Name: stenosis of the inferior vena cava: a murine model of deep vein thrombosis
Uploaded: 2017-12-22T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 37 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Stenosis of the Inferior Vena Cava: A Murine Model of Deep Vein Thrombosis at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי קרן לב הבריטי (PG/13 60 30406) ואת אוניברסיטת בירמינגהם.

כל ההליכים בבעלי חיים אושרו על-ידי חיה רווחה אתית סקירה הגוף ואת משרד הפנים בבריטניה (בריטניה, פרוייקט רשיון 40/3745). עכברים על רקע C57BL/6, 8-12 שבוע 19-25 גרם משקל, של שני המינים משמשים.
1. בעלי חיים הרדמה
<ol>
	<li>במקום עכבר לתא אינדוקציה, לגרום הרדמה על ידי תערובת של 5% איזופלוריין 100% חמצן. קצב זרימה של חצי ליטר לדקה חכה עד העכבר לגמרי מפסיקה לנוע ושימוש תדירותו של נשימה הופך נדיר.</li>
	<li>להסיר את העכבר מן החדר ולגלח את הבטן קוצץ חשמלי. הסרת שיער מהבטן יסודי ככל האפשר כדי למנוע זיהום של חלל הבטן.</li>
	<li>הנח את העכבר במצב פרקדן ולמקם את האף של העכבר לתוך קונוס מקושרים למערכת הרדמה. להקטין את אחוז איזופלוריין ל 2-3% (האחוז המדויק אולי מעט שונים חיה חיה). ודא כי החיה שוכבת עם קצב הנשימה שלה להיות נמוך יותר מהרגיל אבל הימנעות מתנשף. אם להשתנק מתרחשת, להקטין את אחוז איזופלוריין ב- 0.5%.
	<ol>
		<li>בדוק את רפלקס פדלים לאשר ההרדמה המתאים ולהתחיל ניתוח רק אם זה שלילי. הוטרינר משחה למרוח את העיניים למניעת יובש.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>להחיל פתרון אנטי-אחרים (1% Hibitane) על העכבר של הבטן, לנגב האזור באמצעות כותנה סטרילי באד בדרך למעט פוטנציאל זיהום מחדש של האתר כירורגית (למשל, מבפנים להוציא בצורה מעגלית). חזור על 3 פעמים.</li>
</ol>
2. יישום של היצרות IVC ושחזור העכבר
הערה: כל הכלים באותה מידה כמו חומרים (צמר גפן, גזה, תמיסת מלח וכו) בא במגע עם אזור הניתוח חייב להיות סטרילי. המפעיל חייב יתנקה לפני הניתוח לבין ללבוש כפפות סטריליות והגלימה במהלך ההליך. מיקרוסקופ ידיות צריך לעטוף בנייר סטרילי.
<ol>
	<li>לתת עכברים טיפול נגד כאבים לפני הניתוח במהלך תקופת הניסוי כולו. לדוגמה, השתמש הבופרנורפין 0.1 מ"ג/ק"ג subcutaneously 30 דקות לפני הניתוח, ואז כל 12 שעות עד החיה היא מורדמים. כמו פקקת בשיטה זו מתפתחת באופן דומה לדלקת סטרילית, למנוע באמצעות תרופות אנטי דלקתיות כמו premedication.</li>
	<li>מכסה את העכבר עם תלוי סטרילי, לעשות בו חור הכיסוי ותאבטחי לחשוף את האתר של הניתוח. בעזרת מספריים, לעשות חתך לאורך האמצע בבטן, 1.5 ס למטה מ בעצם החזה. בעזרת צמר גפן exteriorize המעיים בצד שמאל של העכבר, לכסות אותם עם גזה סטרילית טבולים תמיסת מלח חמים (37 מעלות צלזיוס) כדי למנוע ייבוש.</li>
	<li>לזהות את IVC ואת סניפיה בצד (ייתכנו 0, 1 או 2 מהם) בכיוון סימטרית מהאתר של פיוז'ן של IVC עם הווריד של הכליה השמאלית. מאתרים ומפסיקים את כל הענפים גלוי בצד עם 7-0 התפרים Prolene אינרטי כמו קרוב IVC ככל האפשר.
	<ol>
		<li>לא לנסות להחזיק הענפים בצד עם המלקחיים ישירות אלא למשוך אותם מחזיקות רקמת השומן הסובבים אותם עם מלקחיים ביד אחת ולגרום מנהרה מתחת הענף עם מלקחיים וביד השנייה. לא לסגור סניפים האחורי.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>מחזיק הרקמות הסובבות עם מלקחיים, משוך את IVC למעלה ועזב בהפקת המתח באזור קטן בין של IVC את העורקים בדיוק על הזווית בין IVC את וריד הכליה השמאלית. קח בחשבון שזה כמעט בלתי אפשרי להפריד העורקים IVC אפילו 2-3 מ מ מתחת (לכיוון סימטרית).</li>
	<li>באמצעות תנועות מתפצלים עם מלקחיים טיפים להפוך את יד ימין חור בין העורקים של IVC. יש לזכור כי התנועות יותר עשה, גבוה יותר הסיכוי לגרום נזק את כלי הקיבול. באופן אידיאלי, לנסות לצמצם את מספר תנועות 3-5.</li>
	<li>להכין חלק 7-0 בתפר Prolene אינרטי של 2 ס מ. למקם אותו בתוך חלל הצפק של העכבר בצד שמאל של המפעיל בסביבה IVC.</li>
	<li>משוך את IVC עזבו שוב. הכנס את העצות מלקחיים הנכון לתוך החור בין העורקים של IVC כך הטיפים להופיע בצד השני של IVC. קח את התפר ולמשוך אותו בחזרה דרך החור (איור 3א).</li>
	<li>קשר זמני עם התפר אך אינו סגור. מקום 30G המחט ("כרווח") כפופות בקרס לתוך הקשר עכשיו אותו וסגור (איור 3ב).</li>
	<li>הסר את מרווח (איור 3ג').</li>
	<li>להחזיר המעיים בחזרה אל חלל הצפק עם כותנה באד ולהפיץ אותם באותה מידה בה.</li>
	<li>סגור צפק 6-0 בתפר תפר נספג באמצעות לולאות רציפה. סגור את. לולאות הראשונה והאחרונה בתור קשר.</li>
	<li>קרוב לעור בעזרת סיכות מתכת.</li>
	<li>להחדיר את העכבר 0.5 מיליליטר חמים (37 מעלות צלזיוס) תמיסת גלוקוז subcutaneously כדי לשחזר את האיזון נוזלי של האורגניזם.</li>
	<li>למקם את העכבר הכלוב בודדים חמים (25 ° C) קאמרית או חדר האוכל, ג'ל מים בתוך הכלוב. להתבונן עד העכבר הוא התאושש לחלוטין (בדרך כלל, סביב 1 h).</li>
</ol>

