayo RNAscope VPH se ha utilizado para determinar el estado de VPH en la cabeza y el cuello carcinoma de células escamosas de 12-16, lo que demuestra el 97% de sensibilidad y 93% de especificidad mediante QRT-PCR como método de referencia 16. Chr ConvencionalISH omogenic para HR-HPV ADN es altamente específica, pero tiene una sensibilidad del 80% ~ 12. Inmunohistoquímica (IHC) para la tinción celular p16 marcador sustituto demuestra una excelente sensibilidad, pero puede generar falsos positivos 15,18, especialmente en cabeza y cuello nonoropharyngeal 15. El método actual &quot;estándar de oro&quot; de QRT-PCR para VPH E6/E7 mRNA detección requiere tejido fresco congelado para obtener resultados óptimos y es técnicamente compleja, lo que limita su uso para el laboratorio de investigación solamente. Además, se requiere la extracción de RNA que hace imposible correlacionar HR-HPV E6/E7 expresión de ARNm con la histopatología. Existen varios factores críticos para el éxito del ensayo RNAscope. En primer lugar, para obtener mejores resultados, los tejidos deben ser fijadas en 10% formalina tamponada neutra fresco a temperatura ambiente durante 16 a 32 horas según las directrices de la ASCO / CAP 19. En segundo lugar, el horno HybEZ es muy recomendable, ya que permites control óptimo de la temperatura y la humedad para la hibridación de la sonda y etapas de amplificación de señal. En tercer lugar, es importante eliminar el exceso de tampones residuales antes de cada paso, pero aún así mantener la sección de tejido de secado durante cualquiera de estos pasos. El procedimiento RNAscope manual descrito aquí ha sido totalmente automatizada en un portaobjetos de sistema de auto-tinción comercial 10. Esto debería facilitar en gran medida la normalización de las condiciones de ensayo y ahorro en su valioso trabajo manual en los laboratorios de patología clínica. Además, el software de análisis de imágenes dedicada ha sido desarrollado 10 para identificar automáticamente las células y señales de tinción en una diapositiva digitalizada, lo que debería ayudar a eliminar la subjetividad y mejorar la reproducibilidad en la puntuación. En resumen, el ensayo RNAscope VPH detecta la presencia de transcritos de HR-HPV E6/E7 mRNA in situ en tejidos FFPE. Tiene un flujo de trabajo que es familiar para laboratorios de patología clínicarios al permitir la visualización directa de éstos en secciones de tejido. Ofrece una plataforma ideal para el examen (FFPE) muestras de tejido, y puede ser fácilmente adoptada por los laboratorios de diagnóstico de patología.

