This work was supported by UWS and ThermoFisher Scientific. One of the authors (DK) acknowledges the receipt of an Australian Postgraduate Award.

Precaución: Por favor, consulte las hojas de datos de seguridad del material (MSDS) para todos los materiales y reactivos antes de su uso (es decir, Pedidos de metanol). Asegurar el uso de todas las prácticas apropiadas de seguridad al manipular disolventes y cromatografía líquida de eluyente alta resolución (HPLC). Asegurar el uso apropiado de los controles de ingeniería de HPLC, balanza analítica y un detector de instrumentación, y asegurar el uso de equipo de protección personal (gafas de seguridad, guantes, bata de laboratorio, pantalones largos y zapatos cerrados). Nota: Este protocolo describe 3 métodos de flujo de reacción de derivatización post-columna (RF-PCD) técnicas, cada uno con un reactivo diferente específica a la naturaleza de un compuesto químico de interés. Para el análisis de ROS vaya a la sección &quot;1. La detección de ROS mediante DPPH •&quot;, para el análisis de aminas primarias véase la sección &quot;2. Detección de aminas primarias usando fluorescamina&quot;, y para el análisis de compuestos fenólicos vaya a la sección &quot;3 . La detección de fenolesutilizando 4-aminoantipireno y ferricianuro de potasio &quot;. Use agua ultra pura (por ejemplo, agua Milli-Q) en todas partes. Nota: La conexión de la columna de RF se consigue en casi la misma forma que una columna de HPLC convencional con la principal diferencia es el número de accesorios de los extremos en una columna de RF. Accesorios utilizados para conectar una columna de HPLC estándar para el sistema de HPLC son capaces de ser utilizado para conectar una columna de RF al sistema de HPLC. 1. Detección de ROS Utilizando DPPH • <ol><li> Puesta en marcha de instrumento de HPLC <ol><li> Preparación del instrumento HPLC con 100% de agua en la línea A y 100% de metanol en la línea B como la fase móvil. Purgar las bombas de acuerdo con los requisitos del fabricante. </li><li> Configurar los componentes instrumentales de HPLC y la bomba de derivatización adicional como se ilustra en la Figura 4A. </li><li> Ajuste el detector de UV-Vis para analizar a una longitud de onda de 520 nm. </li></ol></li><li> Puesta en marcha decolumna de RF <ol><li> Conectar la entrada de la columna de RF al instrumento HPLC. </li><li> Conectar una longitud de 15 cm de tubo de 0,13 mm ID para el puerto de salida central de la columna de la RF. </li><li> Conectar un puerto de periféricos de salida al detector UV-Vis utilizando una longitud de 15 cm de tubo Identificación del 0,13 mm. </li><li> Conecte la línea de bomba de DPPH • a un puerto de periféricos de la salida de la columna de RF. </li><li> Bloquear el puerto de periféricos sin utilizar en la salida de la columna de RF usando un tapón de columna. </li><li> Llevar la velocidad de flujo de la bomba de HPLC a 1 ml min -1 a 100% de la línea B - 100% de metanol. </li><li> Equilibrar la columna con la fase móvil metanol 100% durante 10 min para una columna mm de longitud 4,6 mm ID x 100. Este tiempo debe hacerse a escala de acuerdo a las dimensiones de otras columnas, el usuario puede emplear. </li></ol></li><li> Preparación de DPPH • Reactivo <ol><li> Preparar una solución / ml 0,1 mg de DPPH • en metanol. </li&gt; <li> Sonicar el matraz que contiene el DPPH • reactivo para 10 min. </li><li> Tapar el matraz en papel de aluminio para evitar la exposición a la luz. </li><li> Purgar el DPPH • bomba con el preparado de DPPH • Reactivo de acuerdo con los requisitos del fabricante. </li></ol></li><li> Sintonizar la salida de la columna de RF <ol><li> Se pesan exactamente dos recipientes limpios y secos. Etiquetar un recipiente como un elemento central y el otro como periférico. </li><li> Recoger el efluente que sale del puerto central en el recipiente de marcado central para 1,0 min. </li><li> Volver a pesar el recipiente de puerto central y calcular el peso del flujo desde el puerto central de la siguiente manera: Peso del puerto central (g) = peso final del puerto central del buque (g) - Peso inicial del puerto central del buque (g) </li><li> Repetir los pasos 1.4.2 y 1.4.3 para el efluente que sale de la UV-Vis que está unido al puerto de periféricos de la columna de RF y calcular el peso de la embarcación puerto de periféricos comosiguiente: Peso del puerto de periféricos (g) = peso final del puerto de periféricos de buques (g) - Peso inicial del puerto de periféricos de buques (g) </li><li> Calcular el porcentaje de la corriente procedente de los puertos centrales y periféricas de la siguiente manera: % Puerto central = Peso del puerto central (g) / (Peso del puerto central (g) + Peso del puerto de periféricos (g)) x 100 % De puerto de periféricos = Peso del puerto de periféricos (g) / (Peso del puerto central (g) + Peso del puerto de periféricos (g)) x 100 </li><li> Asegúrese de que la relación de segmentación entre el flujo central y el flujo periférico es 30:70 (central: periférica). Si el flujo central está por encima de 30%, disminuir la cantidad de salida de flujo mediante la adición de una longitud de tubo de id 0,13 mm a la salida del puerto central. Si el flujo central está por debajo de 30% de disminución de la longitud de la tubería mm 0,13 desde el puerto central. </li><li> Repita el paso 1.4.1 a la 1.4.6 hasta que una relación de segmentación de 30:70 (central: periférica) se logra. </li><li> Ajuste el caudal de la DPPH • bomba de reactivo de 0,5 ml min-1. Nota: La columna de RF configurado con DPPH • reactivo está listo para su análisis. Ahora se pueden inyectar las muestras. </li></ol></li><li> Pon ejecutar condiciones de parada <ol><li> Una vez que todas las muestras se han inyectado, lo que indica que la carrera ha terminado, detener el flujo de la bomba del reactivo de derivatización. </li><li> Retire la línea de DPPH • bomba de reactivo desde el puerto de periféricos y el tapón del puerto. </li><li> Equilibrar la columna con la fase móvil en la que se va a guardar, permitiendo la fase móvil para pasar a través de la columna a 1 ml min -1 para 10 min. </li><li> Detener el flujo de la bomba de la fase móvil en el instrumento de HPLC. </li><li> Vuelva a colocar el DPPH • reactivo con metanol y purgar la bomba adicional. Nota: El sistema HPLC puede ahora ser apagado. </li></ol></li></ol> 2. Detección de aminas primarias Uso de FLUORESCamina <ol><li> Preparación de la fase móvil <ol><li> Preparar 1 L de una solución de acetato de amonio 10 mM, ajustando el pH de la solución a 9,0 con hidróxido de amonio 5 M antes de la dilución al volumen. </li><li> Añadir 52,6 ml de acetonitrilo (ACN) al tampón de acetato de amonio para obtener una fase móvil premezclada de 95:05 (tampón: ACN). </li></ol></li><li> Puesta en marcha de instrumento de HPLC <ol><li> Preparación del instrumento HPLC con el tampón preparado pre-mezclado de la línea A como fase móvil. Purgar la bomba de acuerdo con los requisitos del fabricante. </li><li> Configurar los componentes instrumentales de HPLC y la bomba de derivatización adicional como se ilustra en la Figura 4A. </li><li> Adjuntar una bobina amortiguador de impulsos a la bomba de derivación. </li><li> Puesta en marcha del detector de fluorescencia (FLD) con una longitud de onda de excitación de longitud de onda de 390 nm y emisión de 475 nm. </li></ol></li><li> Puesta en marcha de la columna de RF <ol><li> Conectar THe entrada de la columna de RF al instrumento HPLC. </li><li> Conectar una longitud de 15 cm de tubo de 0,13 mm ID para el puerto de salida central de la columna de la RF. </li><li> Conectar un puerto de periféricos de salida de la columna de RF al detector FLD utilizando una longitud de 15 cm de tubo de Identificación del 0,13 mm. </li><li> Conecte la línea de bomba de derivación a un puerto de periféricos de la salida de la columna de RF. </li><li> Bloquear el puerto de periféricos sin utilizar en la salida de la columna de RF usando un tapón de columna. </li><li> Llevar la velocidad de flujo de la bomba de HPLC a 1 ml min -1 a 100% de la línea A - 10 mM acetato de amonio tampón de pH 9, premezclado con 5% de ACN. </li><li> Equilibrar la columna con la línea de una fase móvil 100% durante 10 min