Este trabajo fue apoyado por la Fundación británica del corazón (PG/13/60/30406) y la Universidad de Birmingham.

Todos los procedimientos animales fueron aprobados por el órgano de examen ético de bienestar de Animal y el Ministerio del interior de Reino Unido (Reino Unido, proyecto licencia 40/3745). Se utilizan ratones C57BL/6 fondo, 8-12 semana de edad, 19-25 g de peso de cuerpo, de ambos sexos.
1. animal anestesia
<ol>
	<li>Coloque el ratón en una cámara de inducción e inducir anestesia por una mezcla de 5% isoflurano con oxígeno al 100%. Uso de un caudal de 0,5 litros por minuto espere hasta que el ratón totalmente detiene y su frecuencia de la respiración llega a ser raro.</li>
	<li>Quite el ratón de la cámara y afeitar el abdomen con una maquinilla eléctrica. Eliminar el vello del abdomen lo mejor posible para evitar la contaminación de la cavidad abdominal.</li>
	<li>Colocar el ratón en la posición supina y nariz de ratón en un cono de vinculado al sistema de anestesia. Disminuir el porcentaje de isoflurano al 2-3% (el porcentaje exacto puede ser ligeramente diferente de animal a animal). Asegúrese de que el animal está durmiendo con su frecuencia respiratoria inferior a la habitual pero evita jadear. Caso de jadeo, disminuir el % de isoflurano en 0.5%.
	<ol>
		<li>Comprobar el reflejo pedal para confirmar adecuada anestesia y cirugía sólo si es negativo. Aplique ungüento veterinario en los ojos para evitar la sequedad.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Aplique una solución anti bactericida (1% Hibitane) el ratón abdomen y limpie la zona con un algodón estéril bud una manera excluyendo a potencial de contaminación del sitio quirúrgico (por ejemplo, adentro hacia fuera en forma circular). Repita 3 veces.</li>
</ol>
2. aplicación de la estenosis de la vena cava inferior y la recuperación de ratón
Nota: Todos los instrumentos, así como materiales (algodón, gasa, solución salina etc.) entrar en contacto con el área de cirugía debe ser estéril. El operador debe limpiar antes de la cirugía y usar guantes estériles y bata durante el procedimiento. Manijas de microscopio se deben envolver en un papel de aluminio estéril.
<ol>
	<li>Dar ratones un tratamiento de lucha contra el dolor antes de la cirugía y durante todo el período experimental. Por ejemplo, utilizar buprenorfina 0.1 mg/kg por vía subcutánea 30 min antes de la cirugía y luego cada 12 horas hasta que el animal es eutanasia. Como trombosis en este método se desarrolla de manera similar a los inflamación estéril, evitar el uso de fármacos antiinflamatorios como una premedicación.</li>
	<li>Cubre el ratón con un paño estéril y hacer un agujero en el paño para exponer el sitio de la cirugía. Con unas tijeras, hacer una incisión a lo largo de la línea media abdominal, 1,5 cm hacia abajo del esternón. Con bastoncillos de algodón exteriorizar los intestinos a la izquierda del ratón y cubrir con gasas estériles empapadas en solución salina caliente (37 ° C) para evitar la deshidratación.</li>
	<li>Identificar la vena cava inferior y sus ramas laterales (puede ser 0, 1 o 2 de ellos) en dirección caudal en el sitio de fusión de la vena cava inferior con la vena renal izquierda. Ligar las ramas de lado visible con inertes suturas 7-0 Prolene como cerca de la vena cava inferior como sea posible.
	<ol>
		<li>No intente sujetar las ramas laterales con las pinzas directamente sino más bien tirón hacia arriba sosteniendo el tejido adiposo que los rodean con unas pinzas en una mano y hacen un túnel bajo la rama con el fórceps en la otra mano. No cierre posteriores ramas.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Sostiene los tejidos circundantes con pinzas, tire de la IVC para arriba y la izquierda produciendo tensión en el área pequeña entre la vena cava inferior y la aorta exactamente en el ángulo entre la vena cava inferior y la vena renal izquierda. Tener en cuenta que es prácticamente imposible separar la aorta de la vena cava inferior incluso 2-3 mm por debajo (en la dirección caudal).</li>
	<li>Utilizando movimientos divergentes con las puntas de la pinza en su mano derecha hace un agujero entre la aorta y la vena cava inferior. Tenga en cuenta que los movimientos más realizado, mayor será la posibilidad de dañar la nave. Lo ideal es tratar de minimizar el número de movimientos a 3-5.</li>
	<li>Preparar una pieza de inerte sutura de Prolene 7-0 de unos 2 cm de largo. Colocar en la cavidad peritoneal del ratón en el lado izquierdo del operador en la proximidad a la vena cava inferior.</li>
	<li>Tire de la vena cava inferior izquierda y hasta otra vez. Inserte sus extremidades de la pinza derecha en el agujero entre la aorta y la vena cava inferior para que aparezcan las puntas en el otro lado de la vena cava inferior. Toma la sutura y tire hacia atrás a través del orificio (figura 3A).</li>
	<li>Hacer un nudo provisional con la sutura pero no la cierre. Coloque la aguja 30G ("espaciador") doblada como un gancho en el nudo y ahora cierre (figura 3B).</li>
	<li>Retire al espaciador (figura 3C).</li>
	<li>Regresar los intestinos hacia la cavidad peritoneal con un algodón bud y distribuyen igualmente en él.</li>
	<li>Cerrar peritoneo con una sutura de vicryl 6-0 utilizando circuitos continuos. Cierre los lazos y como un nudo.</li>
	<li>Piel cercana mediante grapas metálicas.</li>
	<li>Inyectar el ratón con 0.5 mL de caliente (37 ° C) solución salina de glucosa por vía subcutánea para restablecer el equilibrio líquido del organismo.</li>
	<li>Coloque el ratón en una jaula individual en una habitación o cámara caliente (25 ° C) y poner comida y agua dentro de la jaula del gel. Observar hasta que el ratón es recuperado (por lo general, alrededor de 1 h).</li>
</ol>