La infección por virus del papiloma humano de alto riesgo (VPH-AR) representa aproximadamente el 5% de todos los cánceres en todo el mundo 1. La incidencia de cáncer de orofaringe asociados al VPH ha aumentado durante las últimas décadas, especialmente entre los hombres. Orofaríngea carcinoma de células escamosas del VPH-positivo (OPSCC) probablemente constituirá una mayoría de todos los cánceres de cabeza y cuello en los Estados Unidos en los próximos 20 años 2. Los carcinomas de células escamosas de la orofaringe causadas por el VPH se asocian con una supervivencia favorable, y el estado de VPH del tumor es un factor pronóstico independiente y fuerte para la supervivencia 3. Evidencia para la activación transcripcional de los oncogenes virales E6 y E7 se considera como el estándar de oro para la presencia de VPH clínicamente relevante 4. Sin embargo, la detección de ARNm de E6/E7 de tejido tumoral fresco por la técnica de RT-PCR no es práctico en la práctica clínica de rutina y se ha limitado a los laboratorios de investigación. Recientemente, have desarrollado una nueva tecnología llamada ARN ISH RNAscope, que permite la detección múltiple en células individuales con una sola molécula de ARN sensibilidad en formalina parafina fijo muestras de tejido embebidos (FFPE) 5-10. Hemos proporcionado tres líneas de evidencia para la molécula de detección único 5. En primer lugar, el diseño y la señal del sistema de la sonda de amplificación RNAscope permitió la detección de copia única HER2 objetivos de ADN genómico en células HeLa y SK-BR-3 líneas celulares. En segundo lugar, cuando se compara con las señales de ADN genómico HER2, la distribución de las intensidades fluorescentes de puntos de señal de HER2 de mRNA en células HeLa fue consistente con una molécula por punto. En tercer lugar, el número de puntos de señal de ARNm de HER2 por célula coincide estrechamente el número de copias de ARNm de HER2 estimado mediante un ensayo de cuantificación basado en solución, más el apoyo detección de moléculas individuales. Además, counterstaining de núcleos con DAPI en microscopía fluorescente o con hematoxilina en microscopía de campo claro permite la visualización de los núcleos individuales, quICH a su vez permite la detección y cuantificación de dianas de ARN en una base de una sola célula 10. La capacidad de analizar la expresión génica in situ en muestras clínicas de rutina hace RNAscope una plataforma prometedora para la patología de diagnóstico, especialmente aquellos a base de sección-ensayos de tejidos FFPE 10,11. Hemos desarrollado un ensayo basado VPH-RNAscope para detectar ARNm de E6/E7 de siete genotipos de VPH de alto riesgo (HPV16, 18, 31, 33, 35, 52, y 58) utilizando un grupo de sondas específicas del genotipo. Nuestros estudios recientes en OPSCC han demostrado que el ensayo RNAscope VPH es altamente sensible y específica para determinar la condición del VPH en los tejidos FFPE 12-17, y también informa el pronóstico en OPSCC 12,16. El principio de la tecnología RNAscope se ha descrito previamente 5. Aquí se describe el protocolo de ensayo RNAscope completa y demostrar su uso en la detección de VPH-AR en FFPE secciones de tejidos tumorales.

&#160;
<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="580">
	<colgroup>
		<col span="4" />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="39">
			<td height="60" rowspan="2" style="height:60px;width:145px;">SuperFrost Plus slides</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">Fisher Scientific</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">12-550-15</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:145px;">HybEZ Oven, Tray, and Rack</td>
			<td style="width:145px;">Advanced Cell Diagnostics</td>
			<td style="width:145px;">310011, 310012, 310014</td>
			<td style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:145px;">RNAscope 2.0 FFPE Reagent Kit - Brown</td>
			<td style="width:145px;">Advanced Cell Diagnostics</td>
			<td style="width:145px;">310035</td>
			<td style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="81">
			<td height="81" style="height:81px;width:145px;">RNAscope HPV-HR7 Probe for HPV 16,18,31,33,35,52 and 58, E6/E7 mRNA</td>
			<td style="width:145px;">Advanced Cell Diagnostics</td>
			<td style="width:145px;">312351</td>
			<td style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:145px;">ImmEdge Hydrophobic Barrier Pen</td>
			<td style="width:145px;">Vector Laboratory</td>
			<td style="width:145px;">H-4000</td>
			<td style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="59">
			<td height="80" rowspan="2" style="height:80px;width:145px;">100% EtOH</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">American Master Tech Scientific</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">ALREAGAL</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="41" rowspan="2" style="height:41px;width:145px;">Xylene&#160;</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">Fisher Scientific</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">X3P-1GAL</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
		</tr>
		<tr height="59">
			<td height="80" rowspan="2" style="height:80px;width:145px;">Gill&#8217;s Hematoxylin I</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">American Master Tech Scientific</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">HXGHE1LT</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
		</tr>
		<tr height="59">
			<td height="80" rowspan="2" style="height:80px;width:145px;">Ammonia hydroxide</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">320145-500mL</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
		</tr>
		<tr height="59">
			<td height="80" rowspan="2" style="height:80px;width:145px;">Cover Glass 24x50 mm</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">Fisher Scientific</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">12-545-F</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="41" rowspan="2" style="height:41px;width:145px;">Hot Plate</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">Fisher Scientific</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">11-300-49SHP</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
		</tr>
		<tr height="99">
			<td height="120" rowspan="2" style="height:120px;width:145px;">Drying Oven</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;"></td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;"></td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">Capable of holding temperature at 60 &#177; 1&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
		</tr>
		<tr height="99">
			<td height="120" rowspan="2" style="height:120px;width:145px;">Water Bath</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;"></td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;"></td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">Capable of holding temperature at 40 &#177; 1&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
		</tr>
	</tbody>
</table>

