CRM is a Damon Runyon-Genentech Clinical Investigator. This work was supported, in part, by grants to CRM from the Damon Runyon Cancer Research Foundation (CI-45-09), Department of Defense (W81XWH-09-2-0042), and University of North Carolina University Cancer Research Fund (UCRF). The authors wish to thank Daniel Roth for mouse husbandry assistance. The authors also wish to thank Hannah Chae, Carter McCormick, Demi Canoutas, Stephanie Gillette, and Susannah Krom for tissue culture and immunofluorescence assistance.

The authors have nothing to disclose.

Los pasos más importantes para garantizar la cosecha y cultivo de astrocitos corticales son 1) adecuado para extirpar la corteza sin tomar tejido debajo del cuerpo calloso, 2) para eliminar las meninges, 3) para disociar completamente las células, y 4) para enriquecer para GFAP + astrocitos. Aunque hemos utilizado mecánica (agitación) y genéticas (restricción de la recombinación genética con un vector de Ad5GFAPCre o la utilización de un transgén transformadora dominante (TgGZT 121)</...

Los astrocitomas son el tumor cerebral primario más común y glioblastoma (GBM), un astrocitoma de grado IV, es el subtipo más común y agresiva con una supervivencia media de 12 a 15 meses 1,2. La invasión de los astrocitomas difusos, en particular GBM, se opone a la resección quirúrgica completa, limita la eficacia de las terapias adyuvantes, y conduce inevitablemente a la recurrencia después del tratamiento 3. Los pacientes inicialmente presentes ya sea de novo (primaria) GBM o con astrocitomas de grado bajo que progresa inevitablemente a GBM (secundaria) 4. GBM es genómicamente heterogénea y que se caracteriza por mutaciones mutuamente excluyentes y concurrentes en los genes que gobiernan tres principales vías de señalización: el punto de control del ciclo celular G1 / S (Rb), receptor de la tirosina quinasa (RTK), y TP53 vías 5-7. GBM consiste en cuatro subtipos genómicos con distintos perfiles de expresión que se asemejan a los diferentes tipos de células del cerebro, lo que sugiere que el subtipo de GBM es influmentado por su 6,8,9 célula de origen. Se requieren mejores modelos de astrocitoma para definir el papel de las combinaciones específicas de mutaciones en tipos particulares de células durante la patogénesis astrocitoma. Aprovechando estos modelos para el desarrollo preclínico más eficiente de drogas en última instancia, ayudará a mejorar los resultados del paciente. Modelos actuales incluyen astrocitoma establecieron líneas celulares humanas, paciente derivado xenoinjertos (PDX), astrocitos humanos normales modificados genéticamente y las células madre neurales (NSC), y ratones modificados genéticamente (GEM) 10-14. Hemos desarrollado un modelo alternativo, GEM no germinal (nGEM) 15 utilizando células cerebrales primarios - astrocitos corticales y NSC - cosechadas de GEM que alberga varias combinaciones de alelos oncogénicos floxed. El objetivo era generar modelos de astrocitoma con células genéticamente definidos que podrían ser caracterizadas fenotípicamente tanto in vitro como in vivo y potencialmente utilizados para el desarrollo de fármacos preclínica en iratones mmune-competentes. Líneas celulares humanas establecidas son el modelo más comúnmente usado de la patogénesis astrocitoma y la respuesta al fármaco in vitro e in vivo. Son técnicamente sencillo, ampliamente disponibles, y han definido cinética y la tumorigenicidad sobre xenoinjertos ortotópico en ratones inmunodeficientes 10,11,16-18 . Sus desventajas incluyen la incapacidad para generar líneas celulares establecidas a partir de los astrocitomas de bajo grado, limitando estudio sólo a los astrocitomas de alto grado; falta de una celda definida de origen; la presencia de anormalidades genómicas complejas, a menudo con perfiles genómicos que difieren notablemente de la muestra original paciente; y la susceptibilidad a fenotípica y genotípica de deriva durante el cultivo en serie en el suero 11,17,19-22. Las consecuencias fenotípicas de las mutaciones oncogénicas individuales en líneas celulares de GBM humanos establecidos pueden ser enmascarados por la multitud de anomalías que están realmente presentes, que a menudo impide elucconso- de consecuencias directas genotipo-fenotipo. PDX se generan a través del paso subcutánea de células de astrocitoma aislados de pacientes en ratones inmunodeficientes o por medio de su cultura como esferoides no adherentes en, medio definido libre de suero antes de la inyección ortotópico en el cerebro de ratones inmunodeficientes 12,23. PDX mantener con más precisión el paisaje genómico de astrocitomas humanos, pero similar a líneas celulares humanas establecidas, el efecto fenotípico de mutaciones oncogénicas individuales se puede enmascarar debido a su complejidad genómica 19,24. Para definir las consecuencias fenotípicas de las mutaciones oncogénicas específicas, particularmente en respuesta a las nuevas terapias, los paneles de líneas celulares humanas establecidas o PDX se utilizan con frecuencia para establecer correlaciones genotipo-fenotipo, mostrar generalización, y reducir al mínimo la probabilidad de efectos específicos de la línea de células. Mientras PDX recapitular con precisión las características histopatológicas de astrocitomas humanos, incLuding invasión, xenoinjertos ortotópico de líneas celulares humanas establecidas generalmente no 21,23,25. Además, los astrocitos humanos normales y NSC-han sido modificadas genéticamente con mutaciones oncogénicas definidos para modelar la tumorigénesis astrocitoma in vitro e in vivo 13,14,26. Estas células carecen de la complejidad genómica de líneas celulares humanas establecidas y PDX y recapitulan precisión histopatología astrocitoma humano, pero requieren xenoinjerto en roedores inmunodeficientes in vivo. Debido a que todos los modelos celulares humanas requieren huéspedes roedores inmunodeficientes para prevenir el rechazo de xenoinjerto inmune mediada, estos modelos fallan para recapitular las