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A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+venous+thrombus+resolution+in+plasminogen+activator+inhibitor+type-2+deficient+mice.">Enhanced venous thrombus resolution in plasminogen activator inhibitor type-2 deficient mice.</a> J Thromb Haemost. 12 (10), 1706-1716 (2014).</li><li>Schulz, C., Engelmann, B., Massberg, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crossroads+of+coagulation+and+innate+immunity:+the+case+of+deep+vein+thrombosis.">Crossroads of coagulation and innate immunity: the case of deep vein thrombosis.</a> J Thromb Haemost. 11, 233-241 (2013).</li><li>Day, S. 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A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+electrolytic+inferior+vena+cava+model+(EIM)+to+study+thrombogenesis+and+thrombus+resolution+with+continuous+blood+flow+in+the+mouse.">The electrolytic inferior vena cava model (EIM) to study thrombogenesis and thrombus resolution with continuous blood flow in the mouse.</a> Thromb Haemost. 109 (6), 1158-1169 (2013).</li><li>Brill, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extrahepatic+high-density+lipoprotein+receptor+SR-BI+and+apoA-I+protect+against+deep+vein+thrombosis+in+mice.">Extrahepatic high-density lipoprotein receptor SR-BI and apoA-I protect against deep vein thrombosis in mice.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 32 (8), 1841-1847 (2012).</li><li>Diaz, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+review+of+mouse+models+of+venous+thrombosis.">Critical review of mouse models of venous thrombosis.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 32 (3), 556-562 (2012).</li><li>Brandt, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deep+vein+thrombus+formation+induced+by+flow+reduction+in+mice+is+determined+by+venous+side+branches.">Deep vein thrombus formation induced by flow reduction in mice is determined by venous side branches.</a> Clin Hemorheol Microcirc. 56 (2), 145-152 (2014).</li><li>Geddings, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strengths+and+weaknesses+of+a+new+mouse+model+of+thrombosis+induced+by+inferior+vena+cava+stenosis:+communication+from+the+SSC+of+the+ISTH.">Strengths and weaknesses of a new mouse model of thrombosis induced by inferior vena cava stenosis: communication from the SSC of the ISTH.</a> J Thromb Haemost. 12 (4), 571-573 (2014).</li><li>Alvarado, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Male+mice+have+increased+thrombotic+potential:+sex+differences+in+a+mouse+model+of+venous+thrombosis.">Male mice have increased thrombotic potential: sex differences in a mouse model of venous thrombosis.</a> Thromb Res. 127 (5), 478-486 (2011).</li></ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Aquí, un protocolo de la estenosis de la vena cava inferior, que imita la distorsión del flujo de sangre, un factor desencadenante para la TVP, se presenta. Estenosis de la vena cava inferior induce el desarrollo de trombos en el 65-100% de ratones C57BL/6 dentro de las 48 h y 25-50% de los ratones dentro de 2-6 h6,8,23 (Brill A, datos no publicados, 2016). Una limitación importante del método es la variabilidad en el trombo tamaño24 (figura 4), que se observa después de a corto plazo (6 h) y estenosis (48 h) IVC a largo plazo. Las razones de tal variabilidad (dado que el mismo las condiciones, como el espaciador, se utilizan anestesia etc.) siguen siendo obscuras pero uno puede especular que anatómica las variaciones entre los ratones (por ejemplo, ancho de la vena cava inferior, el número y la ubicación de laterales y posteriores sucursales) subyacen a este fenómeno. La variabilidad en el tamaño del trombo hace prevalencia de trombosis (por ciento de los ratones con un trombo) el resultado principal. Prevalencia de trombosis puede compararse con una tabla de contingencia y la prueba exacta de Fisher. Uno de los experimentos fue una excepción cuando los trombos de menor tamaño con la misma prevalencia de trombosis después de la inyección de anticuerpos de inhibición de podoplanin fue observada 7.
Este método es especialmente útil cuando se estudia la iniciación de la trombosis venosa. Permite investigar los acontecimientos tempranos en la pared del vaso, como el reclutamiento de las células, llevando eventualmente a la trombosis. Efectos pro - o anti - thrombotic de drogas pueden evaluarse con este modelo de la prevalencia de la trombosis es una lectura primaria. Estenosis por 48 h es aplicable para revelar un fenotipo antitrombótico, mientras que la estenosis 6 h puede utilizarse si se espera que un fenotipo protrombótico. También se puede realizar el análisis histológico del trombo y la pared circundante de la IVC.
Si los ramas secundarios deben ligarse o dejó patente queda abierto. Un grupo ha demostrado que la ligadura de las ramas laterales no aumenta el tamaño del trombo y situación de una rama lateral menos de 1,5 mm para el sitio de la ligadura de vena cava inferior deteriora dramáticamente trombo desarrollo25. Cierre de ramas laterales puede inducir lesión endotelial en ellos y también aumentar el tiempo de cirugía26. En nuestras manos, falta de cierre de la rama lateral disminuye sustancialmente la prevalencia de trombosis (hasta 10-30% después de la estenosis de 48 h; Brill, inédito) y por lo tanto ligan todas las ramas laterales visibles.
Idealmente, se recomienda controles littermate como ratones, incluso en el mismo fondo pero de diferentes fuentes, pueden tener prevalencia de trombosis ligeramente diferente. Si se estudia el efecto de la trombosis venosa profunda sí mismo en cualquiera de los parámetros (por ejemplo, bioquímico), deben utilizarse animales funcionan sham. Ratones Sham operado someterse al mismo procedimiento pero la ligadura alrededor de la vena cava inferior se cierra sin apretar y salió de allí sin producir estenosis.
El error más frecuente (un paso crítico) en el presente Protocolo es un esfuerzo para separar la aorta y la vena cava inferior no precisamente en el ángulo entre los vasos pero algo menor, que generalmente resulta en el sangrado. Cuando se presenta un sangrado masivo, buena recuperación del ratón se convierte en probable y se recomienda para detener el experimento y eutanasia a los animales. Normalmente, ratones recuperan bien, moverse dentro de la jaula y no bajar considerablemente de peso. Recomienda el uso de ratones por encima de 20 g para machos y hembras y mantener a animales (especialmente varones) en jaulas individuales después de la cirugía hasta el final del experimento para evitar combates y heridas. Se ha divulgado en otro modelo (electrolítico) de TVP que ratones machos producen trombos más grandes que las hembras27. Análisis de nuestros datos no ha revelado una diferencia sustancial en la prevalencia de trombosis entre ratones machos y hembras (Brill, inédito). Por lo tanto, los investigadores se anima a realizar experimentos con el modelo de estenosis de la vena cava inferior en ratones de ambos sexos.
Desmantelamiento de las suturas o grapas puede no descartarse sobre todo en experimentos larga (a la semana y más de largo). Así, ratones deben revisarse por lo menos dos veces al día especialmente para la integridad de la sutura y debe prestarse una especial atención a la aparición de rastros de sangre en el lecho de la jaula.
Cabe señalar que, como cualquier otro modelo animal, la estenosis de la vena cava inferior tiene sus limitaciones en cuanto a traducción en los seres humanos. Por ejemplo, cavas murinos no tienen válvulas, que desarrolla TVP humano dentro de las válvulas venosas. También, los seres humanos tienen orientación vertical de la columna vertebral con la bomba del músculo siendo un flujo de sangre acelerado mecanismo importante en las venas. En contraste, los ratones tienen orientación espinal horizontal con ningún papel de la bomba muscular en apoyo de sangre de retorno al corazón. Estas limitaciones se deben considerar al traducir datos de ratón para la enfermedad humana.