rnascope for in situ detection of transcriptionally active human papillomavirus in head and neck squamous cell carcinoma

El &quot;patrón oro&quot; para la detección del VPH oncogénico es la demostración de transcripcionalmente activo VPH de alto riesgo en el tejido tumoral. Sin embargo, la detección de E6/E7 mRNA de la polimerasa con transcripción inversa reacción en cadena cuantitativa (QRT-PCR) requiere la extracción de RNA que destruye el tejido tumoral contexto crítico para la correlación morfológica y ha sido difícil de adoptar en la práctica clínica habitual. Nuestro ARN desarrollado recientemente en la tecnología de hibridación in situ, RNAscope, permite la visualización directa de ARN en, (FFPE) tejido incluido en parafina fijado en formol con una sola molécula sensibilidad y la resolución de una sola célula, que permite alta sensibilidad y especificidad en el análisis in situ de cualquier biomarcador de ARN en muestras clínicas de rutina. El ensayo RNAscope VPH fue diseñado para detectar el ARNm E6/E7 de siete genotipos de VPH de alto riesgo (VPH 16, 18, 31, 33, 35, 52 y 58), utilizando un pool de sondas específicas del genotipo. Se ha demostrado una excelente sensibilidady especificidad contra el método actual &quot;estándar de oro&quot; de la detección de E6/E7 mRNA por QRT-PCR. Estado de VPH determinado por RNAscope es fuertemente pronóstico de resultado clínico en pacientes con cáncer de la orofaringe.

RNAscope VPH flujo de trabajo de ensayo El ensayo RNAscope tiene un flujo de trabajo altamente optimizada que es similar a la IHC (Figura 1). Se compone de cuatro pasos principales: pretratamientos, hibridación, amplificaciones de señal y detección. Emplea una estrategia de diseño de la sonda única que garantiza la amplificación de la señal de alta fidelidad 5. En el ensayo de RNAscope VPH, los siete conjuntos de sonda HR-HPV se agruparon, todo reconocido por el mismo sistema de amplificación de la señal ligada a peroxidasa de rábano picante (HRP). Las señales específicas de hibridación se detectan en forma de precipitados marrones formados por reacción catalizada con HRP cromogénico utilizando DAB como sustrato, que puede ser visualizado fácilmente por microscopía de campo brillante estándar. Tinción Representante para la detección del VPH La figura 2 muestra imágenes de ejemplo de las secciones FFPE manchadas de cabeza y cuello, carcinoma de células escamosas. En el caso del VPH-positivo (Fig.2A URE), las sondas de HR-HPV detectan señales puntiformes fuertes específicamente en las células tumorales. La sonda de la UBC detecta numerosas señales citoplasmáticas puntiformes en ambas células tumorales y las células del estroma (Figura 2B). La sonda dapB gen bacteriano demostró un fondo limpio (Figura 2 C). En el caso del VPH negativa, tanto la sonda de HR-HPV y la sonda dapB detectan señales (Figuras 2D y 2F), mientras que las señales fuertes se detectaron utilizando la sonda UBC (Figura 2E). En este ensayo, la UBC sirve como control positivo para evaluar la calidad del ARN de tejidos y dapB como control negativo para las señales de fondo. La puntuación para la determinación de la condición de VPH implica el examen de los tres toboganes para cada caso. El nivel de tinción en el portaobjetos de control negativo (dapB) deslizante se utiliza como punto de corte: positividad del VPH se define por la presencia de citoplasmática puntiforme y / o tinción nuclear que estaba por encima de la señal en la diapositiva dabpB. <pclass = &quot;jove_content&quot; fo: keep-together.within-page = &quot;always&quot;&gt; <img alt="Figura 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51426/51426fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51426/51426fig1.jpg" /> Figura 1. Diagrama de flujo del ensayo RNAscope. Ilustración de RNAscope flujo de trabajo del ensayo. El ensayo RNAscope contiene 4 pasos principales, tratamientos previos, la hibridación sonda blanco, la amplificación de la señal y detección de señal. El procedimiento de ensayo se puede completar en 8 horas. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51426/51426fig1highres.jpg" target="_blank">Haz clic aquí para ver la imagen más grande.</a> <img alt="Figura 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51426/51426fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51426/51426fig2.jpg" /> Figura 2. Imágenes de ejemplo de portaobjetos teñidos-RNAscope. FFPE secciones teñidas con sondas para HR-HPV, UBC (control positivo) y dapB (control negativo)a partir de dos casos CECC. AC. Caso del VPH-positivo. A, HR-HPV E6/E7 mRNA expresión en las células tumorales. Inserción, 40x para mostrar señales puntiformes. B y C) las secciones de tejido adyacentes muestran una tinción positiva UBC (B) y negativo para dapB (C), respectivamente. DF) case-VPH negativo. D) ninguna tinción para HPV E6/E7 mRNA , similar a la del control negativo dapB (F). E) UBC tinción positiva. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51426/51426fig2highres.jpg" target="_blank">Haz clic aquí para ver la imagen más grande.</a>