para una columna mm de longitud 4,6 mm ID x 100. Este tiempo puede hacerse a escala de acuerdo a las dimensiones de otras columnas, el usuario puede emplear. </li></ol></li><li> Preparación de reactivo de fluorescamina <ol><li> Hacer 100 ml de un reactivo de 0,1 mg ml -1 fluorescamina. </li> &lt;li&gt; Someter a ultrasonidos durante 1 minuto. </li><li> Cubrir con papel de aluminio para evitar la exposición a la luz. </li><li> Purgar la bomba de reactivo con el reactivo fluorescamina preparados de acuerdo con los requisitos del fabricante. </li></ol></li><li> Sintonizar la salida de la columna de RF <ol><li> Se pesan exactamente dos recipientes limpios y secos. Etiquetar un recipiente como un elemento central y el otro como periférico. </li><li> Recoger el efluente que sale del puerto central en el recipiente de marcado central para 1,0 min. </li><li> Volver a pesar el recipiente central y calcular el peso de la corriente desde el puerto central de la siguiente manera en el paso 1.4.3. </li><li> Repetir los pasos 2.5.2 a 2.5.3 para el efluente que sale de la FLD que está conectado al puerto de periféricos de la columna de RF y calcular el peso para periférica de la siguiente manera en el paso 1.4.4. </li><li> Calcular el porcentaje de la corriente procedente de los puertos centrales y periféricas de la siguiente manera en el paso 1.4.5. </li><li> Asegúrese de que la relación de segmentación entre el flujo central y el periféricoflujo es 43:57 (central: periférica). Si el flujo central está por encima de 43%, disminuir la cantidad de salida de flujo mediante la adición de una longitud de tubo de id 0,13 mm a la salida del puerto central. Si el flujo central está por debajo de 43%, disminuir la longitud de la tubería mm 0,13 desde el puerto central. </li><li> Repita el paso 2.5.1 a 2.5.6 hasta una proporción de 43:57 segmentación (central: periférica) se logra. </li><li> Ajuste el caudal de la bomba de fase móvil a 0,7 ml min-1. </li><li> Ajuste la bomba de derivación a fluir a 0,1 ml min-1. Nota: La columna RF configurar con el reactivo de fluorescamina está ahora lista para el análisis. Ahora se pueden inyectar las muestras. </li></ol></li><li> Pon ejecutar condiciones de parada <ol><li> Una vez que todas las muestras se han inyectado, lo que indica que la carrera ha terminado, parar la bomba derivatización. </li><li> Retire la línea de la bomba de derivación desde el puerto de periféricos y el tapón. </li><li> Equilibrar la columna con la fase móvil enque se va a guardar, permitiendo la fase móvil para pasar a través de la columna a 1 ml min -1 para 10 min. </li><li> Detener el flujo de la bomba de la fase móvil. </li><li> Vuelva a colocar el reactivo fluorescamina con acetonitrilo y purgar la bomba de derivación. Nota: El sistema HPLC puede ahora ser apagado. </li></ol></li></ol> 3. La detección de fenoles utilizando 4-aminoantipireno y ferricianuro potásico <ol><li> Preparación de la fase móvil <ol><li> Preparar 1 L de una solución de acetato de amonio 100 mM, ajustando el pH de la solución a 9,0 con hidróxido de amonio 5 M antes de la dilución al volumen. </li><li> Añadir 52,6 ml de metanol a la solución tampón de acetato de amonio para obtener una fase móvil premezclada de 95: 5 (tampón: metanol). </li></ol></li><li> Puesta en marcha de instrumento de HPLC <ol><li> Preparación del instrumento HPLC con el tampón preparado pre-mezclado de la línea A como fase móvil. Purgar la bomba de acuerdo con el fabricante; S requisitos. </li><li> Configurar los componentes instrumentales de HPLC y las dos bombas de reactivos adicionales, como se ilustra en la Figura 4B. </li><li> Adjuntar una bobina amortiguador de impulsos a cada una de las bombas de reactivos. </li><li> Ajuste el detector de UV-Vis para analizar a una longitud de onda de 500 nm. </li></ol></li><li> Puesta en marcha de la columna de RF <ol><li> Conectar la entrada de la columna de RF al instrumento HPLC. </li><li> Conectar una longitud de 15 cm de tubo de 0,13 mm ID para el puerto de salida central de la columna de la RF. </li><li> Conectar un puerto de periféricos de salida de la columna de RF al detector de UV-Vis usando una longitud de 15 cm de tubo de Identificación del 0,13 mm. </li><li> Conectar cada reactivo (es decir, 4-aminoantipireno y ferricianuro de potasio) de la línea de la bomba a un puerto de periféricos en la salida de la columna de RF. </li><li> Llevar la velocidad de flujo de la bomba de HPLC a 1 ml min -1 a 100% de la línea A - 100 mM acetato de amonio tampón de pH 9, premezclado con 5% de metanol. </li><li> Equilibrar la columna won la línea A de la fase móvil 100% durante 10 minutos para una columna mm de longitud de 4,6 mm de diámetro x 100. Este tiempo puede hacerse a escala de acuerdo a las dimensiones de otras columnas, el usuario puede emplear. </li></ol></li><li> Preparación de reactivo de 4-aminoantipireno <ol><li> Preparar un tampón de acetato de amonio con un pH de 9 siguiendo el paso 3.1.1. </li><li> Pesar 150 mg 4-aminoantipireno y disolver en 100 ml de tampón de acetato de amonio preparada (pH 9). </li><li> Sonicar durante 1 min. </li><li> Cubrir con papel de aluminio para evitar la exposición a la luz. </li><li> Purgar la primera bomba de reactivo con el reactivo 4-aminoantipireno preparados de acuerdo con los requisitos del fabricante. </li></ol></li><li> Preparación de reactivo de ferricianuro de potasio <ol><li> Pesar 150 mg de ferricianuro de potasio y disolver en 100 ml de tampón de acetato de amonio (pH 9) preparado como en la etapa 3.1.1. </li><li> Sonicar durante 1 min. </li><li> Cubrir con papel de para evitar la exposición a la luz. </li><li> Purge la segunda bomba de reactivo con el reactivo de ferricianuro de potasio preparada de acuerdo con los requisitos del fabricante. </li></ol></li><li> Sintonización de la columna de RF <ol><li> Se pesan exactamente dos recipientes limpios y secos. Etiquetar un recipiente como un elemento central y el otro como periférico. </li><li> Recoger el efluente que sale del puerto central en el recipiente de marcado central para 1,0 min. </li><li> Volver a pesar el recipiente central y calcular el peso de la corriente desde el puerto central de la siguiente manera en el paso 1.4.3. </li><li> Repetir los pasos 3.6.2 a 3.6.3 para el efluente que sale de la UV-Vis que está unido al puerto de periféricos de la columna de RF y calcular el peso para periférica de la siguiente manera en el paso 1.4.4. </li><li> Calcular el porcentaje de la corriente procedente de los puertos centrales y periféricas de la siguiente manera en el paso 1.4.5. </li><li> Asegúrese de que la relación de segmentación entre el flujo central y el flujo periférico es 50:50 (central: periférica). Si el flujo central está por encima de 50%, disminuir elcantidad de flujo que sale por la adición de una longitud de tubo de id 0,13 mm para el puerto central de salida. Si el flujo central está por debajo de 50%, disminuir la longitud de la tubería mm 0,13 desde el puerto central. </li><li> Repita el paso 3.6.1 a la 3.6.6 hasta que una relación de segmentación de 50:50 (central: periférica) se logra. </li><li> Ajuste el caudal de la bomba 4-aminoantipireno a 0,5 ml min-1. </li><li> Ajuste el caudal de la bomba de ferricianuro de potasio y 0,25 ml min-1. Nota: La columna de RF establecido con los reactivos de dos componentes está ahora listo para su análisis. Ahora se pueden inyectar las muestras. </li></ol></li><li> Pon ejecutar condiciones de parada <ol><li> Una vez que todas las muestras se han inyectado la carrera ha terminado, lo que indica que la carrera ha terminado, deje de ambas bombas de reactivos. </li><li> Retire las líneas de la bomba de reactivo de los puertos periféricos y reemplazarlos con una pieza de 15 cm de tubo de 0,13 mm. </li><li> Equilibrar la columna con la fase móvil en which que se va a guardar, permitiendo la fase móvil para pasar a través de la columna a 1 ml min -1 para 10 min. </li><li> Detener el flujo de la bomba de la fase móvil en el instrumento de HPLC. </li><li> Reemplazan tanto los reactivos en el reactivo de bombas con metanol y se purgan las bombas adicionales según el requisito del fabricante. Nota: El sistema HPLC puede ahora ser apagado. </li></ol></li></ol>