Trombosis venosa profunda (TVP) es el desarrollo de trombos en venas profundas, generalmente (pero no sólo) en las piernas. En conjunciones con embolia pulmonar (PE; señalado como tromboembolia venosa, TEV) se desarrolla en aproximadamente 900.000 estadounidenses anualmente y representa un problema grave de salud y un problema económico1,2. PE, una complicación de la trombosis venosa profunda, ocurre cuando un trombo es independiente de su ubicación inicial y llega a los pulmones, que pueden causar muerte e insuficiencia respiratoria. La cifra de muertos de VTE supera la mortalidad por SIDA, accidentes de tráfico y el cáncer de mama, combinado3.
El principal factor que causa trombosis venosa profunda además de conocidos motivos, como el cáncer o trauma, es la falta de movilidad 4,5. Esto puede resultar de una cirugía (especialmente ortopédica), parálisis, vuelos de largo recorrido u otras razones. Flujo de sangre en las venas depende de la bomba muscular y por lo tanto resultados de inmovilización de extremidades en el estancamiento de la sangre fluyan en las válvulas venosas, que conduce a la trombosis. El método descrito en el presente documento pretende recapitular tal sangre flujo distorsión6,7. Restricción de caudal en la vena cava inferior (IVC) imita las condiciones creadas en las válvulas venosas humanas y los resultados en la formación de un trombo similares en estructura a trombos humanos6. Gran parte de un trombo rojo y consiste en glóbulos rojos, fibrina y la incorporación de las plaquetas. Trombos tienen una pequeña "parte blanca" enriquecida en plaquetas (figura 1), que se asemejan a "líneas de Zahn" descritas en humanos trombos venosos. Ambas partes del trombo contienen también neutrófilos8, que se encuentran entre las primeras células a ser reclutados en el sitio del trombo futuro6,9. Neutrófilos en la parte roja expulsan trampas extracelulares neutrófilos (redes), mientras que los neutrófilos en la parte blanca parecen ser carente de redes8. Semejantemente a TVP humano, trombosis en ratones es acompañada por niveles elevados de plasma D-dimer (figura 2). Heparina de bajo peso molecular (enoxaparina), utilizada para la profilaxis de TVP en pacientes, también previene la trombosis en los ratones. Una ventaja importante de este método es la ausencia de denudación endotelial9, que es característico de TVP humana10. Esta característica hace que la estenosis de la vena cava inferior un modelo más clínico relevante de TVP que, por ejemplo, inducción de trombosis por el cloruro férrico, que induce la denudación endotelial y en el que los trombos consisten predominante en plaquetas11, 12,13. Un modelo de estancamiento completo en la vena cava inferior es preferido por varios equipos14,15,16. A diferencia de la estenosis, en la que se mantiene flujo residual en el recipiente, estasis pare el flujo y por lo tanto limita la accesibilidad de las sustancias administradas sistémicamente para el sitio de trombosis. Además, parece que los mecanismos subyacentes de trombosis inducida por la estenosis y el stasis son diferentes: estenosis resultados en el desarrollo de inflamación local (activación del endotelio, liberación del contenido del cuerpo de Weibel-Palade, reclutamiento de células inmunes y plaquetas a la pared del vaso) causando «immunothrombosis»6,9,17, mientras que estasis parece inducir trombosis algo base, en particular, el factor tisular y otros la coagulación y los mecanismos relacionados con la fibrinolisis18,19,20. Así, los modelos de la estenosis y el stasis reflejan levemente diferentes aspectos del desarrollo de trombo venoso, aunque ciertamente pueden superponerse sus mecanismos. Modelo IVC electrolítico (EIM) de la TVP21,22 induce un trombo que ocluye parcialmente la pared del vaso. Por lo tanto, es conveniente para probar los efectos de la administración sistémica de medicamentos diferentes en el crecimiento del trombo. Este modelo, sin embargo, supone la interrupción de la integridad de la pared IVC (inserción de una aguja) y la inducción de trombosis por la corriente eléctrica que por lo menos discutible la relevancia fisiopatológica de este mecanismo.