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RNAscope for In situ Detection of Transcriptionally Active Human Papillomavirus in Head and Neck Squamous Cell Carcinoma

La presencia de VPH de alto riesgo en el tejido del tumor de cabeza y cuello se asocia con resultados favorables. El ARN recientemente desarrollada en la técnica de hibridación in situ llamado RNAscope permite la visualización directa de HPV E6/E7 mRNA en secciones de tejido FFPE.

RNAscope para<em&gt; In situ</em&gt; Detección de transcripcionalmente activo Virus del Papiloma Humano en cabeza y cuello Carcinoma de células escamosas

The &#39;gold standard&#39; for oncogenic HPV detection is the demonstration of transcriptionally active high-risk HPV in tumor tissue. However, detection ...

rnascope-for-situ-detection-transcriptionally-active-human

Research

JoVE Journal

Medicine

RNAscope for In situ Detection of Transcriptionally Active Human Papillomavirus in Head and Neck Squamous Cell Carcinoma

27.0K vistas.  Advanced Cell Diagnostics, Inc..  La presencia de VPH de alto riesgo en el tejido del tumor de cabeza y cuello se asocia con resultados favorables. El ARN recientemente desarrollada en la técnica de hibridación in situ llamado RNAscope permite la visualización directa de HPV E6/E7 mRNA en secciones de tejido FFPE. 

Video: RNAscope for In situ Detection of Transcriptionally Active Human Papillomavirus in Head and Neck Squamous Cell Carcinoma

Multi-photon Imaging of Tumor Cell Invasion in an Orthotopic Mouse Model of Oral Squamous Cell Carcinoma