<ol>
	<li>Heit, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+epidemiology+of+venous+thromboembolism+in+the+community.">The epidemiology of venous thromboembolism in the community.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 28 (3), 370-372 (2008).</li><li>Huang, W., Goldberg, R. J., Anderson, F. A., Kiefe, C. I., Spencer, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Secular+trends+in+occurrence+of+acute+venous+thromboembolism:+the+Worcester+VTE+study+(1985-2009).">Secular trends in occurrence of acute venous thromboembolism: the Worcester VTE study (1985-2009).</a> Am J Med. 127 (9), 829-839 (2014).</li><li>House of Commons Health Care Committee. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Prevention+of+Venous+Thromboembolism+in+Hospitalised+patients.">The Prevention of Venous Thromboembolism in Hospitalised patients.</a> The House of Commons. , (2005).</li><li>Kuipers, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Travel+and+venous+thrombosis:+a+systematic+review.">Travel and venous thrombosis: a systematic review.</a> J Intern Med. 262 (6), 615-634 (2007).</li><li>Lopez, J. A., Chen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiology+of+venous+thrombosis.">Pathophysiology of venous thrombosis.</a> Thromb Res. 123, 30-34 (2009).</li><li>Brill, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=von+Willebrand+factor-mediated+platelet+adhesion+is+critical+for+deep+vein+thrombosis+in+mouse+models.">von Willebrand factor-mediated platelet adhesion is critical for deep vein thrombosis in mouse models.</a> Blood. 117 (4), 1400-1407 (2011).</li><li>Payne, H., Ponomaryov, T., Watson, S. P., Brill, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mice+with+a+deficiency+in+CLEC-2+are+protected+against+deep+vein+thrombosis.">Mice with a deficiency in CLEC-2 are protected against deep vein thrombosis.</a> Blood. 129 (14), 2013-2020 (2017).</li><li>Brill, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+extracellular+traps+promote+deep+vein+thrombosis+in+mice.">Neutrophil extracellular traps promote deep vein thrombosis in mice.</a> J Thromb Haemost. 10 (1), 136-144 (2012).</li><li>von Bruhl, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monocytes,+neutrophils,+and+platelets+cooperate+to+initiate+and+propagate+venous+thrombosis+in+mice+in+vivo.">Monocytes, neutrophils, and platelets cooperate to initiate and propagate venous thrombosis in mice in vivo.</a> J Exp Med. 209 (4), 819-835 (2012).</li><li>Sevitt, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structure+and+growth+of+valve-pocket+thrombi+in+femoral+veins.">The structure and growth of valve-pocket thrombi in femoral veins.</a> J Clin Pathol. 27 (7), 517-528 (1974).</li><li>Witsch, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+hollow+and+perforated+flexible+wire+allows+the+safe+and+effective+local+application+of+thrombolytic+therapy+in+a+mouse+model+of+deep+vein+thrombosis.">A novel hollow and perforated flexible wire allows the safe and effective local application of thrombolytic therapy in a mouse model of deep vein thrombosis.</a> J Thromb Thrombolysis. 37 (4), 450-454 (2014).</li><li>Shaya, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+the+effect+of+dabigatran+and+dalteparin+on+thrombus+stability+in+a+murine+model+of+venous+thromboembolism.">Comparison of the effect of dabigatran and dalteparin on thrombus stability in a murine model of venous thromboembolism.</a> J Thromb Haemost. 14 (1), 143-152 (2016).</li><li>Ni, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persistence+of+platelet+thrombus+formation+in+arterioles+of+mice+lacking+both+von+Willebrand+factor+and+fibrinogen.">Persistence of platelet thrombus formation in arterioles of mice lacking both von Willebrand factor and fibrinogen.</a> J Clin Invest. 106 (3), 385-392 (2000).</li><li>Wrobleski, S. K., Farris, D. M., Diaz, J. A., Myers, D. D., Wakefield, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+complete+stasis+model+of+inferior+vena+cava+thrombosis.">Mouse complete stasis model of inferior vena cava thrombosis.</a> J Vis Exp. (52), (2011).