<table style="border-collapse:collapse;width:536pt" width="715">
	<colgroup>
		<col style="width:162pt" width="216" />
		<col style="width:160pt" width="213" />
		<col style="width:89pt" width="119" />
		<col style="width:125pt" width="167" />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:162pt;height:15.75pt" width="216">C57BL/6 mice</td>
			<td class="xl63" style="width:160pt" width="213">Charles River</td>
			<td class="xl63" style="width:89pt" width="119"></td>
			<td class="xl66" style="width:125pt" width="167">8 - 10 weeks old, bothe genders</td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:162pt;height:15.75pt" width="216">Scissors</td>
			<td class="xl63" style="width:160pt" width="213">WPI</td>
			<td align="right" class="xl63" style="width:89pt" width="119">15922</td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:162pt;height:15.75pt" width="216">Scissors</td>
			<td class="xl63" style="width:160pt" width="213">WPI</td>
			<td align="right" class="xl63" style="width:89pt" width="119">14003</td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:162pt;height:15.75pt" width="216">Dumont 5/45 forceps</td>
			<td class="xl63" style="width:160pt" width="213">FST</td>
			<td class="xl63" style="width:89pt" width="119">11251-35</td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:162pt;height:15.75pt" width="216">7-0 Prolene suture</td>
			<td class="xl63" style="width:160pt" width="213">Ethicon</td>
			<td class="xl63" style="width:89pt" width="119">W8725</td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:162pt;height:15.75pt" width="216">6-0 Vicryl suture</td>
			<td class="xl63" style="width:160pt" width="213">Ethicon</td>
			<td class="xl63" style="width:89pt" width="119">W9981</td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:162pt;height:15.75pt" width="216">Cotton buds</td>
			<td class="xl63" style="width:160pt" width="213">Spar</td>
			<td class="xl63" style="width:89pt" width="119"></td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:162pt;height:15.75pt" width="216">Millswabs sterile&#160;</td>
			<td class="xl63" style="width:160pt" width="213">Millpledge veterinary&#160;</td>
			<td align="right" class="xl63" style="width:89pt" width="119">611950</td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:162pt;height:15.75pt" width="216">Drapes</td>
			<td class="xl67">Kruuse</td>
			<td align="right" class="xl63" style="width:89pt" width="119">141765</td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:162pt;height:15.75pt" width="216">Glucose Saline-Aqupharm3</td>
			<td class="xl67">Animal Care</td>
			<td class="xl63" style="width:89pt" width="119">XVD589</td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="46" style="height:34.5pt">
			<td class="xl63" height="46" style="width:162pt;height:34.5pt" width="216">Clear H20 HydroGel 98% sterile water&#160;</td>
			<td class="xl67">Clearh2o</td>
			<td class="xl63" style="width:89pt" width="119"></td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:162pt;height:15.75pt" width="216">Buprenorphine</td>
			<td class="xl67">National Veterinary Supplies</td>
			<td class="xl63" style="width:89pt" width="119"></td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:162pt;height:15.75pt" width="216">Isoflurane vaporizer</td>
			<td class="xl67">General Anaesthetic Services</td>
			<td class="xl63" style="width:89pt" width="119"></td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="42" style="height:31.5pt">
			<td class="xl63" height="42" style="width:162pt;height:31.5pt" width="216">IsoFlo 100% W/W inhalation vapour, liquid</td>
			<td class="xl63" style="width:160pt" width="213">National Veterinary Supplies</td>
			<td class="xl63" style="width:89pt" width="119"></td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:162pt;height:15.75pt" width="216">Sterilizer Steri350</td>
			<td class="xl63" style="width:160pt" width="213">Inotech</td>
			<td class="xl63" style="width:89pt" width="119"></td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:162pt;height:15.75pt" width="216">Microscope Olympus SZX10</td>
			<td class="xl63" style="width:160pt" width="213">Olympus</td>
			<td class="xl63" style="width:89pt" width="119"></td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

stenosis of the inferior vena cava: a murine model of deep vein thrombosis

Profunda de la vena trombosis (TVP) y su complicación devastadora, embolia pulmonar, son un problema de salud grave con alta mortalidad. Mecanismos de formación de trombos en las venas siguen siendo obscuros. Falta de movilidad (p. ej., después de cirugía o vuelos de largo recorrido) es uno de los principales factores que conducen a la trombosis venosa profunda. La consecuencia fisiopatológica de la falta de movilidad es estancamiento de flujo de la sangre en las válvulas venosas. Aquí, se describe un modelo que imita la perturbación del flujo como un factor de conducción de trombosis. En este modelo, se crea la restricción del flujo parcial (estenosis) en la vena cava inferior (IVC). Cierre de cerca de 90% de la luz de la vena cava inferior durante 48 h resulta en el desarrollo de trombos estructuralmente similares a las de los seres humanos. Las similitudes son: i) la mayor parte del volumen del trombo es rojo, es decir, consiste en glóbulos rojos y fibrina, ii) la presencia de una parte blanca (líneas de Zahn), monocapa endotelial iii) no despojadas, iv) niveles elevados de plasma dímero D y v) la posibilidad de evitar trombosis por heparina de bajo peso molecular. Limitaciones incluyen la variable tamaño de trombos y el hecho de que un cierto porcentaje de los ratones de tipo salvaje (0 - 35%) no puede producir un trombo. Además de la observación visual y medición, trombos pueden visualizarse por tecnologías no invasivas, como la ultrasonografía, que permite el monitoreo de la dinámica de desarrollo de trombos. En puntos del tiempo más cortos (1-6 h), microscopia intravital se puede aplicar para observar directamente los acontecimientos (p. ej., reclutamiento de células de la pared del vaso) antes de la formación de trombos. Uso de este método por varios equipos de todo el mundo ha hecho posible descubrir los mecanismos básicos de la iniciación de la TVP y identificar objetivos potenciales que podrían ser beneficiosos para su prevención.