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient management strategies. Orthotopic mouse models of oral cancer have been developed to facilitate the study of factors that impact invasion and serve as model system for evaluating anti-tumor therapeutics. In these systems, visualization of disseminated tumor cells within oral cavity tissues has typically been conducted by either conventional histology or with in vivo bioluminescent methods. A primary drawback of these techniques is the inherent inability to accurately visualize and quantify early tumor cell invasion arising from the primary site in three dimensions. Here we describe a protocol that combines an established model for squamous cell carcinoma of the tongue (SCOT) with two-photon imaging to allow multi-vectorial visualization of lingual tumor spread. The OSC-19 head and neck tumor cell line was stably engineered to express the F-actin binding peptide LifeAct fused to the mCherry fluorescent protein (LifeAct-mCherry). Fox1nu/nu mice injected with these cells reliably form tumors that allow the tongue to be visualized by ex-vivo application of two-photon microscopy. This technique allows for the orthotopic visualization of the tumor mass and locally invading cells in excised tongues without disruption of the regional tumor microenvironment. In addition, this system allows for the quantification of tumor cell invasion by calculating distances that invaded cells move from the primary tumor site. Overall this procedure provides an enhanced model system for analyzing factors that contribute to SCOT invasion and therapeutic treatments tailored to prevent local invasion and distant metastatic spread. This method also has the potential to be ultimately combined with other imaging modalities in an in vivo setting.

A comprehensive overview of the techniques involved in generating a mouse model of oral cancer and quantitative monitoring of tumor invasion within the tongue through multi-photon microscopy of labeled cells is presented. This system can serve as a useful platform for the molecular assessment and drug efficacy of anti-invasive compounds.

Multi-fotón imágenes de invasión de células tumorales en un modelo de ratón ortotópico de carcinoma oral de células escamosas

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient ...

Investigación

Medicina

Primary Culture of Human Vestibular Schwannomas

Vestibular schwannomas (VSs) represent Schwann cell (SC) tumors of the vestibular nerve, compromising 10% of all intracranial neoplasms. VSs occur in either sporadic or familial (neurofibromatosis type 2, NF2) forms, both associated with inactivating defects in the NF2 tumor suppressor gene. Treatment for VSs is generally surgical resection or radiosurgery, however the morbidity of such procedures has driven investigations into less invasive treatments. Historically, lack of access to fresh tissue specimens and the fact that schwannoma cells are not immortalized have significantly hampered the use of primary cultures for investigation of schwannoma tumorigenesis. To overcome the limited supply of primary cultures, the immortalized HEI193 VS cell line was generated by transduction with HPV E6 and E7 oncogenes. This oncogenic transduction introduced significant molecular and phenotypic alterations to the cells, which limit their use as a model for human schwannoma tumors. We therefore illustrate a simplified, reproducible protocol for culture of primary human VS cells. This easily mastered technique allows for molecular and cellular investigations that more accurately recapitulate the complexity of VS disease.

Vestibular Schwannomas (VSs) are non-malignant tumors of Schwann cell (SC) origin, associated with mutations in the NF2 tumor suppressor gene. We report a reproducible, efficient protocol for primary human VS cell culture that allows for molecular and cellular experimental manipulation and analysis and recapitulates the heterogeneous nature of human disease.

Cultivo primario de Human vestibular schwannomas

Vestibular schwannomas (VSs) represent Schwann cell (SC) tumors of the vestibular nerve, compromising 10% of all intracranial neoplasms. VSs occur in ...

The In Ovo Chick Chorioallantoic Membrane (CAM) Assay as an Efficient Xenograft Model of Hepatocellular Carcinoma

The chick chorioallantoic membrane (CAM) begins to develop by day 7 after fertilization and matures by day 12. The CAM is naturally immunodeficient and highly vascularized, making it an ideal system for tumor implantation. Furthermore, the CAM contains extracellular matrix proteins such as fibronectin, laminin, collagen, integrin alpha(v)beta3, and MMP-2, making it an attractive model to study tumor invasion and metastasis. Scientists have long taken advantage of the physiology of the CAM by using it as a model of angiogenesis. More recently, the CAM assay has been modified to work as an in vivo xenograft model system for various cancers that bridges the gap between basic in vitro work and more complex animal cancer models. The CAM assay allows for the study of tumor growth, anti-tumor therapies, and pro-tumor molecular pathways in a biologically relevant system that is both cost- and time-effective. Here, we describe the development of CAM xenograft model of hepatocellular carcinoma (HCC) with embryonic survival rates of up to 93% and reliable tumor take leading to growth of three-dimensional, vascularized tumors.