interacciones nativas tumor-estroma de un sistema singénico y carecen de un sistema inmunológico intacto, lo que limita la investigación preclínica de estroma-dirigida y inmune moduladora terapias 10,11. GEM permiso de examen de las consecuencias fenotípicas de combinaciones predeterminadas de muta oncogénicociones in vivo durante situ en la tumorigénesis. Considerando que el GEM no condicional tienen mutaciones en todos los tejidos de todo el desarrollo, GEM condicional han floxed alelos oncogénicos que permiten la orientación de las mutaciones mediante la restricción de la recombinación mediada por Cre a determinados tipos de células a través del uso de tipos específicos de promotores celulares 10,11,15,18. GEM astrocitoma condicional se han utilizado para elucidar el papel funcional de mutaciones oncogénicas en distintos tipos de células dentro de un cerebro intacto 11. La utilidad preclínica de gliomagénesis en situ usando GEM condicional está limitada por un número de factores que incluyen 1) la falta de una correlación in vitro, 2) la dificultad en la generación de grandes cohortes de ratones con genotipos complejos, 3) de largo de latencia de en el desarrollo tumoral situ , 4) y estocástico progresión del tumor. Debido a la tumorigénesis in situ carece de un modelo correspondiente in vitro, las pruebas de drogas in vitro no se puede realizar wmodelos condicionales Ith GEM. En contraste con otros tipos de cáncer, los modelos condicionales de GEM astrocitomas rara vez son inducidos por mutaciones oncogénicas individuales 11. Por lo tanto, se requieren complejos sistemas de mejoramiento para generar GEM condicional con múltiples mutaciones oncogénicas. Por otra parte, la iniciación astrocitoma ocurre con penetrancia variable después de un largo período de latencia en estos modelos, mientras que la progresión a los astrocitomas de alto grado se produce generalmente en un no-uniforme, de manera estocástica y en última instancia da lugar a tumores con complejos paisajes genómicas y la cinética de crecimiento rápido 27, 28. La penetrancia variable y la naturaleza estocástica de la progresión maligna en modelos GEM condicional requiere que los ratones individuales se seleccionaron mediante imágenes radiográficas para detectar la presencia y la ubicación de los astrocitomas de alto grado antes de su inscripción en los ensayos de medicamentos preclínicos. Tomados en conjunto, estas limitaciones impiden la generación y prueba de los grandes cohortes de GEM condicional requerida para prpruebas de drogas eClinical. El sistema de GEM RCAS-TVA, que utiliza retrovirales aviar (RCAS) vectores para infectar GEM ingeniería genética para expresar el receptor viral (TVA) en tipos específicos de células neuronales, se ha utilizado ampliamente para modelar la tumorigénesis astrocitoma 11. En contraste con GEM condicional, este modelo de sistema permite la introducción de múltiples mutaciones oncogénicas en tipos de células específicas sin el requisito de que los esquemas de selección complejas. Sin embargo, está limitada por penetrancia variable, el requisito de que las células se dividen activamente para lograr la integración viral, y la inserción aleatoria de transgenes en el genoma huésped 29. Los modelos no germinales GEM (nGEM), que utilizan células recogidas de GEM, son cada vez más importantes, ya que superar muchas de las limitaciones de otros sistemas modelo 15. El papel de tipo de célula y de iniciar mutaciones concurrentes en la patogénesis astrocitoma son difíciles de disuadirmina utilizando establecido líneas de células humanas o GBM PDX porque se derivan de los tumores en etapa terminal que se han acumulado mutaciones genéticas extensas en tipos de células no definidos durante el curso de la progresión maligna. En contraste, todos los grados de astrocitomas pueden modelarse usando nGEM mediante la inducción de mutaciones genéticas definidas dentro de los tipos de células cerebrales purificados específicos 11,30. Por lo tanto, la influencia de mutaciones genéticas específicas y tipo de células en fenotipos celulares y moleculares se puede determinar in vitro e in vivo. Similar a las líneas de células de GBM humanos establecidos, en ensayos in vitro inicial de fármaco usando nGEM se puede utilizar para priorizar los medicamentos para las pruebas in vivo utilizando las mismas células. La tumorigénesis in vivo, se puede determinar por aloinjerto nGEM células ortotópicamente en los cerebros de los compañeros de camada singénicos inmunocompetentes 30. Por tanto, estos modelos de aloinjertos ortotópico permiten pruebas in vivo no sólo de citotóxica convencional unnd terapias dirigidas, pero inmunomoduladores y terapias estroma orientada también. Finalmente, el papel del microambiente en la iniciación y progresión del tumor se puede determinar mediante la comparación de resultados entre los modelos convencionales GEM nGEM y utilizando las mismas mutaciones en los mismos tipos de células. Nosotros y otros han desarrollado astrocitoma nGEM utilizando células primarias - astrocitos, NSC, o células precursoras de oligodendrocitos (OPC) - recogidas de GEM 30-34. La razón de ser del desarrollo de un astrocitoma nGEM era crear un modelo para determinar las consecuencias fenotípicas de las mutaciones oncogénicas en tipos específicos de células que podrían ser utilizados para las pruebas de drogas preclínicas in vitro e in vivo en animales inmunocompetentes. Cosechamos astrocitos fenotípicamente WT corticales y NSC de la no-Cre que expresan, GEM condicional mantenido en un&gt; 94% de fondo C57 / Bl6 con vía presupuesto ordinario floxed - Rb1 loxP / loxP, o TgGZT121 - y floxed RTK / RAS / PI3K vía - Cf1 loxP / loxP, Kras G12D, PTEN loxP / loxP - genes en varias combinaciones 35-39. Inducimos recombinación genética in vitro usando vectores adenovirales que codifican la recombinasa Cre. Debido a que las cosechas de astrocitos corticales contienen una mezcla de tipos de células, hemos utilizado vectores Ad5GFAPCre o transgenes