En este documento, se describe un modelo de trombosis venosa profunda inducida por la distorsión de flujo en la vena cava inferior. Inducción de la estenosis en la vena cava inferior inicia distorsión y estancamiento del flujo sanguíneo y después de un tiempo (en este caso, 48 h) resultados en el desarrollo de un trombo, estructuralmente similar a la humana de TVP los trombos (figura 1A). Visualmente es fácilmente detectable la presencia de un trombo dentro de la vena cava inferior (figura 1B). Una similitud importante entre el modelo y la TVP humana es elevada del plasma dímero-D (figura 2). D-dimer es un producto de degradación de fibrina y su presencia en la sangre sugiere que un proceso trombótico activo está sucediendo.
El modelo se presenta paso a paso en la figura 3A-c. La vena cava inferior se expone cuidadosamente, se realiza un orificio entre la vena cava inferior y la aorta y una sutura (Prolene 7-0) se tira por el agujero debajo de la vena cava inferior. Entonces la vena cava inferior se unen por la sutura sobre un espaciador (aguja de 30G,D, figura 3), después que se retira el espaciador. Este procedimiento permite cerca de 90% cierre del lumen del IVC, dejando patente el 10% restante. De esta forma el estancamiento de flujo de la sangre llevando eventualmente a la trombosis.
Figura 4 muestra la desventaja principal del modelo, tamaño variable trombo. Todos estos trombos se obtuvieron en el mismo experimento realizan en ratones machos de tipo salvaje del mismo origen, edad y peso similares. Aunque todos los ratones producen trombos (trombosis de la prevalencia de 100%), su tamaño varía claramente en una amplia gama.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56697/56697fig1.jpg"> 
Figura 1: Representante trombo después de 48 h restricción, estenosis. (A) un trombo típico después de 48 h IVC estenosis. Nota roja (enriquecida con células de sangre rojas) y piezas blanco (enriquecido de plaquetas). IVC (B) con (izquierda) o sin (derecha) un trombo. Barras de escala = 2 mm. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56697/56697fig1large.jpg" target="_blank">haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56697/56697fig2.jpg"> 
Figura 2 : Elevados niveles plasmáticos de dímero D después de la aplicación de la estenosis de vena cava inferior. Ratones fueron sometidos a estenosis de la vena cava inferior. Sangre fue tomada en los momentos indicados, estabilizado 1:9 con citrato de sodio 3.8%, plasma fue preparado por centrifugación (2.300 x g, 5 min) y dímero-D se determinaron mediante un kit de ELISA según instrucciones del fabricante. Círculos señalan ratones sham-funcionado, cruces señalan estenosis de la vena cava inferior. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56697/56697fig2large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56697/56697fig3.jpg"> 
Figura 3: Flujo de restricción, estenosis en el modelo de la Vena Cava Inferior (IVC) de TVP en los ratones. Etapas consecutivas del modelo se presentan. (A) se realiza un orificio entre la vena cava inferior y la aorta y una sutura se tira a través de él alrededor de la vena cava inferior. (B) un nudo se cierra sobre un espaciador (aguja de 30 G). (C) se retira el espaciador: la opinión final que el cirujano ve antes de cerrar el ratón. La línea amarilla punteada delimita la vena cava inferior. LRV significa vena renal izquierda. Barras de escala = 0,2 mm. (D) el espaciador (aguja de 30 G). Barras de escala = 2 mm. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56697/56697fig3large.jpg" target="_blank">haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56697/56697fig4.jpg"> 
Figura 4 . Variabilidad del tamaño del trombo. Ratones fueron sometidos a estenosis de la vena cava inferior de 48 h. Presentan trombos obtenidos en el mismo experimento. Barras de escala de 2 mm. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56697/56697fig4large.jpg" target="_blank">haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>

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Stenosis of the Inferior Vena Cava: A Murine Model of Deep Vein Thrombosis

Aquí describimos la estenosis en la vena cava inferior como un modelo murino de trombosis venosa profunda. Este modelo recoge la restricción del flujo de la sangre, uno de los principales detonantes de la trombosis venosa en los seres humanos.

Estenosis de la Vena Cava Inferior: un modelo murino de trombosis venosa profunda

Deep vein thrombosis (DVT) and its devastating complication, pulmonary embolism, are a severe health problem with high mortality. Mechanisms of thrombus ...

stenosis-inferior-vena-cava-murine-model-deep-vein

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

23.7K vistas.  University of Birmingham. Aquí describimos la estenosis en la vena cava inferior como un modelo murino de trombosis venosa profunda. Este modelo recoge la restricción del flujo de la sangre, uno de los principales detonantes de la trombosis venosa en los seres humanos.

Video: Stenosis of the Inferior Vena Cava: A Murine Model of Deep Vein Thrombosis