</li><li>Diaz, J. A., Farris, D. M., Wrobleski, S. K., Myers, D. D., Wakefield, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inferior+vena+cava+branch+variations+in+C57BL/6+mice+have+an+impact+on+thrombus+size+in+an+IVC+ligation+(stasis)+model.">Inferior vena cava branch variations in C57BL/6 mice have an impact on thrombus size in an IVC ligation (stasis) model.</a> J Thromb Haemost. 13 (4), 660-664 (2015).</li><li>Siefert, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+venous+thrombus+resolution+in+plasminogen+activator+inhibitor+type-2+deficient+mice.">Enhanced venous thrombus resolution in plasminogen activator inhibitor type-2 deficient mice.</a> J Thromb Haemost. 12 (10), 1706-1716 (2014).</li><li>Schulz, C., Engelmann, B., Massberg, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crossroads+of+coagulation+and+innate+immunity:+the+case+of+deep+vein+thrombosis.">Crossroads of coagulation and innate immunity: the case of deep vein thrombosis.</a> J Thromb Haemost. 11, 233-241 (2013).</li><li>Day, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrovascular+thrombosis+is+driven+by+tissue+factor+derived+primarily+from+the+blood+vessel+wall.">Macrovascular thrombosis is driven by tissue factor derived primarily from the blood vessel wall.</a> Blood. 105 (1), 192-198 (2005).</li><li>Diaz, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+fibrinolytic+system+in+ApoE+gene-deleted+mice+with+hyperlipidemia+augments+deep+vein+thrombosis.">Impaired fibrinolytic system in ApoE gene-deleted mice with hyperlipidemia augments deep vein thrombosis.</a> J Vasc Surg. 55 (3), 815-822 (2012).</li><li>Zhou, J., May, L., Liao, P., Gross, P. L., Weitz, J. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inferior+vena+cava+ligation+rapidly+induces+tissue+factor+expression+and+venous+thrombosis+in+rats.">Inferior vena cava ligation rapidly induces tissue factor expression and venous thrombosis in rats.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 29 (6), 863-869 (2009).</li><li>Diaz, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrolytic+inferior+vena+cava+model+(EIM)+of+venous+thrombosis.">Electrolytic inferior vena cava model (EIM) of venous thrombosis.</a> J Vis Exp. (53), e2737 (2011).</li><li>Diaz, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+electrolytic+inferior+vena+cava+model+(EIM)+to+study+thrombogenesis+and+thrombus+resolution+with+continuous+blood+flow+in+the+mouse.">The electrolytic inferior vena cava model (EIM) to study thrombogenesis and thrombus resolution with continuous blood flow in the mouse.</a> Thromb Haemost. 109 (6), 1158-1169 (2013).</li><li>Brill, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extrahepatic+high-density+lipoprotein+receptor+SR-BI+and+apoA-I+protect+against+deep+vein+thrombosis+in+mice.">Extrahepatic high-density lipoprotein receptor SR-BI and apoA-I protect against deep vein thrombosis in mice.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 32 (8), 1841-1847 (2012).</li><li>Diaz, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+review+of+mouse+models+of+venous+thrombosis.">Critical review of mouse models of venous thrombosis.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 32 (3), 556-562 (2012).</li><li>Brandt, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deep+vein+thrombus+formation+induced+by+flow+reduction+in+mice+is+determined+by+venous+side+branches.">Deep vein thrombus formation induced by flow reduction in mice is determined by venous side branches.</a> Clin Hemorheol Microcirc. 56 (2), 145-152 (2014).</li><li>Geddings, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strengths+and+weaknesses+of+a+new+mouse+model+of+thrombosis+induced+by+inferior+vena+cava+stenosis:+communication+from+the+SSC+of+the+ISTH.">Strengths and weaknesses of a new mouse model of thrombosis induced by inferior vena cava stenosis: communication from the SSC of the ISTH.</a> J Thromb Haemost. 12 (4), 571-573 (2014).</li><li>Alvarado, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Male+mice+have+increased+thrombotic+potential:+sex+differences+in+a+mouse+model+of+venous+thrombosis.">Male mice have increased thrombotic potential: sex differences in a mouse model of venous thrombosis.</a> Thromb Res. 127 (5), 478-486 (2011).</li></ol>

