CRM is a Damon Runyon-Genentech Clinical Investigator. This work was supported, in part, by grants to CRM from the Damon Runyon Cancer Research Foundation (CI-45-09), Department of Defense (W81XWH-09-2-0042), and University of North Carolina University Cancer Research Fund (UCRF). The authors wish to thank Daniel Roth for mouse husbandry assistance. The authors also wish to thank Hannah Chae, Carter McCormick, Demi Canoutas, Stephanie Gillette, and Susannah Krom for tissue culture and immunofluorescence assistance.

The authors have nothing to disclose.

En kritik adımlar, 2), 3) iyice hücreleri ayırmak, meninks kaldırmak için korpus kallosum altında doku almadan korteksi çıkarılması için uygun hasat ve kortikal astrositlerde kültürünü 1) sağlamak ve 4) GFAP zenginleştirmek için + astrositlerden salınmaktadır. Biz GAFP + astrositlere zenginleştirmek için yöntemler (GFAP promotör kontrolü altında (bir baskın dönüşen transgen bir Ad5GFAPCre vektörü veya kullanımı ile TgGZT 121) genetik re...

Astrositomlar en sık görülen primer beyin tümörü glioblastoma (GBM), bir sınıf IV astrositom vardır, 12-15 ay 1,2 medyan sağkalım en yaygın ve agresif bir alt tiptir. Yaygın astrositomlar, özellikle GBM, istilası, tam cerrahi rezeksiyon engellemektedir adjuvan tedavilerin etkinliğini sınırlayan ve kaçınılmaz tedavi sonrası nüks 3 yol açar. De novo (birincil) GBM ile ya da kaçınılmaz (ikincil) GBM 4 ilerledikçe daha düşük grade astrositom ile ya başlangıçta başvururlar. GBM genomik heterojen ve üç damarlı sinyal yolları yönlendiren genler birbirini dışlayan ve co-ortaya çıkan mutasyonlar ile karakterizedir: G 1 / S (Rb) hücre döngüsü kontrol noktası, reseptör tirozin kinaz (RTK) ve TP53 5-7 yolaklarıyla. GBM GBM alt tipi Grip Grip Ağrilari olduğunu düşündürmektedir, beyin hücre tiplerinin farklı benzer sentezleme profillerine sahip dört alt tipinin genomik oluşmaktadırköken 6,8,9 kendi hücre tarafından etkilemiştir. Iyi astrositom modelleri astrositomdur patogenezi sırasında belirli hücre tiplerine mutasyonların belirli kombinasyonları rolünü tanımlamak için gereklidir. Daha verimli preklinik ilaç geliştirme için bu modelleri yararlanan hasta sonuçlarını geliştirmemize yardımcı olacaktır. Mevcut astrositom modeller, insan hücre hatları, hasta türetilmiş ksenograftları (PDX) genetik olarak tadil edilmiş normal insan astrositlerin nöral kök hücreleri (MGK) ve genetik olarak fareler (GEM) 10-14 kurulmuş bulunmaktadır. Kortikal astrositleri ve NSC - - floxed onkojenik alleles çeşitli kombinasyonlarını barındıran GEM hasat Biz primer beyin hücrelerini kullanan bir alternatif olmayan germ GEM (nGEM) modeli 15 geliştirmiştir. Amaç, fenotipik i preklinik ilaç gelişimi için in vitro ve in vivo olarak karakterize edilmiş ve potansiyel olarak yararlanılabilir genetik olarak tanımlanmış hücrelerin astrositom modellerini üretmek için olanmmune-kompetan farelerde azaltılmıştır. Kurulan insan hücre çizgileri Bunlar düz ön teknik yaygın olarak mevcuttur. Astrositoma patogenezinde ve in vitro ve in vivo ilaç yanıtı en yaygın olarak kullanılan model, ve immün yetersiz farelerde 10,11,16-18, ortotopik Xenografting üzerine kinetik ve tümör oluşum nedenlerinin tanımlanmış . Onların dezavantajları sadece yüksek dereceli astrositom çalışma sınırlayıcı, düşük-dereceli astrositomlardan kurulan hücre hatları oluşturmak için yetersizlik içermektedir; Kalkış tanımlanmış bir hücre eksikliği; genellikle orijinal hasta numunesinden gelen belirgin bir şekilde farklıdır genomik profiller ile kompleks genomik anormalliklerin mevcudiyeti; ve duyarlılık serumdaki 11,17,19-22, seri kültürü sırasında fenotipik ve genotipik sürüklenme için. Kurulan insan GBM hücre hatlarında bireysel onkojenik mutasyonların fenotipik sonuçları genellikle eluc engeller aslında mevcut anomalilerin sayıda kamufle edilebilirDoğrudan genotip-fenotip sonuçları idation. PDX immün yetersiz farelerde veya bağışıklık yetersizliği olan farelerde 12,23 beyinlerine ortotopik enjeksiyondan önce tanımlandığı gibidir, serumsuz ortam içinde yapışkan olmayan küremsi olarak kültür yoluyla hastaya izole astrositom hücrelerinin deri altına geçişi elde edilmektedir. PDX daha doğru bir insan astrositomas genomik manzara eder, fakat bilinen insan hücre çizgilerine benzer, tek tek onkojenik mutasyonların fenotipik etkisinin genomik karmaşıklığı nedeniyle 19,24 maskelenebilir. Özellikle yeni tedavilere karşılık olarak, belirli onkojenik mutasyonların fenotipik sonuçlarını tanımlamak için, bilinen insan hücre çizgileri veya PDX panelleri genellikle, genotip-fenotip bağlantıları ortaya genelleştirilebilirliğini gösterir ve hücre çizgisi özel etkilerin ihtimalini en aza indirmek için kullanılmaktadır. PDX doğru insan astrositomaların, inc histopatolojik izlerini recapitulate ikeninvazyon luding, bilinen insan hücre çizgilerinin ortotopik ksenogrefleri genelde 21,23,25 yok. Buna ek olarak, normal insan astrositler ve NSC in vitro ve in vivo olarak 13,14,26 astrositom tümörogenez modellemek için tanımlandığı onkojenik mutasyonu olan genetik olarak tasarlanmış edilmiştir. Bu hücreler, bilinen insan hücre çizgileri ve PDX genomik karmaşıklığı eksikliği ve doğru bir şekilde insan astrositoma histopatoloji özetlemek, fakat in vivo olarak bağışıklık eksikliği, kemirgenlerde yabancı-doku naklinde gerektirir. Tüm insan hücre modelleri immün-aracılı ksenogreft reddini önlemek için bağışıklık yetersizliği olan kemirgen ana gerektirdiğinden, bu modeller stroma hedefli ve immün-modülatör preklinik soruşturma sınırlayıcı, bir singenik sisteminin yerel tümör-stroma etkileşimleri özetlemek başarısız ve sağlam bir bağışıklık sistemi eksikliği 10,11 