Murine Model of CD40-activation of B cells

Research on B cells has shown that CD40 activation improves their antigen presentation capacity. When stimulated with interleukin-4 and CD40 ligand (CD40L), human B cells can be expanded without difficulties from small amounts of peripheral blood within 14 days to very large amounts of highly-pure CD40-B cells (&gt;109 cells per patient) from healthy donors as well as cancer patients1-4. CD40-B cells express important lymph node homing molecules and can attract T cells in vitro5. Furthermore they efficiently take up, process and present antigens to T cells6,7. CD40-B cells were shown to not only prime na&iacute;ve, but also expand memory T cells8,9. Therefore CD40-activated B cells (CD40-B cells) have been studied as an alternative source of immuno-stimulatory antigen-presenting cells (APC) for cell-based immunotherapy1,5,10. In order to further study whether CD40-B cells induce effective T cell responses in vivo and to study the underlying mechanism we established a cell culture system for the generation of murine CD40-activated B cells. Using splenocytes or purified B cells from C57BL/6 mice for CD40-activation, optimal conditions were identified as follows: Starting from splenocytes of C57BL/6 mice (haplotype H-2b) lymphocytes are purified by density gradient centrifugation and co-cultured with HeLa cells expressing recombinant murine CD40 ligand (tmuCD40L HeLa)11. Cells are recultured every 3-4 days and key components such as CD40L, interleukin-4, -Mercaptoethanol and cyclosporin A are replenished. In this protocol we demonstrate how to obtain fully activated murine CD40-B cells (mCD40B) with similar APC-phenotype to human CD40-B cells (Fig 1a,b). CD40-stimulation leads to a rapid outgrowth and expansion of highly pure (&gt;90%) CD19+ B cells within 14 days of cell culture (Fig 1c,d). To avoid contamination with non-transfected cells, expression of the murine CD40 ligand on the transfectants has to be controlled regularly (Fig 2). Murine CD40-activated B cells can be used to study B-cell activation and differentiation as well as to investigate their potential to function as APC in vitro and in vivo. Moreover, they represent a promising tool for establishing therapeutic or preventive vaccination against tumors and will help to answer questions regarding safety and immunogenicity of this approach12.

In this video, we demonstrate the procedure of CD40-activation and expansion of murine B cells from splenocytes of C57BL/6 mice, which can be used as a model antigen-presenting cell (APC) to study induction of immunity.

Modelo murino de CD40-activación de las células B

Research on B cells has shown that CD40 activation improves their antigen presentation capacity. When stimulated with interleukin-4 and CD40 ligand ...

Investigación

Inmunología e Infección

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Graft-versus-host disease (GVHD) is the limiting barrier to the broad use of bone marrow transplant as a curative therapy for a variety of hematological deficiencies. GVHD is caused by mature alloreactive T cells present in the bone marrow graft that are infused into the recipient and cause damage to host organs. However, in mice, T cells must be added to the bone marrow inoculum to cause GVHD. Although extensive work has been done to characterize T cell responses post transplant, bioluminescent imaging technology is a non-invasive method to monitor T cell trafficking patterns in vivo. 
Following lethal irradiation, recipient mice are transplanted with bone marrow cells and splenocytes from donor mice. T cell subsets from L2G85.B6 (transgenic mice that constitutively express luciferase) are included in the transplant. By only transplanting certain T cell subsets, one is able to track specific T cell subsets in vivo, and based on their location, develop hypotheses regarding the role of specific T cell subsets in promoting GVHD at various time points. At predetermined intervals post transplant, recipient mice are imaged using a Xenogen IVIS CCD camera. Light intensity can be quantified using Living Image software to generate a pseudo-color image based on photon intensity (red = high intensity, violet = low intensity). 
Between 4-7 days post transplant, recipient mice begin to show clinical signs of GVHD. Cooke et al.1 developed a scoring system to quantitate disease progression based on the recipient mice fur texture, skin integrity, activity, weight loss, and posture. Mice are scored daily, and euthanized when they become moribund. Recipient mice generally become moribund 20-30 days post transplant. 
Murine models are valuable tools for studying the immunology of GVHD. Selectively transplanting particular T cell subsets allows for careful identification of the roles each subset plays. Non-invasively tracking T cell responses in vivo adds another layer of value to murine GVHD models.

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Murine bone marrow transplantation is a widely used technique to study immunological mechanisms governing graft-versus-host disease in humans. The ability to monitor T cell trafficking patterns in vivo allows for detailed analysis of the development and perpetuation of T cell responses during graft-versus-host disease.

La inducción de la enfermedad de injerto contra huésped y<em&gt; En Vivo</em&gt; T Monitoreo Celular Utilizando un modelo murino MHC de concordancia

Graft-versus-host disease (GVHD) is the limiting barrier to the broad use of bone marrow transplant as a curative therapy for a variety of hematological ...

Murine Model of Allergen Induced Asthma

Asthma is a major cause of morbidity and mortality, affecting some 300 million people throughout the world.1 More than 8% of the US population has asthma, with the prevalence increasing.2 As with other diseases, animal models of allergic airway disease greatly facilitate understanding of the underlying pathophysiology, help identify potential therapeutic targets, and allow preclinical testing of possible new therapies. Models of allergic airway disease have been developed in several animal species, but murine models are particularly attractive due to the low cost, ready availability, and well-characterized immune systems of these animals.3 Availability of a variety of transgenic strains further increases the attractiveness of these models.4 Here we describe two murine models of allergic airway disease, both employing ovalbumin as the antigen. Following initial sensitization by intraperitoneal injection, one model delivers the antigen challenge by nebulization, the other by intratracheal delivery. These two models offer complementary advantages, with each mimicking the major features of human asthma.5
The major features of acute asthma include an exaggerated airway response to stimuli such as methacholine (airway hyperresponsiveness; AHR) and eosinophil-rich airway inflammation. These are also prominent effects of allergen challenge in our murine models,5,6 and we describe techniques for measuring them and thus evaluating the effects of experimental manipulation. Specifically, we describe both invasive7 and non-invasive8 techniques for measuring airway hyperresponsiveness as well as methods for assessing infiltration of inflammatory cells into the airways and the lung. Airway inflammatory cells are collected by bronchoalveolar lavage while lung histopathology is used to assess markers of inflammation throughout the organ. These techniques provide powerful tools for studying asthma in ways that would not be possible in humans.

Experimental mouse models of allergic asthma offer new possibilities for studying disease pathogenesis and developing new therapeutics. These models are well suited to measuring factors governing the allergic immune response, airway inflammation, and pulmonary pathophysiology.

Modelo murino de asma inducida por alergenos

Asthma is a major cause of morbidity and mortality, affecting some 300 million people throughout the world.1 More than 8% of the US population has asthma, ...