המחברים אין לחשוף.

. הנה, פרוטוקול שישקף היצרות IVC, אשר מחקה עיוות זרימת דם, גורם מפעילה מרכזי עבור DVT, מוצג. היצרות של IVC המניע לפיתוח thrombi 65-100% של C57BL/6 עכברים בתוך 48 שעות ו- 25-50% של עכברים בתוך h 2-66,8,23 (בריל A, שלא פורסמו נתונים, 2016). מגבלה משמעותית של השיטה הוא ההשתנות כגון גודל24 (איור 4), אשר נצפית לאחר היצרות (48 שעות) IVC לטווח ארוך וגם לטווח קצר (6 שעות). הסיבות השתנות כזה (בהתחשב בעובדה זהה תנאים, כגון מרווח, הרדמה וכו ', משמשים) נותרים מעורפלים. אבל אחד יכול לשער אנטומי זה וריאציות בין העכברים (לדוגמה, רוחב של IVC, מספר ומיקום של הן בצד האחורי סניפים) ביסוד התופעה. ההשתנות כגון גודל הופך את שכיחות פקקת (אחוז של עכברים עם כגון) התוצאה העיקרית. פקקת שכיחות ניתן להשוות באמצעות טבלה לשעת חירום, בדיקה מדוקדקת של פישר. באחד הניסויים היה יוצא דופן כאשר מופחתת כגון גודל עם שכיחות פקקת אותו לאחר הזרקת נוגדנים עיכוב podoplanin נצפתה 7
שיטה זו שימושית במיוחד כאשר חניכה פקקת ורידים הוא למד. היא מאפשרת חקירת האירועים בתחילת הקיר כלי, כגון גיוס של תאים, המוביל בסופו של דבר פקקת. Pro - או אנטי - thrombotic השפעות הסמים שניתן להעריך באמצעות מודל זה עם שכיחות פקקת להיות הבדיקה העיקרית. היצרות במשך 48 שעות ישימה לחשוף של פנוטיפ נגד קדחת, ואילו היצרות 6-אייץ ' יכול לשמש אם הפנוטיפ prothrombotic צפוי. ניתן גם לבצע ניתוח היסטולוגית של כגון, IVC החומה המקיפה.
השאלה אם הצד מסתעף צריך להיות מאתרים או שמאלה פטנטים נשאר פתוח. קבוצה אחת הראו כי מצדו בצד סניפים אינה מגדילה כגון גודל, מיקום של ענף צדדי קרוב יותר מאשר 1.5 מ מ לאתר מצדו IVC פוגע באופן דרמטי כגון פיתוח25. סגירת בצד סניפים עלול לגרום לפציעה אנדותל בהם, גם להאריך את הזמן של ניתוח26. בידיים שלנו, חוסר סגירת סניף צד מקטין משמעותית שכיחות פקקת (ל 10-30% לאחר 48 שעות היצרות; בריל, לא פורסם) ולכן אנו מאתרים ומפסיקים את כל גלוי בצד סניפים.
באופן אידיאלי, פקדים littermate אמור לשמש כמו עכברים, אפילו על רקע זהה אך ממקורות שונים, ייתכן השכיחות פקקת שונה במקצת. אם נלמד את ההשפעה של DVT עצמה על כל הפרמטרים (לדוגמה, הביוכימי), חיות המופעלים באמצעות העמדת פנים אמור לשמש. עכברים המופעלים שאם עוברים אותו הנוהל אבל הקשירה בסביבה IVC סגור באופן רופף והשאיר שם בלי לייצר היצרות.
הטעות בתדירות הגבוהה ביותר (שלב קריטי), פרוטוקול זה הוא מאמץ כדי להפריד בין העורקים, IVC לא בדיוק על הזווית בין כלי אבל נמוך במקצת, אשר בדרך כלל התוצאות דימום. כאשר דימום מסיבי מתרחש, התאוששות טובה של העכבר הופך לא סביר, מומלץ להפסיק את הניסוי, להרדימו. בדרך כלל, עכברים לשחזר היטב, לנוע בתוך הכלוב, לא באופן משמעותי במשקל. אנו ממליצים על שימוש בעכברים מעל 20 גרם עבור זכרים ונקבות, לשמור על בעלי חיים (בעיקר גברים) בכלובים בודדים לאחר הניתוח עד תום הניסוי כדי להימנע הלחימה ופציעה. דווח במודל אחר (אלקטרוליטי) של DVT כי עכברים זכרים לייצר thrombi גדולים יותר מאשר הנקבות27. ניתוח של הנתונים שלנו לא חשפה את הפרש משמעותי פקקת השכיחות בין זכר ונקבה עכברים (בריל, לא פורסם). לכן, חוקרים מעודדים לביצוע ניסויים באמצעות מודל היצרות IVC על עכברים של שני המינים.
מגלה הרבה תפרים או סיכות לא ניתן לפסוק כל ניסויים ארוך במיוחד (בשבוע ולא יותר). לפיכך, עכברים צריך להיבדק לפחות פעמיים ביום במיוחד עבור שלמות התפירות, תשומת לב מיוחדת יש לתת הופעת סימני דם על מצעים הכלוב.
יצוין כי, כמו מודל בעל חיים אחר, היצרות של IVC יש המגבלות מבחינת תרגום בני אדם. לדוגמה, IVCs מאתר אין שסתומים, ואילו DVT האנושי מתפתח בתוך שסתומי ורידים. כמו כן, לבני האדם יש אנכי אוריינטציה בעמוד השדרה עם המשאבה שרירים להיות מכניזם חשוב, האצת זרימת הדם בורידים. לעומת זאת, עכברים יש כיוון עמוד השדרה אופקי עם אין תפקיד של המשאבה שריר בתמיכה הדם בחזרה ללב. יש לקחת בחשבון מגבלות אלה בעת תרגום נתונים העכבר כדי המחלה האנושית.