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W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reaction+Detectors+in+Modern+Liquid+Chromatography.">Reaction Detectors in Modern Liquid Chromatography.</a> Chromatographia. 15, 161-166 (1982).</li><li>Pravadil-Cekic, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+Reaction+Flow+Chromatography+for+the+Analysis+of+Amino+Acid:+Derivatisation+With+Fluorescamine+Reagent.">Using Reaction Flow Chromatography for the Analysis of Amino Acid: Derivatisation With Fluorescamine Reagent.</a> Microchem. J. , (2015).</li><li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Dennis, G. R., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parallel+segmented+flow+chromatography+columns+with+multiplexed+detection:+An+illustration+using+antioxidant+screening+of+natural+products.">Parallel segmented flow chromatography columns with multiplexed detection: An illustration using antioxidant screening of natural products.</a> Microchem. J. 110, 726-730 (2013).</li><li>Koleva, I. I., Niederlander, H. A. G., van Beek, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+On-Line+HPLC+Method+for+Detection+of+Radical+Scavenging+Compounds+in+Complex+Mixtures.">An On-Line HPLC Method for Detection of Radical Scavenging Compounds in Complex Mixtures.</a> Anal Chem. 72, 2323-2328 (2000).</li><li>Selim, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Two-component+Post-column+Derivatisation+Method+Utilsing+Reaction+Flow+Chromatography.">A Two-component Post-column Derivatisation Method Utilsing Reaction Flow Chromatography.</a> Microchem. J. 116, 87-91 (2014).</li><li>Bigley, F. P., Grob, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+Phenols+in+Water+and+Wastewater+by+Post-column+Reaction+Detection+High-performance+Liquid+Chromatography.">Determination of Phenols in Water and Wastewater by Post-column Reaction Detection High-performance Liquid Chromatography.</a> J. Chromatogr. A. 350, 407-416 (1985).</li><li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Dennis, G. R., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reaction+flow+chromatography+for+rapid+post+column+derivatisations:+The+analysis+of+antioxidants+in+natural+products.">Reaction flow chromatography for rapid post column derivatisations: The analysis of antioxidants in natural products.</a> J. Chromatogr. A. 1303, 62-65 (2013).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