Measurement of Tactile Allodynia in a Murine Model of Bacterial Prostatitis

Uropathogenic Escherichia coli (UPEC) are pathogens that play an important role in urinary tract infections and bacterial prostatitis1. We have recently shown that UPEC have an important role in the initiation of chronic pelvic pain2, a feature of Chronic prostatitis/Chronic pelvic pain syndrome (CP/CPPS)3,4. Infection of the prostate by clinically relevant UPEC can initiate and establish chronic pain through mechanisms that may involve tissue damage and the initiation of mechanisms of autoimmunity5.
A challenge to understanding the pathogenesis of UPEC in the prostate is the relative inaccessibility of the prostate gland to manipulation. We utilized a previously described intraurethral infection method6 to deliver a clinical strain of UPEC into male mice thereby establishing an ascending infection of the prostate. Here, we describe our protocols for standardizing the bacterial inoculum7 as well as the procedure for catheterizing anesthetized male mice for instillation of bacteria.
CP/CPPS is primarily characterized by the presence of tactile allodynia4. Behavior testing was based on the concept of cutaneous hyperalgesia resulting from referred visceral pain8-10. An irritable focus in visceral tissues reduces cutaneous pain thresholds allowing for an exaggerated response to normally non-painful stimuli (allodynia). Application of normal force to the skin result in abnormal responses that tend to increase with the intensity of the underlying visceral pain. We describe methodology in NOD/ShiLtJ mice that utilize von Frey fibers to quantify tactile allodynia over time in response to a single infection with UPEC bacteria.

Infection of the prostate may be a contributing factor in mediating pelvic pain in chronic prostatitis. We describe the procedure for preparation of standardized bacterial inoculum, instillation of bacteria into the urethra of male mice and methodology for measuring tactile allodynia in mice over time.

Medida de la alodinia táctil en un modelo murino de la prostatitis bacteriana

Uropathogenic Escherichia coli (UPEC) are pathogens that play an important role in urinary tract infections and bacterial prostatitis1. We have recently ...

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

Streptococcus agalactiae (group B Streptococcus, GBS), is a Gram-positive, asymptomatic colonizer of the human gastrointestinal tract and vaginal tract of 10 - 30% of adults. In immune-compromised individuals, including neonates, pregnant women, and the elderly, GBS may switch to an invasive pathogen causing sepsis, arthritis, pneumonia, and meningitis. Because GBS is a leading bacterial pathogen of neonates, current prophylaxis is comprised of late gestation screening for GBS vaginal colonization and subsequent peripartum antibiotic treatment of GBS-positive mothers. Heavy GBS vaginal burden is a risk factor for both neonatal disease and colonization. Unfortunately, little is known about the host and bacterial factors that promote or permit GBS vaginal colonization. This protocol describes a technique for establishing persistent GBS vaginal colonization using a single &#946;-estradiol pre-treatment and daily sampling to determine bacterial load. It further details methods to administer additional therapies or reagents of interest and to collect vaginal lavage fluid and reproductive tract tissues. This mouse model will further the understanding of the GBS-host interaction within the vaginal environment, which will lead to potential therapeutic targets to control maternal vaginal colonization during pregnancy and to prevent transmission to the vulnerable newborn. It will also be of interest to increase our understanding of general bacterial-host interactions in the female vaginal tract.

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

The purpose of this protocol is to imitate human group B Streptococcus (GBS) vaginal colonization in a murine model. This method may be used to investigate host immune responses and bacterial factors contributing to GBS vaginal persistence, as well as to test therapeutic strategies.

Un modelo murino de Grupo B<em&gt; Streptococcus</em&gt; Colonización vaginal

Streptococcus agalactiae (group B Streptococcus, GBS), is a Gram-positive, asymptomatic colonizer of the human gastrointestinal tract and vaginal tract of ...

Deep Vein Thrombosis Induced by Stasis in Mice Monitored by High Frequency Ultrasonography

Venous thrombosis is a common condition affecting 1 - 2% of the population, with an annual incidence of 1 in 500. Venous thrombosis can lead to death through pulmonary embolism or results in the post-thrombotic syndrome, characterized by chronic leg pain, swelling, and ulceration, or in chronic pulmonary hypertension resulting in significant chronic respiratory compromise. This is the most common cardiovascular disease after myocardial infarction and ischemic stroke and is a clinical challenge for all medical disciplines, as it can complicate the course of other disorders such as cancer, systemic disease, surgery, and major trauma.
Experimental models are necessary to study these mechanisms. The stasis model induces consistent thrombus size and a quantifiable amount of thrombus. However, it is necessary to systematically ligate side branches of the inferior vena cava to avoid variability in thrombus sizes and any erroneous data interpretation. We have developed a non-invasive technique to measure thrombus size using ultrasonography. Using this technique, we can assess thrombus development and resolution over time in the same animal. This approach limits the number of mice required for quantification of venous thrombosis consistent with the principle of replacement, reduction, and refinement of animals in research. We have demonstrated that thrombus weight and histological analysis of thrombus size correlate with measurement obtained with ultrasonography. Therefore, the current study describes how to induce deep vein thrombosis in mice using the inferior vena cava stasis model and how to monitor it using high frequency ultrasound.

The present protocol describes the steps to obtain venous thrombosis using a stasis model. In addition, we are using a non-invasive method to measure thrombus formation and resolution over time.

Trombosis venosa profunda inducida por estasis en los ratones controlados por sonografía de alta frecuencia

Venous thrombosis is a common condition affecting 1 - 2% of the population, with an annual incidence of 1 in 500. Venous thrombosis can lead to death ...