פקקת ורידים עמוקה (DVT) היא הפיתוח של thrombi בורידים עמוקים, בדרך כלל (אך לא רק) ברגליים. ב במילות חיבור עם תסחיף ריאתי (PE; איזור ביחד כמו פקיקי ורידי, VTE) זה מתפתח אצל האמריקאים כ 900,000 מדי שנה ומייצג של חמור נושא הבריאות ובעיה חסכוני1,2. PE, סיבוך של DVT, מתרחשת כאשר כגון מקבל תלוש ממקום מושבו ההתחלתי, מגיע אל הריאות, דבר העלול לגרום אי ספיקה נשימתית ומוות. מספר ההרוגים של VTE חורג התמותה לאיידס, השד סרטן ותעבורה תאונות, משולב3.
הגורם שגורם DVT חוץ ידוע סיבות, כמו סרטן או טראומה, הוא חוסר ניידות 4,5. ייתכן שהדבר נובע מכך ניתוח (במיוחד אורטופדיות), שיתוק, טיסות למרחקים ארוכים או סיבות אחרות. זרימת הדם בורידים תלוי משאבת השרירים, לכן האיבר תוצאות הנייח בדם קיפאון לזרום פנימה שסתומי ורידים, מה שמוביל פקקת. מטרת השיטה המתוארת במסמך זה הוא מסכם את הדברים כאלה דם זרימה עיוות6,7. הגבלת זרימת חלקית ב הכלילי התחתון (IVC) מחקה התנאים שנוצרו בשסתומי ורידים האנושי ותוצאות היווצרות כגון דומה למבנה האדם thrombi6. חלק גדול כגון אדום, והיא מורכבת כדוריות דם אדומות, פיברין, התאגדות של טסיות. Thrombi יש קטן "החלק הלבן" מועשרים בטסיות הדם (איור 1), המזכירים פסי זון"המתואר thrombi ורידית אנושי. בשני חלקי כגון מכילים גם נויטרופילים8, אשר הם בין התאים הראשון בכדי להתגייס באתר של עתידיות כגון6,9. נויטרופילים בהחלק האדום לגרש מלכודות חוץ-תאית נויטרופילים (רשתות), ואילו נויטרופילים בהחלק הלבן נראה להיות רשתות8. באופן דומה ל- DVT אנושי, פקקת בעכברים מלווה פלזמה מוגבה רמות D-דיימר (איור 2). הפארין (enoxaparin), המשמש עבור טיפול מונע DVT בחולים, מונע גם פקקת בעכברים. יתרון חשוב של שיטה זו הוא היעדר חסיפה אנדותל9, שהוא מאפיין של DVT האנושי10. תכונה זו הופכת היצרות IVC דגם הרלוונטית קלינית יותר של DVT מאשר, למשל, אינדוקציה של קרישי דם על-ידי הברזל ותחמוצת כלוריד, אשר גורם אנדותל חסיפה, כאשר thrombi מכילים בעיקר טסיות11, 12,13. דגם של הקפאה מלאה ב- IVC הוא המועדף על ידי מספר קבוצות14,15,16. בניגוד היצרות, שבו זרימה שיורית נשמר בתוך הכלי, יישום של ההקפאה לחלוטין עצירה של זרימת, מגביל את הנגישות של חומרים מערכתית בניהול האתר פקקת. בנוסף, נראה כי המנגנונים שבבסיס פקקת הנגרם על ידי היצרות ו- stasis הם שונים: היצרות גורמת להתפתחות דלקת מקומית (הפעלה של אנדותל, שחרור של Weibel-Palade גוף תוכן, גיוס של תאים חיסוניים, טסיות הדם לקיר כלי) גורם9,6,"immunothrombosis"17, ואילו stasis נראה לזירוז מעדיף פקקת, בפרט, על בסיס רקמות פקטור קרישה אחרים, מנגנונים הקשורים ופיברינוליזה18,19,20. לפיכך, הדגמים היצרות ו- stasis משקפים שונה מעט היבטים של פיתוח כגון ורידים, למרות המנגנונים שלהם בהחלט לחפוף. דגם IVC electrolytic (EIM) של DVT21,22 גורם כגון באופן חלקי בלבד occluding הקיר כלי. לכן, זה נוח לבדיקת השפעת ניהול מערכתי של תרופות שונות על כגון צמיחה. מודל זה, לעומת זאת, מבוסס על ההנחה שיבוש IVC קיר שלמות (החדרת מחט) אינדוקציה של קרישי דם על ידי זרם חשמלי, שהופך את הרלוונטיות pathophysiological של מנגנון זה לפחות לויכוח.