oncogénicos dominantes, tales como TgGZT 121 impulsada desde el promotor GFAP humana, para enriquecer para GFAP + astrocitos corticales en estos cultivos. Hemos definido las consecuencias fenotípicas de G 1 / S (Rb), MAPK, y mutaciones de la vía PI3K en astrocitos corticales y NSC in vitro e in vivo. MAPK y PI3K vía activada por G1 / S-defectuosos astrocitos molecularmente mimetizada GBM humano proneural y, tras la inyección ortotópico, tumores formados en una ubicación predefinida con una cinética de crecimiento uniforme, latencias cortas, y el histopatológicosAL características de GBM humano 30. Monitoreo longitudinal del crecimiento del tumor in vivo ayuda a las pruebas preclínicas fármaco a través de la normalización de las cohortes de tratamiento y análisis cuantitativo de crecimiento del tumor en respuesta al tratamiento 40. Se determinó la cinética de crecimiento del tumor por imágenes de bioluminiscencia longitudinal de los ratones inyectados con luciferasa que expresa astrocitos corticales. Por lo tanto, los astrocitos corticales y NSC derivados de GEM condicional proporcionan un sistema modelo manejable para la definición de las consecuencias funcionales de las mutaciones de astrocitoma asociada y un sistema de modelo potencial para el desarrollo de fármacos preclínicos.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="784">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:241px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:191px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:233px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:241px;">Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium (DMEM) (1X)</td>
			<td style="width:191px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">11995065</td>
			<td style="width:233px;">DMEM can also be purchased from other suppliers including GIBCOSigma and Cellgro</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">Fetal Bovine Serum, Regular</td>
			<td style="width:191px;">Cellgro</td>
			<td style="width:119px;">35-010-CV</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">Penicillin-Streptomycin</td>
			<td style="width:191px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">15140122</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:241px;">Sharp-Pointed Dissecting Scissors</td>
			<td style="width:191px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">08-395</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:241px;">Cartilage Thumb Forceps, Curved</td>
			<td style="width:191px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">1631</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:241px;">Miltex 17-301 Style 1 Jeweler Style Forceps, Fine, 4</td>
			<td style="width:191px;">Miltex</td>
			<td style="width:119px;">17-301</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">Ethanol (200 proof)</td>
			<td style="width:191px;">Decon Labs</td>
			<td style="width:119px;">2710</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">Razor Blades</td>
			<td style="width:191px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">55411-050</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:241px;">Hanks&#39; Balanced Salt Solution (HBSS) (1X), liquid</td>
			<td style="width:191px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">14175-095</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:241px;">TrypLE Express (1X), Phenol Red</td>
			<td style="width:191px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">12605-010</td>
			<td style="width:233px;">Other Trypsin solutions are also suitable for cortical astrocyte havest and culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">CULTURE DISH, 60 x 15 mm</td>
			<td style="width:191px;">Thomas Scientific</td>
			<td style="width:119px;">9380H77</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">15 ml tubes</td>
			<td style="width:191px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:119px;">352096</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">50 ml tubes</td>
			<td style="width:191px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:119px;">352070</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:241px;">Adenovirus stock</td>
			<td style="width:191px;">Gene Transfer Vector Core, U. Iowa</td>
			<td style="width:119px;">Ad5CMVCre</td>
			<td style="width:233px;">Store in 5 &#181;l aliquots at -80 C. Hazardous.&#160; Use Bsl2 safetyy&#160; precautions</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:241px;">Sodium sulfate (Na2SO4)&#160;</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">238597</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:241px;">Potassium sulfate (K2SO4)</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">221325</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:241px;">Magnesium chloride (MgCl2)</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">M8266</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:241px;">Calcium chloride (CaCl2)</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">746495</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">HEPES potassium salt</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">H0527</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">D-(+)- Glucose</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">G8270&#160;</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">Phenol Red</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">P3532</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">Sodium hydroxide (NaOH)</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">S5881</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">Papain</td>
			<td style="width:191px;">Worthington</td>
			<td style="width:119px;">LS003127</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">L-Cysteine-HCl</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">C1276</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">Syringe filter (0.22 &#181;m pore size)</td>