terapiler. Onkojenik Muta önceden belirlenmiş kombinasyonları fenotipik sonuçları GEM izni incelenmesiin situ tümörigenezinde sırasında in vivo leri. -Çıkışlı şartsız GEM gelişimi boyunca bütün dokular içinde mutasyonlara sahip ise, koşullu GEM hücre tipine özgü promoterler 10,11,15,18 kullanımı yoluyla, özel hücre tipleri Cre-aracılı rekombinasyon sınırlayan mutasyonların hedefleme olanak onkojenik allelleri floxed var. Koşullu astrositom GEM sağlam bir beyin içinde 11 farklı hücre tiplerinde onkojenik mutasyonların işlevsel roller ortaya çıkarmak için kullanılmaktadır. Koşullu GEM kullanılarak in situ gliom klinik öncesi programı 1) bir in vitro bir korelasyon eksikliği, kompleks genotipler ile, in situ tümör gelişiminde, 3) uzun gecikme farelerin büyük gruplarının bir üreten 2) zorluk içeren bir dizi faktöre ile sınırlıdır , 4) ve stokastik tümör ilerlemesi. In situ uygun bir tümör oluşumu in vitro bir model eksik olduğundan, in vitro ilaç testi ağırlık gerçekleştirilemezi&#39;inci geleneksel koşullu GEM modelleri. Diğer kanserlerin tersine, astrositom şartlı gem modelleri nadiren tek onkogenik mutasyon 11 ile uyarılmaktadır. Böylece, karmaşık ıslah programları çoklu onkojenik mutasyonlar ile koşullu GEM oluşturmak için gereklidir. Yüksek dereceli astrositom ilerleme genellikle tekdüze olmayan, stokastik bir şekilde ortaya çıkar ve sonuçta karmaşık genomik manzaralar ve hızlı büyüme kinetiği 27 ile tümörlere yol açar Dahası, astrositom başlatma, bu modellerde uzun bir kuluçka döneminden sonra penetransı değişken oluşur, 28. Koşullu GEM modellerinde değişken Penetrans ve malign ilerlemesi stokastik doğası bireysel farenin preklinik ilaç araştırmaları yaptığını kayıt önce yüksek dereceli astrositomaların varlığını ve yerini belirlemek için radyografik görüntüleme ile taranmalıdır gerektirir. Birlikte ele alındığında, bu sınırlamalar pr için gerekli üretim ve koşullu GEM büyük kohortlarda test engeleclinical uyuşturucu testi. Belirli bir nöral hücre tipleri üzerinde bulunan viral reseptörü (tva) ifade etmek üzere geliştirilen GEM enfekte etmek için kuş retroviral (RCAS) vektör kullanır RCAS-tva GEM sistemi,, geniş bir astrositoma tümörogenez 11 modellemek için kullanılmıştır. Koşullu GEM aksine, bu model sistem karmaşık yetiştirme programları için gerek olmaksızın, belirli hücre tiplerinde çoklu onkojenik mutasyonun ortaya çıkmasına olanak tanır. Bununla birlikte, değişken penetrans aktif viral entegrasyonu sağlamak için bölünen hücreler için ihtiyaç ve bunlar, konakçı genomu 29 içine transgenlerin rastgele yerleştirilmesi ile sınırlıdır. Diğer model sistemler 15 sınırlamaları birçok üstesinden çünkü GEM hasat hücreleri kullanması Sigara germ GEM (nGEM) modelleri, giderek daha önemli hale gelmektedir. Astrositoma patogenezinde hücre tipinin ve birlikte görülen mutasyon başlatma rolü engellemek için zordurbu habis ilerleyişi sırasında belirsiz hücre tipinde yaygın genetik mutasyonlar birikmiş son aşama tümörlerinden türetilmiştir, çünkü maden insan GBM hücresi türleri veya PDX tesis kullanılarak. Buna karşılık, astrositomaların tüm sınıflarda spesifik saflaştırılmış beyin hücre tipleri 11,30 içindeki genetik mutasyonlar tanımlanmış indükleyerek nGEM kullanılarak modellenebilir. Bu nedenle, belirli genetik mutasyon ve hücresel ve moleküler fenotipe hücre tipinin etkisi in vitro ve in vivo olarak belirlenebilir. Kurulan insan GBM hücre çizgilerine benzer bir şekilde, başlangıç ​​nGEM kullanılarak in vitro ilaç testleri aynı hücreleri kullanılarak, in vivo testler için ilaç öncelik için kullanılabilir. In vivo olarak tümör oluşumu daha sonra ortotopikal bağışıklık-kompetan singeneik litermatlarından 30 beyinlerine nGEM hücreleri allogeneik belirlenebilir. Bu ortotopik alograft modelleridir nedenle, sadece sitotoksik a in vivo testler izinnd terapileri hedefli, ancak immün-modülatör ve stroma hedefli tedaviler de. Son olarak, tümör başlaması ve ilerlemesi üzerinde mikro-rolü, aynı hücre tipinde aynı mutasyonları kullanılarak, nGEM konvansiyonel GEM modelleri arasında sonuçları karşılaştırarak belirlenebilir. Biz ve diğerleri birincil hücreler kullanılarak astrositomdur nGEM geliştirdik - astrositleri, MGK, ya olgodendrosit öncü hücrelerini (OPC) - GEM 30-34 hasat. Astrositom nGEM geliştirilmesi arkasındaki mantık, potansiyel olarak, bağışıklık-kompetan hayvanlarda klinik öncesi in vitro ilaç testleri için ve in vivo kullanılabilecek belirli hücre tiplerinde onkojenik mutasyonların fenotipik sonuçlarını belirlemek için bir model oluşturmak için olmuştur. Rb1 loxp / loxp veya TgGZT - Biz ifade fenotipik WT kortikal astrositleri ve non-Cre gelen MGK, floxed RB yolun bir&gt;% 94 C57 / BL6 arka plan üzerinde muhafaza koşullu GEM hasat121 - çeşitli kombinasyonlarda 35-39 genleri - Nf1 LoxP / LoxP, Kras G12D, PTEN LoxP / loxp - ve RTK / RAS / PI3K- yolu floxed. Bu Cre rekombinazı kodlayan adenoviral vektörler kullanılarak in vitro genetik yeniden neden oldu. Kortikal astrosit hasat hücre tiplerinin bir karışımını içerdiği için, bu kültürlerde GFAP + kortikal astrositler zenginleştirmek için, bu tür TgGZT insan GFAP promotöründen 121 olarak Ad5GFAPCre vektörler veya baskın onkojenik transgenleri, ikinci. Bu in vitro ve in vivo olarak kortikal astrositler ve NSC fenotipik G1 / S sonuçlarını (Rb) için, MAPK ve PI3K yolu tanımlanmış mutasyonlar. MAPK ve PI3K yolu ile aktive olan G1 / S hatalı olarak taklit insan astrosit moleküler proneural GBM ve ortotopik enjeksiyonu üzerine, düzgün büyüme kinetikleri, kısa süreye göre önceden belirlenmiş bir konumda oluşan tümörler, ve histopatolojikinsan GBM 30 al işaretlerinden. In vivo tümör büyümesinin tedavisine boyuna izlenmesi 40 cevaben tedavi gruplarına ya da tümör büyümesinin kantitatif analiz normalizasyonu ile klinik öncesi bir ilaç test yardımcı olur. Biz, lusiferaz sentezleyen kortikal astrositler enjekte edilmiş farelerin uzunlamasına biyolüminesans görüntüleme ile tümör büyüme kinetiklerini belirlenmiştir. Bu nedenle, elde edilen koşullu GEM kortikal astrositler ve NSC astrositom ve ilişkili mutasyonların işlevsel sonuçları ve klinik öncesi bir ilaç gelişimi için olası bir model sisteminin tanımı için izlenebilir model sistem sağlar.