<table><tbody><tr><td>C57BL/6 mice</td><td>Charles River</td><td></td><td>8 - 10 weeks old, bothe genders</td></tr><tr><td>Scissors</td><td>WPI</td><td>15922</td><td></td></tr><tr><td>Scissors</td><td>WPI</td><td>14003</td><td></td></tr><tr><td>Dumont 5/45 forceps</td><td>FST</td><td>11251-35</td><td></td></tr><tr><td>7-0 Prolene suture</td><td>Ethicon</td><td>W8725</td><td></td></tr><tr><td>6-0 Vicryl suture</td><td>Ethicon</td><td>W9981</td><td></td></tr><tr><td>Cotton buds</td><td>Spar</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Millswabs sterile&amp;nbsp;</td><td>Millpledge veterinary&amp;nbsp;</td><td>611950</td><td></td></tr><tr><td>Drapes</td><td>Kruuse</td><td>141765</td><td></td></tr><tr><td>Glucose Saline-Aqupharm3</td><td>Animal Care</td><td>XVD589</td><td></td></tr><tr><td>Clear H&lt;span class=&quot;font6&quot;&gt;&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;&lt;/span&gt;&lt;span class=&quot;font5&quot;&gt;0 HydroGel 98% sterile water&amp;nbsp;&lt;/span&gt;</td><td>Clearh2o</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Buprenorphine</td><td>National Veterinary Supplies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane vaporizer</td><td>General Anaesthetic Services</td><td></td><td></td></tr><tr><td>IsoFlo 100% W/W inhalation vapour, liquid</td><td>National Veterinary Supplies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sterilizer Steri350</td><td>Inotech</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscope Olympus SZX10</td><td>Olympus</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

stenosis of the inferior vena cava: a murine model of deep vein thrombosis

עמוק הווריד טרומבוזה (פקקת) וסיבוך ההרסניות שלה, תסחיף ריאתי, בעיה בריאותית חמורה עם תמותה גבוהה. מנגנוני היווצרות כגון בורידים נותרים מעורפלים. חוסר ניידות (למשל, לאחר ניתוח או טיסות למרחקים) הוא אחד הגורמים העיקריים שהובילו DVT. התוצאה pathophysiological של חוסר ניידות היא זרימת דם תקיעות שסתומי ורידים. . הנה, מודל מתואר המחקה כזה הפרעות זרימה כגורם נהיגה פקקת. במודל זה, נוצרת זרימה חלקית שהגבלת (היצרות) הכלילי התחתון (IVC). סגירה של-90% של לומן IVC במשך 48 שעות תוצאות התפתחות מבנית דומים לאלה בבני thrombi. הדמיון: i) רוב אמצעי האחסון כגון הוא אדום, קרי, מורכב כדוריות דם אדומות, פיברין, ii) נוכחות של חלק לבן (שורות זון), טפט אנדותל iii) ללא-חשופה רמות מוגברות iv) פלזמה D-דימר, v) אפשרות למנוע פקקת מאת הפארין. מגבלות כוללות גודל משתנה thrombi ואת העובדה כי אחוז מסוים של פראי-סוג עכברים (0 - 35%) לייצר כגון. בנוסף התצפית הויזואלית מדידה, thrombi אולי ניתן לאבחן על ידי טכנולוגיות לא פולשנית, כגון בדיקת אולטרה סאונד, אשר מאפשר ניטור את הדינמיקה של התפתחות כגון. נקודות זמן קצר יותר (h 1-6), מיקרוסקופיה intravital ניתן להחיל ישירות לצפות אירועים (למשל, גיוס של תאים לקיר כלי) מקדים כגון היווצרות. השימוש בשיטה זו על-ידי מספר צוותים ברחבי העולם הפכה אותו ניתן לחשוף מנגנונים בסיסיים של DVT החניכה לזהות מטרות אפשריות שעשוי להיות מועיל עבור מניעת שלו.