The In Ovo Chick Chorioallantoic Membrane CAM Assay as an Efficient Xenograft Model of Hepatocellular Carcinoma

The chick chorioallantoic membrane (CAM) is immunodeficient and highly vascularized, making it a natural in vivo model of tumor growth and angiogenesis. In this protocol, we describe a reliable method of growing three-dimensional, vascularized hepatocellular carcinoma (HCC) tumors using the CAM assay.

los<em&gt; En Ovo</em&gt; Chick corioalantoidea de membrana (CAM) Ensayo como un modelo de xenoinjerto eficiente de carcinoma hepatocelular

The chick chorioallantoic membrane (CAM) begins to develop by day 7 after fertilization and matures by day 12. The CAM is naturally immunodeficient and ...

Isolation and Characterization of a Head and Neck Squamous Cell Carcinoma Subpopulation Having Stem Cell Characteristics

Despite advances in the understanding of head and neck squamous cell carcinomas (HNSCC) progression, the five-year survival rate remains low due to local recurrence and distant metastasis. One hypothesis to explain this recurrence is the presence of cancer stem-like cells (CSCs) that present inherent chemo- and radio-resistance. In order to develop new therapeutic strategies, it is necessary to have experimental models that validate the effectiveness of targeted treatments and therefore to have reliable methods for the identification and isolation of CSCs. To this end, we present a protocol for the isolation of CSCs from human HNSCC cell lines that relies on the combination of two successive cell sortings performed by fluorescence activated cell sorting (FACS). The first one is based on the property of CSCs to overexpress ATP-Binding Cassette (ABC) transporter proteins and thus exclude, among others, vital DNA dyes such as Hoechst 33342. The cells sorted with this method are identified as a &#34;side population&#34; (SP). As the SP cells represent a low percentage (&#60;5%) of parental cells, a growing phase is necessary in order to increase their number before the second cell sorting. The next step allows for the selection of cells that possess two other HNSCC stem cell characteristics i.e. high expression level of the cell surface marker CD44 (CD44high) and the over-expression of aldehyde dehydrogenase (ALDHhigh). Since the use of a single marker has numerous limitations and pitfalls for the isolation of CSCs, the combination of SP, CD44 and ALDH markers will provide a useful tool to isolate CSCs for further analytical and functional assays requiring viable cells. The stem-like characteristics of CSCs was finally validated in vitro by the formation of tumorispheres and the expression of &#946;-catenin.

Understanding the role of cancer stem-like cells in tumor recurrence and resistance to therapies has become a topic of great interest in the last decade. This article describes the isolation and characterization of the sub-population of cancer stem-like cells from head and neck squamous carcinoma cell lines (HNSCC).

Aislamiento y caracterización de un cabeza y cuello Carcinoma de células escamosas subpoblaciones Tener madre Características de las células

Despite advances in the understanding of head and neck squamous cell carcinomas (HNSCC) progression, the five-year survival rate remains low due to local ...

Posterior Semicircular Canal Approach for Inner Ear Gene Delivery in Neonatal Mouse

Inner ear gene therapy offers great promise as a potential treatment for hearing loss and dizziness. One of the critical determinants of the success of inner ear gene therapy is to find a delivery method which results in consistent transduction efficiency of targeted cell types while minimizing hearing loss. In this study, we describe the posterior semicircular canal approach as a viable method for inner ear gene delivery in neonatal mice. We show that gene delivery through the posterior semicircular canal is able to perfuse the entire inner ear. The easy anatomic identification of the posterior semicircular canal, as well as minimal manipulation of the temporal bone required, make this surgical approach an attractive option for inner ear gene delivery.

In this study, we describe the posterior semicircular canal approach as a reliable method for inner ear gene delivery in neonatal mice. We show that gene delivery through the posterior semicircular canal is able to perfuse the entire inner ear.