Deep Dermal Injection As a Model of Candida albicans Skin Infection for Histological Analyses

The skin is an extremely extended organ of the body and, due to this large surface, it is continuously exposed to microorganisms. Skin damage can easily lead to infections in the dermis which can, in turn, result in the dissemination of pathogens into the bloodstream. Understanding how the immune system fights infections at the very early stage and how the host can eliminate the pathogens is an important step to set the base for future therapeutic interventions. Here we describe a model of Candida albicans infection that can visualize the processes that occur early during an infection, including when the pathogen has passed the epithelial barrier, as well as the immune response elicited by the C. albicans invasion. We used this infection model to perform histological analyses that show the immune cells that infiltrate the skin as well as the presence and localization of the pathogen. Samples collected after the infection can be processed for RNA extraction.

Deep Dermal Injection As a Model of Candida albicans Skin Infection for Histological Analyses

Here we describe a protocol that allows histological and molecular analysis of skin samples after Candida albicans intradermal injection. This protocol maintains the structural integrity of the skin and allows for the localization of tissue-resident or newly recruited immune cells as well as the pathogen distribution.

Profundo dérmico inyección como un modelo de infección de la piel Candida albicans para el análisis histológico

The skin is an extremely extended organ of the body and, due to this large surface, it is continuously exposed to microorganisms. Skin damage can easily ...

In Vivo Imaging of Reactive Oxygen Species in a Murine Wound Model

The generation of reactive oxygen species (ROS) is a hallmark of inflammatory processes, but in excess, oxidative stress is widely implicated in various pathologies such as cancer, atherosclerosis and diabetes. We have previously shown that dysfunction of the Nuclear factor (erythroid-derived 2)-like 2 (Nrf2)/ Kelch-like erythroid cell-derived protein 1 (Keap1) signaling pathway leads to extreme ROS imbalance during cutaneous wound healing in diabetes. Since ROS levels are an important indicator of progression of wound healing, specific and accurate quantification techniques are valuable. Several in vitro assays to measure ROS in cells and tissues have been described; however, they only provide a single cumulative measurement per sample. More recently, the development of protein-based indicators and imaging modalities have allowed for unique spatiotemporal analyses. L-012 (C13H8ClN4NaO2) is a luminol derivative that can be used for both in vivo and in vitro chemiluminescent detection of ROS generated by NAPDH oxidase. L-012 emits a stronger signal than other fluorescent probes and has been shown to be both sensitive and reliable for detecting ROS. The time lapse applicability of L-012-facilitated imaging provides valuable information about inflammatory processes while reducing the need for sacrifice and overall reducing the number of study animals. Here, we describe a protocol utilizing L-012-facilitated in vivo imaging to quantify oxidative stress in a model of excisional wound healing using diabetic mice with locally dysfunctional Nrf2/Keap1.

In Vivo Imaging of Reactive Oxygen Species in a Murine Wound Model

We describe a non-invasive in vivo imaging protocol that is streamlined and cost-effective, utilizing L-012, a chemiluminescent luminol-analog, to visualize and quantify reactive oxygen species (ROS) generated in a mouse excisional wound model.

En Vivo Proyección de imagen de especies reactivas de oxígeno en un murino herida modelo

The generation of reactive oxygen species (ROS) is a hallmark of inflammatory processes, but in excess, oxidative stress is widely implicated in various ...

Digestion of the Murine Liver for a Flow Cytometric Analysis of Lymphatic Endothelial Cells

Within the liver, lymphatic vessels are found within the portal triad, and their described function is to remove interstitial fluid from the liver to the lymph nodes where cellular debris and antigens can be surveyed. We are very interested in understanding how the lymphatic vasculature might be involved in inflammation and immune cell function within the liver. However, very little has been published establishing digestion protocols for the isolation of lymphatic endothelial cells (LECs) from the liver or specific markers that can be used to evaluate liver LECs on a per cell basis. Therefore, we optimized a method for the digestion and staining of the liver in order to evaluate the LEC population in the liver. We are confident that the method outlined here will be useful for the identification and isolation of LECs from the liver and will strengthen our understanding of how LECs respond to the liver microenvironment.

The goal of this protocol is to identify lymphatic endothelial cell populations within the liver using described markers. We utilize collagenase IV and DNase and a gentle mincing of tissue, combined with flow cytometry, to identify a distinct population of lymphatic endothelial cells.

Digestión del hígado murino para el análisis cytometric del flujo de las células endoteliales linfáticas

Within the liver, lymphatic vessels are found within the portal triad, and their described function is to remove interstitial fluid from the liver to the ...

Robust Ligature-Induced Model of Murine Periodontitis for the Evaluation of Oral Neutrophils

The main advantages of studying the pathophysiology of periodontal disease utilizing murine models are the reduced cost of animals, array of genetically modified strains, the vast number of analyses that can be performed on harvested soft and hard tissues. However, many of these systems are subject to procedural criticisms. As an alternative, the ligature-induced model of periodontal disease, driven by the localized development and retention of a dysbiotic oral microbiome, can be employed, which is rapidly induced and relatively reliable. Unfortunately, the variants of ligature-induced murine periodontitis protocol are isolated to focal regions of the periodontium and subject to premature avulsion of the installed ligature. This minimizes the amount of tissue available for subsequent analyses and increases the number of animals required for study. This protocol describes the precise manipulations required to place extended molar ligatures with improved retention and usage of a novel rinse technique to recover oral neutrophils in mice with an alternative approach that mitigates the aforementioned technical challenges.

This article presents a protocol for establishing a ligature-induced model of murine periodontitis involving multiple maxillary molars, resulting in larger areas of the involved gingival tissue and bone for subsequent analysis as well as reduced animal usage. A technique to assess oral neutrophils in a manner analogous to human subjects is also described.

Modelo robusto inducido por la ligatura de la periodontitis murina para la evaluación de los neutrófilos orales

The main advantages of studying the pathophysiology of periodontal disease utilizing murine models are the reduced cost of animals, array of genetically ...

Estenosis de la Vena Cava Inferior: un modelo murino de trombosis venosa profunda

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