RF-PCD permite la mezcla eficiente del reactivo de derivatización con el efluente después de la columna de HPLC sin el uso de bobinas de reacción, reduciendo al mínimo los efectos de ensanchamiento de las bandas y la mejora de rendimiento de la separación. métodos RF-PCD también han demostrado mejoras en la respuesta de la señal con respecto al método de detección. Camenzuli et al. 28 fue el primero en reportar el uso de columnas de flujo de reacción con DPPH • para la detecci...

cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) acoplada con la columna posterior derivatización (DCP) es una poderosa herramienta que es útil para resolver una serie de problemas en el laboratorio de análisis. Se puede utilizar para detectar compuestos que son de otro modo indetectable con la suite de detectores disponibles 1,2, aumentar la señal del analito diana, lo que permite límites inferiores de detección y cuantificación 3-5 o selectivamente derivatizar un analito diana a fin de evitar 6 efectos de la matriz. Reacciones de PCD comúnmente usados ​​incluyen la reacción de aminas, tales como aminoácidos, con orto-phthaladehyde 7-9, ninhidrina 9,10 o fluorescamina 11,12, la derivatización de las especies reactivas de oxígeno (ROS) con el 2,2-difenil- 1-picrylhydrazil radicales DPPH (•) o 13,14 2,2&#39;-azino-bis (ácido 3-etilbenzotiazolina-6-sulfónico (ABTS) 15,16, y el uso del reactivo de yoduro-azida para derivatizar azufre ccompuestos ontaining 17,18. Hay, sin embargo, numerosos inconvenientes a la utilización de reacciones de PCD con sistemas de HPLC 6. Principalmente entre estos es el uso de bobinas de reacción entre el punto de adición del reactivo de derivatización (s) y el detector, que permiten tiempo para la mezcla y la reacción se produzca 8. Estos bucles de reacción a menudo tienen volúmenes de 500 l o más, lo que es significativo en comparación con el volumen del resto del sistema de HPLC 19. El uso de estos reacción alto volumen bucles de resultados en el aumento ensanchamiento de los picos en comparación con lo que se observaría sin la presencia del bucle de reacción. Esto se traduce en más cortos picos más amplios, que tienen límites más altos de cuantificación y detección y negativamente los efectos que la resolución cromatográfica. Las figuras 1 y 2 destacan el deterioro de la forma de los picos que resultan de la adición de varios volúmenes de bucle de reacción post columna. Este análisisse realizó con una composición de fase móvil de 94% de metanol y 6% de agua Milli-Q. La velocidad de flujo de la fase móvil fue de 1 ml / min, el volumen de inyección fue de 20 l y la longitud de onda análisis fue 265 nm. Las bobinas de diferentes volúmenes muertos de 20 l a 1000 l se insertaron entre la columna y el detector para simular los efectos de bucle de reacción volumen muerto en los métodos de PCD. Estos bucles se prepararon a partir de tubo de acero inoxidable de diámetro interno 0,5 mm. El experimento se realizó en un sistema HPLC que consta de un controlador (SCL-10AVP), una baja presión del gradiente de la válvula (FCL-10ALVP), una bomba (LC-20AD), un inyector (SIL-10ADvp), y un detector de PDA ( SPD-M10ADVP). La fase móvil se bombea a través de un desgasificador antes de la introducción en el sistema de HPLC. La separación se realizó usando un identificador de 5 micras columna de 250 mm x 4,6 mm. Las condiciones experimentales fueron elegidos para ser típica de las reacciones de PCD que recientemente han sido publicados en la literatura. losmás simple, la configuración más común de post reactor de columna se denomina un reactor tubular no segmentado que es efectivamente un tubo largo y delgado a través del cual el líquido puede fluir y la reacción puede tener lugar. En este pico del sistema ensanchamiento depende no sólo el volumen muerto añadido al sistema, sino también el diámetro interior del tubo como se destaca por Iijima et al. 8. Por otra parte, la geometría de la bobina juega un papel importante en la ampliación de la marca observada. Stewart 20 declaró que bobinado del reactor cambia los perfiles de flujo secundarias, lo que resulta en un mejor mezclado, lo que significa que el volumen muerto puede ser minimizado. Se ha dicho que ensanchamiento de los picos no es significativa cuando se utiliza un punto tubular abierta bobina 21. Cuando el ensanchamiento de los picos es excesivamente grande, otros tipos de reactores también pueden ser considerados 20,22. Estos pueden incluir reactores de lecho o reactores de flujo segmentados. Estos reactores son particularmente útiles para reacciones lentas que de otro modo requirbucles e gran reacción. Como reactores tubulares no segmentados son los tipos más comunes de los reactores utilizados en aplicaciones de PCD, el resto de este artículo trata con este tipo de configuración del reactor. El diseño de la columna de flujo de reacción (RF) incorpora un accesorio en el extremo de varios puertos que permite a la fase móvil para salir (o entrar) la columna a través de un puerto único situado en la región central radial de la columna o tres puertos situados en el exterior región de la pared de la columna (véase la Figura 3). Estas dos corrientes se separan usando un accesorio en el extremo que contiene una frita porosa central que está rodeado por un anillo impermeable que está a su vez rodeado por una frita de vidrio poroso exterior que se extiende a la pared de la columna. Debido al flujo transversal anillo impermeable central no es posible entre las dos regiones porosas. Durante cromatografía de flujo de reacción, el reactivo (s) de derivatización se bombea contra la dirección de flujo de la fase móvil en una o two de los puertos exteriores de la columna el flujo de reacción. El eluyente de la columna se mezcla con el reactivo (s) de derivatización en la frita exterior y se pasa al detector a través de un puerto exterior libre. flujo de reacción se puede utilizar ya sea para una derivatización solo reactivo (1 puerto para el reactivo de derivatización, 1 puerto para pasar el eluyente de la columna al detector y 1 puerto bloqueado) o un sistema de reactivos dual (2 puertos para los reactivos de derivatización y 1 puerto para pasar el eluyente de la columna al detector). El flujo de la corriente central o bien se puede utilizar para detectar el eluyente de la columna no derivatizado, con eficacia de detección de multiplexación 23, o pasado a los residuos. Una de las principales técnica de sintonización que está disponible cuando se ejecuta la cromatografía de RF-PCD es la relación de los flujos central y periférico. La relación óptima para cada derivatización depende de una serie de factores tales como si se detecta o se pasa a perder el flujo central. Por lo tanto una vez que la relación óptima se ha determinado, Se debe asegurar que la relación de flujo correcta se consigue antes de cada carrera se realiza. Se ha encontrado que el uso de una frita para mezclar la corriente de la columna de eluyente y el reactivo de derivatización en los resultados de RF-PCD en una mezcla más eficiente en comparación con técnicas de mezcla tradicionales que emplean típicamente un volumen muerto cero pieza en T o de bajo volumen muerto W- pieza a mezclar las dos corrientes. Esto ha permitido el uso de bucles de reacción relativamente pequeñas, o incluso la eliminación de la del circuito de reacción en conjunto. La reducción de los resultados de la reacción de tamaño de bucle en picos más agudos en comparación con los métodos tradicionales de derivatización post-columna. Esto significa que, a pesar del hecho de que no todo el eluyente de la columna se derivatiza, una mayor relación señal-ruido se observan y por lo tanto los límites inferiores de detección y cuantificación se puede lograr. cromatografía de flujo de reacción se ha desarrollado para superar las dificultades con la adaptación de la reacción PCDs a modernas columnas de HPLC y los sistemas, en particular la pérdida de eficacia provocada por banda ensanchamiento debido a las grandes columnas poste volúmenes muertos causados ​​por la necesidad de emplear bucles de reacción de gran volumen. Los procesos de mezcla más eficientes en RF-PCD en comparación con PCD convencionales significan que los volúmenes de bucle de reacción más pequeño se pueden emplear conduce a un aumento de la eficacia de separación observada. Además cromatografía RF-PCD muestra tanto el aumento de la señal y el ruido disminuyó en comparación con las técnicas convencionales de PCD que resulta en límites inferiores de detección y cuantificación en comparación con los métodos convencionales de PCD. Una ventaja adicional de RF-PCD comparación con los métodos convencionales de PCD es la capacidad de controlar la corriente no derivatizado que eluye desde el puerto central de la columna de la RF, así como la corriente de derivatizado que eluye de la región periférica de la columna. RF-PCD es una forma relativamente nueva pero prometedora técnica que muestra muchas ventajas sobre los métodos tradicionales de PCD. <p class="jove_content"&gt; Conexión de la columna de RF se consigue en casi la misma forma que una columna de HPLC convencional con la principal diferencia es el número de accesorios de los extremos en una columna de RF. Accesorios utilizados para conectar una columna de HPLC estándar para el sistema de HPLC son capaces de ser utilizado para conectar una columna de RF al sistema de HPLC.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>HPLC instrument</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>1290 Series HPLC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Additional Pump(s) for derivatisation system</td>
			<td>Shimadzu</td>
			<td>LC-20A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RF colum</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Non-commercial</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PEEK tubing</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Z227307</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Column stoppers</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Provided with column</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PEEK tube cutter</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Z290882</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analytical Scale Balance</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>4-point analytical balance</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stop watch</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Non-Scientific equiptment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eluent collection vials</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Any Small vial with a flat bottom will do e.g. HPLC vials</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HPLC Vials</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Will depend on instrument used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vessels for mobile phase and derivatisation solution(s)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Z232211</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>General Laboratory glassware</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Volumetric Flasks, pippettes, etc. Quantity and volumes will depend on sample preparation method</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>34860</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPPH</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D9132</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium Acetate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>17836</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonia</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>320145</td>
			<td>Corrosive</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetonitrile</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>34998</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescamine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F9015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-aminoantipyrene&#160;</td>
			<td>Acros Organics BVBA</td>
			<td>AC103151000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium ferricyanide&#160;</td>
			<td>AnalaR</td>
			<td>B10204-30</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