			<td style="width:191px;">Millipore</td>
			<td style="width:119px;">SLGP033NS</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="80">
			<td height="80" style="height:80px;width:241px;">Neurocult proliferation kit, mouse</td>
			<td style="width:191px;">Stemcell Technologies</td>
			<td style="width:119px;">5702</td>
			<td style="width:233px;">This kit contains the NeuroCult NSC Basal Medium and NeuroCult NSC supplement needed for NSC culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">0.2% Heparin solution</td>
			<td style="width:191px;">Stemcell Technologies</td>
			<td style="width:119px;">7980</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">EGF&#160;</td>
			<td style="width:191px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">PMG8041</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">bFGF&#160;</td>
			<td style="width:191px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">PHG0261</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:241px;">Hanks&#39; Balanced Salt Solution (HBSS) (10X)</td>
			<td style="width:191px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">14185-052</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:241px;">Magnesium sulfate (MgSO4)</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">M7506</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:241px;">Sodium bicarbonate (NaHCO3)</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">S5761</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:241px;">E-64</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">E3132</td>
			<td style="width:233px;">Make 10 mM stock in DMSO, store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">6-well plates</td>
			<td style="width:191px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">07-200-83</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">Cell strainer (40 &#181;m pore size)</td>
			<td style="width:191px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">352340</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:241px;">Stem cell dissociation solution</td>
			<td style="width:191px;">Stemcell Technologies</td>
			<td style="width:119px;">5707</td>
			<td style="width:233px;">Alternatively, use gentle enzyme solutions such as Accutase</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">Methyl cellulose 15 cP</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">M7027</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:241px;">Dulbecco&#39;s Modified Eagle&#39;s Media 2X</td>
			<td style="width:191px;">Millipore</td>
			<td style="width:119px;">SLM-202-B</td>
			<td style="width:233px;">For making 5% methyl cellulose solution</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:241px;">1.7mL Snap Cap Microcentrifuge Tube</td>
			<td style="width:191px;">Corning</td>
			<td align="right" style="width:119px;">3620</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:241px;">Hamilton syringe, 250 &#181;l LT no needle</td>
			<td style="width:191px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">14-815-92</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">PB600-1 Antigen Dispenser</td>
			<td style="width:191px;">Hamilton</td>
			<td style="width:119px;">&#160;83700</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">Disposable 18 ga needles&#160;</td>
			<td style="width:191px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">NC9015638&#160;</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">27 ga 1/2&#34; luer tip needle</td>
			<td style="width:191px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">14-826-48</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">2,2,2-Tribromoethanol (Avertin)</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">T48402</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">Betadine</td>
			<td style="width:191px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">NC9386574</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">Puralube Opthalmic Ointment</td>
			<td style="width:191px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">NC9689910</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">&#160;Model 900 Stereotaxic frame</td>
			<td style="width:191px;">Kopf Instruments</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">VETBOND</td>
			<td style="width:191px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">NC9259532&#160;</td>
			<td style="width:233px;">Tissue adhesive&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">Lidocaine&#160;</td>
			<td style="width:191px;">ShopMedVet</td>
			<td style="width:119px;">RXLIDO-EPI</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:241px;">CellTiter 96 AQueous One Solution Cell Proliferation Assay (MTS)</td>
			<td style="width:191px;">Promega</td>
			<td style="width:119px;">G3580</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">Anti-Sox2</td>
			<td style="width:191px;">Millipore</td>
			<td style="width:119px;">AB5603</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:241px;">Polyclonal Rabbit Anti-Glial Fibrillary Acidic Protein (GFAP)</td>
			<td style="width:191px;">Dako</td>
			<td style="width:119px;">Z0334&#160;</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">IVIS Kinetic</td>
			<td style="width:191px;">PerkinElmer</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:233px;">For in vivo imaging</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:241px;">D-Luciferin - K+ Salt Bioluminescent Substrate</td>
			<td style="width:191px;">PerkinElmer</td>
			<td style="width:119px;">122796</td>
			<td style="width:233px;">For in vivo bioluminescence imaging</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">EdU Imaging Kit</td>
			<td style="width:191px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">C10340</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:241px;">MSCV Luciferase PGK-hygro</td>
			<td style="width:191px;">Addgene</td>
			<td style="width:119px;">18782</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