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="784">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:241px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:191px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:233px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:241px;">Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium (DMEM) (1X)</td>
			<td style="width:191px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">11995065</td>
			<td style="width:233px;">DMEM can also be purchased from other suppliers including GIBCOSigma and Cellgro</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">Fetal Bovine Serum, Regular</td>
			<td style="width:191px;">Cellgro</td>
			<td style="width:119px;">35-010-CV</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">Penicillin-Streptomycin</td>
			<td style="width:191px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">15140122</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:241px;">Sharp-Pointed Dissecting Scissors</td>
			<td style="width:191px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">08-395</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:241px;">Cartilage Thumb Forceps, Curved</td>
			<td style="width:191px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">1631</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:241px;">Miltex 17-301 Style 1 Jeweler Style Forceps, Fine, 4</td>
			<td style="width:191px;">Miltex</td>
			<td style="width:119px;">17-301</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">Ethanol (200 proof)</td>
			<td style="width:191px;">Decon Labs</td>
			<td style="width:119px;">2710</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">Razor Blades</td>
			<td style="width:191px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">55411-050</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:241px;">Hanks&#39; Balanced Salt Solution (HBSS) (1X), liquid</td>
			<td style="width:191px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">14175-095</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:241px;">TrypLE Express (1X), Phenol Red</td>
			<td style="width:191px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">12605-010</td>
			<td style="width:233px;">Other Trypsin solutions are also suitable for cortical astrocyte havest and culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">CULTURE DISH, 60 x 15 mm</td>
			<td style="width:191px;">Thomas Scientific</td>
			<td style="width:119px;">9380H77</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">15 ml tubes</td>
			<td style="width:191px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:119px;">352096</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">50 ml tubes</td>
			<td style="width:191px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:119px;">352070</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:241px;">Adenovirus stock</td>
			<td style="width:191px;">Gene Transfer Vector Core, U. Iowa</td>
			<td style="width:119px;">Ad5CMVCre</td>
			<td style="width:233px;">Store in 5 &#181;l aliquots at -80 C. Hazardous.&#160; Use Bsl2 safetyy&#160; precautions</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:241px;">Sodium sulfate (Na2SO4)&#160;</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">238597</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:241px;">Potassium sulfate (K2SO4)</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">221325</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:241px;">Magnesium chloride (MgCl2)</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">M8266</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:241px;">Calcium chloride (CaCl2)</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">746495</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">HEPES potassium salt</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">H0527</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">D-(+)- Glucose</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">G8270&#160;</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">Phenol Red</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">P3532</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">Sodium hydroxide (NaOH)</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">S5881</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">Papain</td>
			<td style="width:191px;">Worthington</td>
			<td style="width:119px;">LS003127</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">L-Cysteine-HCl</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">C1276</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">Syringe filter (0.22 &#181;m pore size)</td>
			<td style="width:191px;">Millipore</td>
			<td style="width:119px;">SLGP033NS</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="80">
			<td height="80" style="height:80px;width:241px;">Neurocult proliferation kit, mouse</td>
			<td style="width:191px;">Stemcell Technologies</td>
			<td style="width:119px;">5702</td>