post column derivatization using reaction flow high performance liquid chromatography columns

A protocol for the use of reaction flow high performance liquid chromatography columns for methods employing post column derivatization (PCD) is presented. A major difficulty in adapting PCD to modern HPLC systems and columns is the need for large volume reaction coils that enable reagent mixing and then the derivatization reaction to take place. This large post column dead volume leads to band broadening, which results in a loss of observed separation efficiency and indeed detection in sensitivity. In reaction flow post column derivatization (RF-PCD) the derivatization reagent(s) are pumped against the flow of mobile phase into either one or two of the outer ports of the reaction flow column where it is mixed with column effluent inside a frit housed within the column end fitting. This technique allows for more efficient mixing of the column effluent and derivatization reagent(s) meaning that the volume of the reaction loops can be minimized or even eliminated altogether. It has been found that RF-PCD methods perform better than conventional PCD methods in terms of observed separation efficiency and signal to noise ratio. A further advantage of RF-PCD techniques is the ability to monitor effluent coming from the central port in its underivatized state. RF-PCD has currently been trialed on a relatively small range of post column reactions, however, there is currently no reason to suggest that RF-PCD could not be adapted to any existing one or two component (as long as both reagents are added at the same time) post column derivatization reaction.

El primer método PCD que fue adaptado para su uso por RF-PCD fue la derivación de antioxidantes utilizando el radical 2,2-difenil-1-picrylhydrazil (DPPH •) 24. Esta reacción se introdujo por Koleva et al. 25 y se ha utilizado ampliamente desde entonces. La detección se basa en la decoloración del DPPH • radical en presencia de especies reactivas del oxígeno, por lo tanto, la presencia de los resultados de los antioxidantes en una caída en la absorbancia obs...

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Post Column Derivatization Using Reaction Flow High Performance Liquid Chromatography Columns

A protocol for the use of reaction flow high performance liquid chromatography columns for methods employing post column derivatization (PCD) is presented.

Columna posterior derivatización usando la reacción en columnas de flujo Cromatografía Líquida de Alta

A protocol for the use of reaction flow high performance liquid chromatography columns for methods employing post column derivatization (PCD) is ...

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14.9K vistas.  University of Western Sydney. A protocol for the use of reaction flow high performance liquid chromatography columns for methods employing post column derivatization (PCD) is presented.