modeling astrocytoma pathogenesis in vitro and in vivo using cortical astrocytes or neural stem cells from conditional, genetically engineered mice

Current astrocytoma models are limited in their ability to define the roles of oncogenic mutations in specific brain cell types during disease pathogenesis and their utility for preclinical drug development. In order to design a better model system for these applications, phenotypically wild-type cortical astrocytes and neural stem cells (NSC) from conditional, genetically engineered mice (GEM) that harbor various combinations of floxed oncogenic alleles were harvested and grown in culture. Genetic recombination was induced in vitro using adenoviral Cre-mediated recombination, resulting in expression of mutated oncogenes and deletion of tumor suppressor genes. The phenotypic consequences of these mutations were defined by measuring proliferation, transformation, and drug response in vitro. Orthotopic allograft models, whereby transformed cells are stereotactically injected into the brains of immune-competent, syngeneic littermates, were developed to define the role of oncogenic mutations and cell type on tumorigenesis in vivo. Unlike most established human glioblastoma cell line xenografts, injection of transformed GEM-derived cortical astrocytes into the brains of immune-competent littermates produced astrocytomas, including the most aggressive subtype, glioblastoma, that recapitulated the histopathological hallmarks of human astrocytomas, including diffuse invasion of normal brain parenchyma. Bioluminescence imaging of orthotopic allografts from transformed astrocytes engineered to express luciferase was utilized to monitor in vivo tumor growth over time. Thus, astrocytoma models using astrocytes and NSC harvested from GEM with conditional oncogenic alleles provide an integrated system to study the genetics and cell biology of astrocytoma pathogenesis in vitro and in vivo and may be useful in preclinical drug development for these devastating diseases.