			<td style="width:233px;">This kit contains the NeuroCult NSC Basal Medium and NeuroCult NSC supplement needed for NSC culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">0.2% Heparin solution</td>
			<td style="width:191px;">Stemcell Technologies</td>
			<td style="width:119px;">7980</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">EGF&#160;</td>
			<td style="width:191px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">PMG8041</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">bFGF&#160;</td>
			<td style="width:191px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">PHG0261</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:241px;">Hanks&#39; Balanced Salt Solution (HBSS) (10X)</td>
			<td style="width:191px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">14185-052</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:241px;">Magnesium sulfate (MgSO4)</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">M7506</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:241px;">Sodium bicarbonate (NaHCO3)</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">S5761</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:241px;">E-64</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">E3132</td>
			<td style="width:233px;">Make 10 mM stock in DMSO, store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">6-well plates</td>
			<td style="width:191px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">07-200-83</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">Cell strainer (40 &#181;m pore size)</td>
			<td style="width:191px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">352340</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:241px;">Stem cell dissociation solution</td>
			<td style="width:191px;">Stemcell Technologies</td>
			<td style="width:119px;">5707</td>
			<td style="width:233px;">Alternatively, use gentle enzyme solutions such as Accutase</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">Methyl cellulose 15 cP</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">M7027</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:241px;">Dulbecco&#39;s Modified Eagle&#39;s Media 2X</td>
			<td style="width:191px;">Millipore</td>
			<td style="width:119px;">SLM-202-B</td>
			<td style="width:233px;">For making 5% methyl cellulose solution</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:241px;">1.7mL Snap Cap Microcentrifuge Tube</td>
			<td style="width:191px;">Corning</td>
			<td align="right" style="width:119px;">3620</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:241px;">Hamilton syringe, 250 &#181;l LT no needle</td>
			<td style="width:191px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">14-815-92</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">PB600-1 Antigen Dispenser</td>
			<td style="width:191px;">Hamilton</td>
			<td style="width:119px;">&#160;83700</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">Disposable 18 ga needles&#160;</td>
			<td style="width:191px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">NC9015638&#160;</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">27 ga 1/2&#34; luer tip needle</td>
			<td style="width:191px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">14-826-48</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">2,2,2-Tribromoethanol (Avertin)</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">T48402</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">Betadine</td>
			<td style="width:191px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">NC9386574</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">Puralube Opthalmic Ointment</td>
			<td style="width:191px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">NC9689910</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">&#160;Model 900 Stereotaxic frame</td>
			<td style="width:191px;">Kopf Instruments</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">VETBOND</td>
			<td style="width:191px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">NC9259532&#160;</td>
			<td style="width:233px;">Tissue adhesive&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">Lidocaine&#160;</td>
			<td style="width:191px;">ShopMedVet</td>
			<td style="width:119px;">RXLIDO-EPI</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:241px;">CellTiter 96 AQueous One Solution Cell Proliferation Assay (MTS)</td>
			<td style="width:191px;">Promega</td>
			<td style="width:119px;">G3580</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">Anti-Sox2</td>
			<td style="width:191px;">Millipore</td>
			<td style="width:119px;">AB5603</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:241px;">Polyclonal Rabbit Anti-Glial Fibrillary Acidic Protein (GFAP)</td>
			<td style="width:191px;">Dako</td>
			<td style="width:119px;">Z0334&#160;</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">IVIS Kinetic</td>
			<td style="width:191px;">PerkinElmer</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:233px;">For in vivo imaging</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:241px;">D-Luciferin - K+ Salt Bioluminescent Substrate</td>
			<td style="width:191px;">PerkinElmer</td>
			<td style="width:119px;">122796</td>
			<td style="width:233px;">For in vivo bioluminescence imaging</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:241px;">EdU Imaging Kit</td>
			<td style="width:191px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">C10340</td>
			<td style="width:233px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:241px;">MSCV Luciferase PGK-hygro</td>
			<td style="width:191px;">Addgene</td>
			<td style="width:119px;">18782</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