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Large Scale Non-targeted Metabolomic Profiling of Serum by Ultra Performance Liquid Chromatography-Mass Spectrometry (UPLC-MS)

Non-targeted metabolite profiling by ultra performance liquid chromatography coupled with mass spectrometry (UPLC-MS) is a powerful technique to investigate metabolism. The approach offers an unbiased and in-depth analysis that can enable the development of diagnostic tests, novel therapies, and further our understanding of disease processes. The inherent chemical diversity of the metabolome creates significant analytical challenges and there is no single experimental approach that can detect all metabolites. Additionally, the biological variation in individual metabolism and the dependence of metabolism on environmental factors necessitates large sample numbers to achieve the appropriate statistical power required for meaningful biological interpretation. To address these challenges, this tutorial outlines an analytical workflow for large scale non-targeted metabolite profiling of serum by UPLC-MS. The procedure includes guidelines for sample organization and preparation, data acquisition, quality control, and metabolite identification and will enable reliable acquisition of data for large experiments and provide a starting point for laboratories new to non-targeted metabolite profiling by UPLC-MS.

Large Scale Non-targeted Metabolomic Profiling of Serum by Ultra Performance Liquid Chromatography-Mass Spectrometry UPLC-MS

Non-targeted metabolite profiling by ultra performance liquid chromatography coupled with mass spectrometry (UPLC-MS) is a powerful technique to investigate metabolism. This article outlines a typical workflow utilized for non-targeted metabolite profiling of serum including sample organization and preparation, data acquisition, data analysis, quality control, and metabolite identification.

A gran escala que no son objeto de perfiles metabolómicos de Serum Ultra Performance Liquid Chromatography-espectrometría de masas (UPLC-MS)

Non-targeted metabolite profiling by ultra performance liquid chromatography coupled with mass spectrometry (UPLC-MS) is a powerful technique to ...

Investigación

Química

Untargeted Metabolomics from Biological Sources Using Ultraperformance Liquid Chromatography-High Resolution Mass Spectrometry (UPLC-HRMS)

Here we present a workflow to analyze the metabolic profiles for biological samples of interest including; cells, serum, or tissue. The sample is first separated into polar and non-polar fractions by a liquid-liquid phase extraction, and partially purified to facilitate downstream analysis. Both aqueous (polar metabolites) and organic (non-polar metabolites) phases of the initial extraction are processed to survey a broad range of metabolites. Metabolites are separated by different liquid chromatography methods based upon their partition properties. In this method, we present microflow ultra-performance (UP)LC methods, but the protocol is scalable to higher flows and lower pressures. Introduction into the mass spectrometer can be through either general or compound optimized source conditions. Detection of a broad range of ions is carried out in full scan mode in both positive and negative mode over a broad m/z range using high resolution on a recently calibrated instrument. Label-free differential analysis is carried out on bioinformatics platforms. Applications of this approach include metabolic pathway screening, biomarker discovery, and drug development.

Untargeted Metabolomics from Biological Sources Using Ultraperformance Liquid Chromatography-High Resolution Mass Spectrometry UPLC-HRMS

Untargeted metabolomics provides a hypothesis generating snapshot of a metabolic profile. This protocol will demonstrate the extraction and analysis of metabolites from cells, serum, or tissue. A range of metabolites are surveyed using liquid-liquid phase extraction, microflow ultraperformance liquid chromatography/high-resolution mass spectrometry (UPLC-HRMS) coupled to differential analysis software.

Metabolómica no focalizados de fuentes biológicas Uso UltraPerformance cromatografía líquida-espectrometría de masas de alta resolución (UPLC-HRMS)

Here we present a workflow to analyze the metabolic profiles for biological samples of interest including; cells, serum, or tissue. The sample is first ...

Isolation and Preparation of Bacterial Cell Walls for Compositional Analysis by Ultra Performance Liquid Chromatography

The bacterial cell wall is critical for the determination of cell shape during growth and division, and maintains the mechanical integrity of cells in the face of turgor pressures several atmospheres in magnitude. Across the diverse shapes and sizes of the bacterial kingdom, the cell wall is composed of peptidoglycan, a macromolecular network of sugar strands crosslinked by short peptides. Peptidoglycan&#8217;s central importance to bacterial physiology underlies its use as an antibiotic target and has motivated genetic, structural, and cell biological studies of how it is robustly assembled during growth and division. Nonetheless, extensive investigations are still required to fully characterize the key enzymatic activities in peptidoglycan synthesis and the chemical composition of bacterial cell walls. High Performance Liquid Chromatography (HPLC) is a powerful analytical method for quantifying differences in the chemical composition of the walls of bacteria grown under a variety of environmental and genetic conditions, but its throughput is often limited. Here, we present a straightforward procedure for the isolation and preparation of bacterial cell walls for biological analyses of peptidoglycan via HPLC and Ultra Performance Liquid Chromatography (UPLC), an extension of HPLC that utilizes pumps to deliver ultra-high pressures of up to 15,000 psi, compared with 6,000 psi for HPLC. In combination with the preparation of bacterial cell walls presented here, the low-volume sample injectors, detectors with high sampling rates, smaller sample volumes, and shorter run times of UPLC will enable high resolution and throughput for novel discoveries of peptidoglycan composition and fundamental bacterial cell biology in most biological laboratories with access to an ultracentrifuge and UPLC.

The bacterial cell wall is composed of peptidoglycan, a macromolecular network of sugar strands crosslinked by peptides. Ultra Performance Liquid Chromatography provides high resolution and throughput for novel discoveries of peptidoglycan composition. We present a procedure for the isolation of cell walls (sacculi) and their subsequent preparation for analysis via UPLC.

Aislamiento Y Preparación De Paredes Celulares Bacterianas Para El Análisis Compositiva Por Cromatografía Líquida De Ultra Rendimiento

The bacterial cell wall is critical for the determination of cell shape during growth and division, and maintains the mechanical integrity of cells in the ...