Hemos desarrollado un sistema modelo nGEM con astrocitos corticales y NSC cosechadas de acogida GEM neonatal floxed alelos oncogénicos condicionales que se pueden caracterizar fenotípicamente in vitro e in vivo (Figura 1). Con el fin de investigar las consecuencias de mutaciones oncogénicas específicamente en astrocitos corticales in vitro, es crítico para enriquecer primero para astrocitos. Cosechas de astrocitos corticales contienen una mezcla de microglia, astrocitos, ...

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Modeling Astrocytoma Pathogenesis In Vitro and In Vivo Using Cortical Astrocytes or Neural Stem Cells from Conditional, Genetically Engineered Mice

Phenotypically wild-type astrocytes and neural stem cells harvested from mice engineered with floxed, conditional oncogenic alleles and transformed via viral Cre-mediated recombination can be used to model astrocytoma pathogenesis in vitro and in vivo by orthotopic injection of transformed cells into brains of syngeneic, immune-competent littermates.

Modelado astrocitoma Patogénesis<em&gt; In Vitro</em&gt; Y<em&gt; En Vivo</em&gt; Uso cortical astrocitos o células troncales nerviosas de ratones condicionales, Genéticamente Manipulados

Current astrocytoma models are limited in their ability to define the roles of oncogenic mutations in specific brain cell types during disease ...

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Modeling Astrocytoma Pathogenesis In Vitro and In Vivo Using Cortical Astrocytes or Neural Stem Cells from Conditional, Genetically Engineered Mice

13.3K vistas.  University of North Carolina School of Medicine. Phenotypically wild-type astrocytes and neural stem cells harvested from mice engineered with floxed, conditional oncogenic alleles and transformed via viral Cre-mediated recombination can be used to model astrocytoma pathogenesis in vitro and in vivo by orthotopic injection of transformed cells into brains of syngeneic, immune-competent littermates.

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