modeling astrocytoma pathogenesis in vitro and in vivo using cortical astrocytes or neural stem cells from conditional, genetically engineered mice

Current astrocytoma models are limited in their ability to define the roles of oncogenic mutations in specific brain cell types during disease pathogenesis and their utility for preclinical drug development. In order to design a better model system for these applications, phenotypically wild-type cortical astrocytes and neural stem cells (NSC) from conditional, genetically engineered mice (GEM) that harbor various combinations of floxed oncogenic alleles were harvested and grown in culture. Genetic recombination was induced in vitro using adenoviral Cre-mediated recombination, resulting in expression of mutated oncogenes and deletion of tumor suppressor genes. The phenotypic consequences of these mutations were defined by measuring proliferation, transformation, and drug response in vitro. Orthotopic allograft models, whereby transformed cells are stereotactically injected into the brains of immune-competent, syngeneic littermates, were developed to define the role of oncogenic mutations and cell type on tumorigenesis in vivo. Unlike most established human glioblastoma cell line xenografts, injection of transformed GEM-derived cortical astrocytes into the brains of immune-competent littermates produced astrocytomas, including the most aggressive subtype, glioblastoma, that recapitulated the histopathological hallmarks of human astrocytomas, including diffuse invasion of normal brain parenchyma. Bioluminescence imaging of orthotopic allografts from transformed astrocytes engineered to express luciferase was utilized to monitor in vivo tumor growth over time. Thus, astrocytoma models using astrocytes and NSC harvested from GEM with conditional oncogenic alleles provide an integrated system to study the genetics and cell biology of astrocytoma pathogenesis in vitro and in vivo and may be useful in preclinical drug development for these devastating diseases.