Enfoque del Canal Semicircular posterior para la entrega del Gene de oído interno en ratón Neonatal

Inner ear gene therapy offers great promise as a potential treatment for hearing loss and dizziness. One of the critical determinants of the success of ...

In Vivo Morphometric Analysis of Human Cranial Nerves Using Magnetic Resonance Imaging in Meni&#232;re's Disease Ears and Normal Hearing Ears

Analysis of neural structures in Meni&#232;re's Disease (MD) is of importance, since a loss of such structures has previously been proposed for this patient group but has yet to be confirmed. This protocol describes a method of in vivo evaluation of neural changes especially well suitable for cranial nerve analysis using magnetic resonance imaging (MRI). MD-patients and normal hearing persons were examined in a 3-T MR-scanner using a scan protocol including strongly T2-weighted 3D gradient-echo-sequence (3D-CISS). In the patient group, MD was additionally confirmed using MRI-based assessment of endolymphatic hydrops. Morphometric analysis was performed using a freeware DICOM viewer. Evaluation of cranial nerves included measurements of cross-sectional areas (CSAs) of the nerves at different levels as well as orthogonal diametric measurements.

&lt;em&gt;In Vivo&lt;/em&gt; Morphometric Analysis of Human Cranial Nerves Using Magnetic Resonance Imaging in Meni&amp;#232;re&#039;s Disease Ears and Normal Hearing Ears

To evaluate morphological changes of cranial nerves such as loss of neural structures or swelling of cranial nerves in Meni&#232;re&#39;s Disease (MD) or in healthy persons in vivo, a protocol of evaluation has been developed using magnetic resonance imaging (MRI). Additional MRI-based confirmation of MD was performed.

En Vivo Análisis morfométrico de los nervios craneales de humanos usando resonancia magnética en la enfermedad orejas y oídos de la audiencia Normal de Menière

Analysis of neural structures in Meni&#232;re's Disease (MD) is of importance, since a loss of such structures has previously been proposed for this ...

Porcine As a Training Module for Head and Neck Microvascular Reconstruction

Live models that resemble surgical conditions of humans are needed for training free-flap harvesting and anastomosis. Animal models for training purposes have been available for years in many surgical fields. We used the female (because they are easy to handle for the procedure) Yorkshire pigs for the head and neck reconstruction by harvesting the deep inferior epigastric artery perforator or the superior epigastric artery perforator flap. The anastomosis site (neck skin defect or tracheal wall defect) was prepared via the dissection of the common carotid artery and the internal jugular vein, in which 3.5&#215; loupe magnification was used for anastomosis as we use on human cases in real life. This procedure demonstrates a new training method using a reliable learning model and provides a detailed anatomy in a live scenario. We focused on the ischemia time, harvesting, vessel anastomosis, and designing the flap to fit the defect site. This model improves tissue handling and with the use of proper instruments can be repeated many times so that the surgeon is fully confident before starting the surgery on humans.

Here we present a protocol for the use of the pig superior epigastric artery perforator flap as a learning module for head and neck microvascular reconstruction.

Porcina como un módulo de capacitación para la reconstrucción Microvascular de cabeza y cuello

Live models that resemble surgical conditions of humans are needed for training free-flap harvesting and anastomosis. Animal models for training purposes ...

The Chick Chorioallantoic Membrane In Vivo Model to Assess Perineural Invasion in Head and Neck Cancer

Perineural invasion is a phenotype in which cancer surrounds or invades the nerves. It is associated with poor clinical outcome for head and neck squamous cell carcinoma and other cancers. Mechanistic studies have shown that the molecular crosstalk between nerves and tumor cells occurs prior to physical interaction. There are only a few in vivo models to study perineural invasion, especially to investigate early progression, before physical nerve-tumor interactions occur. The chick chorioallantoic membrane model has been used to study cancer invasion, because the basement membrane of the chorionic epithelium mimics that of human epithelial tissue. Here we repurposed the chick chorioallantoic membrane model to investigate perineural invasion, grafting rat dorsal root ganglia and human head and neck squamous cell carcinoma cells onto the chorionic epithelium. We have demonstrated how this model can be useful to evaluate the ability of cancer cells to invade neural tissue in vivo.&#160;