Tuning a Parallel Segmented Flow Column and Enabling Multiplexed Detection

Active flow technology (AFT) is new form of column technology that was designed to overcome flow heterogeneity to increase separation performance in terms of efficiency and sensitivity and to enable multiplexed detection. This form of AFT uses a parallel segmented flow (PSF) column. A PSF column outlet end-fitting consists of 2 or 4 ports, which can be multiplexed to connect up to 4 detectors. The PSF column not only allows a platform for multiplexed detection but also the combination of both destructive and non-destructive detectors, without additional dead volume tubing, simultaneously. The amount of flow through each port can also be adjusted through pressure management to suit the requirements of a specific detector(s). To achieve multiplexed detection using a PSF column there are a number of parameters which can be controlled to ensure optimal separation performance and quality of results; that is tube dimensions for each port, choice of port for each type of detector and flow adjustment. This protocol is intended to show how to use and tune a PSF column functioning in a multiplexed mode of detection.

Here, we present a protocol for the operation and tuning of parallel segmented flow chromatography columns to enable multiplexed detection.

Puesta a punto del paralelo Columna de flujo segmentado y habilitación de detección de multiplexado

Active flow technology (AFT) is new form of column technology that was designed to overcome flow heterogeneity to increase separation performance in terms ...

Curtain Flow Column: Optimization of Efficiency and Sensitivity

Active Flow Technology (AFT) is a form of column technology that increases the separation performance of a HPLC column through the use of a specially purpose built multiport end-fitting(s). Curtain Flow (CF) columns belong to the AFT suite of columns, specifically the CF column is designed so that the sample is injected into the radial central region of the bed and a curtain flow of mobile phase surrounding the injection of solute prevents the radial dispersion of the sample to the wall. The column functions as an 'infinite diameter' column. The purpose of the design is to overcome the radial heterogeneity of the column bed, and at the same time maximize the sample load into the radial central region of the column bed, which serves to increase detection sensitivity. The protocol described herein outlines the system and CF column set up and the tuning process for an optimized infinite diameter 'virtual' column.

Here, we present a protocol for the operation and optimization of Active Flow Technology (AFT) column in Curtain flow (CF) mode for enhanced separation performance.

Cortina Columna de flujo: optimización de la eficiencia y sensibilidad

Active Flow Technology (AFT) is a form of column technology that increases the separation performance of a HPLC column through the use of a specially ...

Radiolabeling and Quantification of Cellular Levels of Phosphoinositides by High Performance Liquid Chromatography-coupled Flow Scintillation

Phosphoinositides (PtdInsPs) are essential signaling lipids responsible for recruiting specific effectors and conferring organelles with molecular identity and function. Each of the seven PtdInsPs varies in their distribution and abundance, which are tightly regulated by specific kinases and phosphatases. The abundance of PtdInsPs can change abruptly in response to various signaling events or disturbance of the regulatory machinery. To understand how these events lead to changes in the amount of PtdInsPs and their resulting impact, it is important to quantify PtdInsP levels before and after a signaling event or between control and abnormal conditions. However, due to their low abundance and similarity, quantifying the relative amounts of each PtdInsP can be challenging. This article describes a method for quantifying PtdInsP levels by metabolically labeling cells with 3H-myo-inositol, which is incorporated into PtdInsPs. Phospholipids are then precipitated and deacylated. The resulting soluble 3H-glycero-inositides are further extracted, separated by high-performance liquid chromatography (HPLC), and detected by flow scintillation. The labeling and processing of yeast samples is described in detail, as well as the instrumental setup for the HPLC and flow scintillator. Despite losing structural information regarding acyl chain content, this method is sensitive and can be optimized to concurrently quantify all seven PtdInsPs in cells.

Phosphoinositides are signaling lipids whose relative abundance rapidly changes in response to various stimuli. This article describes a method to measure the abundance of phosphoinositides by metabolically labeling cells with 3H-myo-inositol, followed by extraction and deacylation. Extracted glycero-inositides are then separated by high-performance liquid chromatography and quantified by flow scintillation.

El radiomarcado y cuantificación de los niveles celulares de Fosfoinosítidos por acoplado a cromatografía líquida de alto rendimiento de flujo de centelleo

Phosphoinositides (PtdInsPs) are essential signaling lipids responsible for recruiting specific effectors and conferring organelles with molecular ...

Synthesis of Programmable Main-chain Liquid-crystalline Elastomers Using a Two-stage Thiol-acrylate Reaction

This study presents a novel two-stage thiol-acrylate Michael addition-photopolymerization (TAMAP) reaction to prepare main-chain liquid-crystalline elastomers (LCEs) with facile control over network structure and programming of an aligned monodomain. Tailored LCE networks were synthesized using routine mixing of commercially available starting materials and pouring monomer solutions into molds to cure. An initial polydomain LCE network is formed via a self-limiting thiol-acrylate Michael-addition reaction. Strain-to-failure and glass transition behavior were investigated as a function of crosslinking monomer, pentaerythritol tetrakis(3-mercaptopropionate) (PETMP). An example non-stoichiometric system of 15 mol% PETMP thiol groups and an excess of 15 mol% acrylate groups was used to demonstrate the robust nature of the material. The LCE formed an aligned and transparent monodomain when stretched, with a maximum failure strain over 600%. Stretched LCE samples were able to demonstrate both stress-driven thermal actuation when held under a constant bias stress or the shape-memory effect when stretched and unloaded. A permanently programmed monodomain was achieved via a second-stage photopolymerization reaction of the excess acrylate groups when the sample was in the stretched state. LCE samples were photo-cured and programmed at 100%, 200%, 300%, and 400% strain, with all samples demonstrating over 90% shape fixity when unloaded. The magnitude of total stress-free actuation increased from 35% to 115% with increased programming strain. Overall, the two-stage TAMAP methodology is presented as a powerful tool to prepare main-chain LCE systems and explore structure-property-performance relationships in these fascinating stimuli-sensitive materials.

A novel methodology is presented to synthesize and program main-chain liquid-crystalline elastomers using commercially available starting monomers. A wide range of thermomechanical properties was tailored by adjusting the amount of crosslinker, while the actuation performance was dependent on the amount of applied strain during programming.

Síntesis de programable principal cadena Elastómeros líquido-cristalinas utilizando una reacción de tiol-acrilato de dos etapas

This study presents a novel two-stage thiol-acrylate Michael addition-photopolymerization (TAMAP) reaction to prepare main-chain liquid-crystalline ...