Bu, fenotipik olarak in vitro ve in vivo olarak karakterize edilebilir koşullu onkojenik alelleri (Şekil 1) floxed yenidoğan GEM barınağı hasat kortikal astrositler ve MGK bir nGEM model sistemi geliştirmiştir. Özellikle in vitro kortikal astrositler onkojenik mutasyonların sonuçlarını incelemek için, ilk olarak astrositleri zenginleştirmek için kritik öneme sahiptir. Kortikal astrosit hasat mikroglia, astrositler, oligodendrositler, OPC ve nöronların bir ka...

Watch this Scientific Journal Video about Modeling Astrocytoma Pathogenesis In Vitro and In Vivo Using Cortical Astrocytes or Neural Stem Cells from Conditional, Genetically Engineered Mice at JoVE.co

Modeling Astrocytoma Pathogenesis In Vitro and In Vivo Using Cortical Astrocytes or Neural Stem Cells from Conditional, Genetically Engineered Mice

Phenotypically wild-type astrocytes and neural stem cells harvested from mice engineered with floxed, conditional oncogenic alleles and transformed via viral Cre-mediated recombination can be used to model astrocytoma pathogenesis in vitro and in vivo by orthotopic injection of transformed cells into brains of syngeneic, immune-competent littermates.

Modelleme Astrositom Patogenez<em&gt; İn Vitro</em&gt; Ve<em&gt; In Vivo</em&gt; Kortikal Astrositler veya Şartlı, Genetiği fareler ile Nöral Kök Hücreler kullanma

Current astrocytoma models are limited in their ability to define the roles of oncogenic mutations in specific brain cell types during disease ...

modeling-astrocytoma-pathogenesis-vitro-vivo-using-cortical

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Modeling Astrocytoma Pathogenesis In Vitro and In Vivo Using Cortical Astrocytes or Neural Stem Cells from Conditional, Genetically Engineered Mice

13.3K Görüntüleme.  University of North Carolina School of Medicine. Phenotypically wild-type astrocytes and neural stem cells harvested from mice engineered with floxed, conditional oncogenic alleles and transformed via viral Cre-mediated recombination can be used to model astrocytoma pathogenesis in vitro and in vivo by orthotopic injection of transformed cells into brains of syngeneic, immune-competent littermates.

Video: Modeling Astrocytoma Pathogenesis In Vitro and In Vivo Using Cortical Astrocytes or Neural Stem Cells from Conditional, Genetically Engineered Mice