במסמך זה, מתואר דגם של DVT הנגרמת על ידי זרימת עיוות IVC. אינדוקציה של היצרות ב- IVC יוזם עיוות ותוצאות סטגנציה של זרימת הדם, לאחר זמן מה (במקרה זה, 48 h) בפיתוח של כגון, DVT מבנית דומה האדם thrombi (איור 1א'). הנוכחות של כגון בפנים IVC היא בקלות לזיהוי חזותי (איור 1B). הדמיון חשוב בין המודל לבין DVT האנושי הוא פלזמה מוגבה רמות D-דיימר (איור 2). D-דיימר הוא תוצר של פיברין השפלה, נוכחותו בדם מרמז כי תהליך קדחת פעיל קורה.
המודל מוצג שלב אחר שלב איור 3A-C. IVC חשוף בקפידה, חור בין העורקים של IVC מורכב ומשך התפר (Prolene 7-0) הוא דרך החור מתחת IVC. ואז IVC זה מאתרים מאת התפר מעל כרווח (30 גרם המחט, איור 3ד'), אחרי אשר מוסר את מרווח. הליך זה מאפשר כ- 90% סגירה של לומן IVC להשאיר 10% הנותרים פטנטים. פעולה זו מבטיחה סטגנציה בזרימת הדם המוביל בסופו של דבר פקקת.
איור 4 מדגים החיסרון העיקרי של המודל, כגון משתנה גודל. כל אלה thrombi התקבלו אצל אותו ניסוי מתבצע על עכברים זכר פראי סוג של מקור אחד, גיל, משקל הגוף דומה. למרות כל העכברים המיוצר thrombi (פקקת השכיחות של 100%), הגודל שלהם משתנה בבירור במגוון רחב.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56697/56697fig1.jpg"> 
איור 1: כגון נציג לאחר 48 שעות ההגבלה/היצרות. היצרות (A) כגון טיפוסי לאחר 48 שעות IVC. שימו לב אדום (שאושרו על-ידי תאי הדם האדומים) וחלקים לבן (מועשר טסיות). IVC (B) (משמאל) עם או בלי (מימין) כגון. גודל ברים = 2 מ מ. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56697/56697fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56697/56697fig2.jpg"> 
איור 2 : פלזמה D-דיימר רמות גבוהות לאחר היישום היצרות IVC. עכברים היו נענשים היצרות IVC. הדם נלקח בנקודות זמן המצוין, 1:9 התייצב עם 3.8% סודיום ציטרט, פלזמה הוכן על ידי צנטריפוגה (2,300 x g, 5 דקות), רמות D-דיימר נקבעו על ידי ערכת דיאגנוסטיקה לפי הנחיות היצרן. חוגים לייעד עכברים המופעלים באמצעות העמדת פנים, צלבים לייעד היצרות IVC. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56697/56697fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56697/56697fig3.jpg"> 
איור 3: לזרום הגבלת/היצרות במודל הנבוב נחות (IVC) של DVT בעכברים. שלבים רצופים של המודל מוצגים. (א) עשוי חור בין IVC את העורקים, בתפר עשה דרכו בסביבה IVC. (B) קשר סגורה מעל כרווח (30 גרם מחט). (C) מרווח מוסרת: התצוגה האחרונה המנתח רואה לפני סגירת העכבר. קו מקווקו צהוב demarcates של IVC. אירוו עומד על וריד הכליה השמאלית. גודל ברים = 0.2 מ מ. (ד) מרווח (30 גרם מחט). גודל ברים = 2 מ מ. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56697/56697fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56697/56697fig4.jpg"> 
איור 4 . השתנות כגון גודל. עכברים היו נענשים היצרות IVC 48 שעות. הציג thrombi מתקבלים על אותו ניסוי. סולם ברים 2 מ מ. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56697/56697fig4large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Stenosis of the Inferior Vena Cava: A Murine Model of Deep Vein Thrombosis at JoVE.com

Stenosis of the Inferior Vena Cava: A Murine Model of Deep Vein Thrombosis

נתאר כאן היצרות ב הכלילי התחתון כמודל מאתר של פקקת ורידים עמוקה. מודל זה recapitulates הגבלת זרימת דם, אחד הגורמים המפעילים העיקריים של פקקת ורידים בבני אדם.

היצרות של הכלילי התחתון: מודל מאתר של פקקת ורידים עמוקה

Deep vein thrombosis (DVT) and its devastating complication, pulmonary embolism, are a severe health problem with high mortality. Mechanisms of thrombus ...

stenosis-inferior-vena-cava-murine-model-deep-vein

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

23.9K Views.  University of Birmingham. נתאר כאן היצרות ב הכלילי התחתון כמודל מאתר של פקקת ורידים עמוקה. מודל זה recapitulates הגבלת זרימת דם, אחד הגורמים המפעילים העיקריים של פקקת ורידים בבני אדם.

Video: Stenosis of the Inferior Vena Cava: A Murine Model of Deep Vein Thrombosis