A Straightforward Method for Glucosinolate Extraction and Analysis with High-pressure Liquid Chromatography (HPLC)

Glucosinolates are a well-studied and highly diverse class of natural plant compounds. They play important roles in plant resistance, rapeseed oil quality, food flavoring, and human health. The biological activity of glucosinolates is released upon tissue damage, when they are mixed with the enzyme myrosinase. This results in the formation of pungent and toxic breakdown products, such as isothiocyanates and nitriles. Currently, more than 130 structurally different glucosinolates have been identified. The chemical structure of the glucosinolate is an important determinant of the product that is formed, which in turn determines its biological activity. The latter may range from detrimental (e.g., progoitrin) to beneficial (e.g., glucoraphanin). Each glucosinolate-containing plant species has its own specific glucosinolate profile. For this reason, it is important to correctly identify and reliably quantify the different glucosinolates present in brassicaceous leaf, seed, and root crops or, for ecological studies, in their wild relatives. Here, we present a well-validated, targeted, and robust method to analyze glucosinolate profiles in a wide range of plant species and plant organs. Intact glucosinolates are extracted from ground plant materials with a methanol-water mixture at high temperatures to disable myrosinase activity. Thereafter, the resulting extract is brought onto an ion-exchange column for purification. After sulfatase treatment, the desulfoglucosinolates are eluted with water and the eluate is freeze-dried. The residue is taken up in an exact volume of water, which is analyzed by high-pressure liquid chromatography (HPLC) with a photodiode array (PDA) or ultraviolet (UV) detector. Detection and quantification are achieved by conducting comparisons of the retention times and UV spectra of commercial reference standards. The concentrations are calculated based on a sinigrin reference curve and well-established response factors. The advantages and disadvantages of this straightforward method, when compared to faster and more technologically advanced methods, are discussed here.

A Straightforward Method for Glucosinolate Extraction and Analysis with High-pressure Liquid Chromatography HPLC

Here, we describe in great detail an established and robust protocol for the extraction of glucosinolates from ground plant materials. After an on-column sulfatase treatment of the extracts, the desulfoglucosinolates are eluted and analyzed by high-pressure liquid chromatography.

Un método sencillo para glucosinolatos Extracción y análisis de alta presión con cromatografía líquida (HPLC)

Glucosinolates are a well-studied and highly diverse class of natural plant compounds. They play important roles in plant resistance, rapeseed oil ...

A Convenient Method for Extraction and Analysis with High-Pressure Liquid Chromatography of Catecholamine Neurotransmitters and Their Metabolites

The extraction and analysis of catecholamine neurotransmitters in biological fluids is of great importance in assessing nervous system function and related diseases, but their precise measurement is still a challenge. Many protocols have been described for neurotransmitter measurement by a variety of instruments, including high-pressure liquid chromatography (HPLC). However, there are shortcomings, such as complicated operation or hard-to-detect multiple targets, which cannot be avoided, and presently, the dominant analysis technique is still HPLC coupled with sensitive electrochemical or fluorimetric detection, due to its high sensitivity and good selectivity. Here, a detailed protocol is described for the pretreatment and detection of catecholamines with high pressure liquid chromatography with electrochemical detection (HPLC-ECD) in real urine samples of infants, using electrospun composite nanofibers composed of polymeric crown ether with polystyrene as adsorbent, also known as the packed-fiber solid phase extraction (PFSPE) method. We show how urine samples can be easily precleaned by a nanofiber-packed solid phase column, and how the analytes in the sample can be rapidly enriched, desorbed, and detected on an ECD system. PFSPE greatly simplifies the pretreatment procedures for biological samples, allowing for decreased time, expense, and reduction of the loss of targets. 
Overall, this work illustrates a simple and convenient protocol for solid-phase extraction coupled to an HPLC-ECD system for simultaneous determination of three monoamine neurotransmitters (norepinephrine (NE), epinephrine (E), dopamine (DA)) and two of their metabolites (3-methoxy-4-hydroxyphenylglycol (MHPG) and 3,4-dihydroxy-phenylacetic acid (DOPAC)) in infants' urine. The established protocol was applied to assess the differences of urinary catecholamines and their metabolites between high-risk infants with perinatal brain damage and healthy controls. Comparative analysis revealed a significant difference in urinary MHPG between the two groups, indicating that the catecholamine metabolites may be an important candidate marker for early diagnosis of cases at risk for brain damage in infants.

We present a convenient solid-phase extraction coupled to high-pressure liquid chromatography (HPLC) with electrochemical detection (ECD) for simultaneous determination of three monoamine neurotransmitters and two of their metabolites in infants' urine. We also identify the metabolite MHPG as a potential biomarker for the early diagnosis of brain damage for infants.

Un método conveniente para la extracción y análisis con cromatografía líquida de alta presión de los neurotransmisores catecolaminas y sus metabolitos

The extraction and analysis of catecholamine neurotransmitters in biological fluids is of great importance in assessing nervous system function and ...

Continuous Flow Chemistry: Reaction of Diphenyldiazomethane with p-Nitrobenzoic Acid

Continuous flow technology has been identified as instrumental for its environmental and economic advantages leveraging superior mixing, heat transfer and cost savings through the &#34;scaling out&#34; strategy as opposed to the traditional &#34;scaling up&#34;. Herein, we report the reaction of diphenyldiazomethane with p-nitrobenzoic acid in both batch and flow modes. To effectively transfer the reaction from batch to flow mode, it is essential to first conduct the reaction in batch. As a consequence, the reaction of diphenyldiazomethane was first studied in batch as a function of temperature, reaction time, and concentration to obtain kinetic information and process parameters. The glass flow reactor set-up is described and combines two types of reaction modules with &#34;mixing&#34; and &#34;linear&#34; microstructures. Finally, the reaction of diphenyldiazomethane with p-nitrobenzoic acid was successfully conducted in the flow reactor, with up to 95% conversion of the diphenyldiazomethane in 11 min. This proof of concept reaction aims to provide insight for scientists to consider flow technology&#39;s competitiveness, sustainability, and versatility in their research.

Continuous Flow Chemistry: Reaction of Diphenyldiazomethane with p-Nitrobenzoic Acid

Flow chemistry carries environmental and economic advantages by leveraging superior mixing, heat transfer and cost benefits. Herein, we provide a blueprint to transfer chemical processes from batch to flow mode. The reaction of diphenyldiazomethane (DDM) with p-nitrobenzoic acid, conducted in batch and flow, was chosen for proof of concept.

Química en flujo continuo: Reacción de Diphenyldiazomethane con p- nitrobenzoico ácido

Continuous flow technology has been identified as instrumental for its environmental and economic advantages leveraging superior mixing, heat transfer and ...