The Chick Chorioallantoic Membrane In Vivo Model to Assess Perineural Invasion in Head and Neck Cancer

Perineural invasion is an aggressive phenotype for head and neck squamous cell carcinomas and other tumors. The chick chorioallantoic membrane model has been used for studying angiogenesis, cancer invasion, and metastasis. Here we demonstrate how this model can be utilized to assess perineural invasion in vivo.

El modelo Chick Chorioalantoic Membrane In Vivo para evaluar la invasión perineural en el cáncer de cabeza y cuello

Perineural invasion is a phenotype in which cancer surrounds or invades the nerves. It is associated with poor clinical outcome for head and neck squamous ...

Learning Modern Laryngeal Surgery in a Dissection Laboratory

Surgery for laryngeal malignancies requires millimetric accuracy from the different endoscopic and open techniques available. Practice of this surgery is almost completely reserved to a few referral centers that deal with a large proportion of this pathology. Practice on human specimens is not always possible for ethical, economic, or availability reasons. The aim of this study is to provide a reproducible method for the organization of a laryngeal laboratory on ex vivo animal models where it is possible to approach, learn, and refine laryngeal techniques. Porcine and ovine larynges are ideal, affordable, models to simulate laryngeal surgery given their similarity to the human larynx in their anatomical layout and tissue composition. Herein, the surgical steps of transoral laser surgery, open partial horizontal laryngectomy, and total laryngectomy are reported. The merging of endoscopic and exoscopic views guarantees an inside-out perspective, which is vital for the comprehension of the complex laryngeal anatomy. The method was successfully adopted during three sessions of a dissection course &#34;Lary-Gym&#34;. Further perspectives on robotic surgical training are described.

The purpose of this paper is to illustrate how to organize a reproducible laboratory for laryngeal surgery on affordable and closely similar animal laryngeal models in order to improve anatomical and surgical knowledge and skills.

Aprendizaje de cirugía laríngea moderna en un laboratorio de disección

Surgery for laryngeal malignancies requires millimetric accuracy from the different endoscopic and open techniques available. Practice of this surgery is ...

Preparation of Decellularized Kidney Scaffolds in Rats

Tissue engineering is a cutting-edge discipline in biomedicine. Cell culture techniques can be applied for regeneration of functional tissues and organs to replace diseased or damaged organs. Scaffolds are needed to facilitate the generation of three-dimensional organs or tissues using differentiated stem cells in vivo. In this report, we describe a novel method for developing vascularized scaffolds using decellularized rat kidneys. Eight-week-old Sprague-Dawley rats were used in this study, and heparin was injected into the heart to facilitate flow into the renal vessels, allowing heparin to perfuse into the renal vessels. The abdominal cavity was opened, and the left kidney was collected. The collected kidneys were perfused for 9 h using detergents, such as Triton X-100 and sodium dodecyl sulfate, to decellularize the tissue. Decellularized kidney scaffolds were then gently washed with 1% penicillin/streptomycin and heparin to remove cellular debris and chemical residues. Transplantation of stem cells with the decellularized vascular scaffolds is expected to facilitate the generation of new organs. Thus, the vascularized scaffolds may provide a foundation for tissue engineering of organ grafts in the future.

This protocol introduces a method to develop a scaffold using decellularized rat kidneys. The protocol includes decellularization and recellularization processes to confirm bioavailability. Decellularization is performed using Triton X-100 and sodium dodecyl sulfate.

Preparación De Andamios Renales Descelularizados En Ratas

Tissue engineering is a cutting-edge discipline in biomedicine. Cell culture techniques can be applied for regeneration of functional tissues and organs ...