Murine Model of CD40-activation of B cells

Research on B cells has shown that CD40 activation improves their antigen presentation capacity. When stimulated with interleukin-4 and CD40 ligand (CD40L), human B cells can be expanded without difficulties from small amounts of peripheral blood within 14 days to very large amounts of highly-pure CD40-B cells (&gt;109 cells per patient) from healthy donors as well as cancer patients1-4. CD40-B cells express important lymph node homing molecules and can attract T cells in vitro5. Furthermore they efficiently take up, process and present antigens to T cells6,7. CD40-B cells were shown to not only prime na&iacute;ve, but also expand memory T cells8,9. Therefore CD40-activated B cells (CD40-B cells) have been studied as an alternative source of immuno-stimulatory antigen-presenting cells (APC) for cell-based immunotherapy1,5,10. In order to further study whether CD40-B cells induce effective T cell responses in vivo and to study the underlying mechanism we established a cell culture system for the generation of murine CD40-activated B cells. Using splenocytes or purified B cells from C57BL/6 mice for CD40-activation, optimal conditions were identified as follows: Starting from splenocytes of C57BL/6 mice (haplotype H-2b) lymphocytes are purified by density gradient centrifugation and co-cultured with HeLa cells expressing recombinant murine CD40 ligand (tmuCD40L HeLa)11. Cells are recultured every 3-4 days and key components such as CD40L, interleukin-4, -Mercaptoethanol and cyclosporin A are replenished. In this protocol we demonstrate how to obtain fully activated murine CD40-B cells (mCD40B) with similar APC-phenotype to human CD40-B cells (Fig 1a,b). CD40-stimulation leads to a rapid outgrowth and expansion of highly pure (&gt;90%) CD19+ B cells within 14 days of cell culture (Fig 1c,d). To avoid contamination with non-transfected cells, expression of the murine CD40 ligand on the transfectants has to be controlled regularly (Fig 2). Murine CD40-activated B cells can be used to study B-cell activation and differentiation as well as to investigate their potential to function as APC in vitro and in vivo. Moreover, they represent a promising tool for establishing therapeutic or preventive vaccination against tumors and will help to answer questions regarding safety and immunogenicity of this approach12.

In this video, we demonstrate the procedure of CD40-activation and expansion of murine B cells from splenocytes of C57BL/6 mice, which can be used as a model antigen-presenting cell (APC) to study induction of immunity.

דגם Murine של הפעלת-CD40 בתאי B

Research on B cells has shown that CD40 activation improves their antigen presentation capacity. When stimulated with interleukin-4 and CD40 ligand ...

Electrolytic Inferior Vena Cava Model (EIM) of Venous Thrombosis

Animal models serve a vital role in deep venous thrombosis (DVT) research in order to study thrombus formation, thrombus resolution and to test potential therapeutic compounds (1). New compounds to be utilized in the treatment and prevention of DVT are currently being developed. The delivery of potential therapeutic antagonist compounds to an affected thrombosed vein has been problematic. In the context of therapeutic applications, a model that uses partial stasis and consistently generates thrombi within a major vein has been recently established. The Electrolytic Inferior vena cava Model (EIM) is mouse model of DVT that permits thrombus formation in the presence of continuous blood flow. This model allows therapeutic agents to be in contact with the thrombus in a dynamic fashion, and is more sensitive than other models of DVT (1). In addition, this thrombosis model closely simulates clinical situations of thrombus formation and is ideal to study venous endothelial cell activation, leukocyte migration, venous thrombogenesis, and to test therapeutic applications (1). The EIM model is technically simple, easily reproducible, creates consistent thrombi sizes and allows for a large sample (i.e. thrombus and vein wall) which is required for analytical purposes.

Electrolytic Inferior Vena Cava Model EIM of Venous Thrombosis

The electrolytic induction of endothelial activation to the internal surface of the Inferior Vena Cava results in venous type thrombus formation due to endothelial activation and partial blood stasis, two components of Virchow's triad.

אלקטרוליטי נחותים הווריד הנבוב Model (EIM) של פקקת ורידים

Animal models serve a vital role in deep venous thrombosis (DVT) research in order to study thrombus formation, thrombus resolution and to test potential ...

Medicine

Mouse Complete Stasis Model of Inferior Vena Cava Thrombosis

Venous thromboembolism (VTE) includes both deep vein thrombosis (DVT) and pulmonary embolism (PE). In the United States (U.S.), the high morbidity and mortality rates make VTE a serious health concern 1-2. After heart disease and stroke, VTE is the third most common vascular disease 3. In the U.S. alone, there is an estimated 900,000 people affected each year, with 300,000 deaths occurring annually 3. A reliable in vivo animal model to study the mechanisms of this disease is necessary.
The advantages of using the mouse complete stasis model of inferior vena cava thrombosis are several. The mouse model allows for the administration of very small volumes of limited availability test agents, reducing costs dramatically. Most promising is the potential for mice with gene knockouts that allow specific inflammatory and coagulation factor functions to be delineated. Current molecular assays allow for the quantitation of vein wall, thrombus, whole blood, and plasma for assays. However, a major concern involving this model is the operative size constraints and the friability of the vessels. Also, due to the small IVC sample weight (mean 0.005 grams) it is necessary to increase animal numbers for accurate statistical analysis for tissue, thrombus, and blood assays such as real-time polymerase chain reaction (RT-PCR), western blot, enzyme-linked immunosorbent (ELISA), zymography, vein wall and thrombus cellular analysis, and whole blood and plasma assays 4-8.
The major disadvantage with the stasis model is that the lack of blood flow inhibits the maximal effect of administered systemic therapeutic agents on the thrombus and vein wall.

The mouse complete stasis model of inferior vena cava thrombosis yields quantifiable amounts of vein wall tissue and thrombus. It has proven useful for evaluating interactions between the vein wall and the occlusive thrombus and in assessing the progression from acute to chronic inflammation.

עכבר דגם השלם הקיפאון של פקקת נחותים הווריד הנבוב

Venous thromboembolism (VTE) includes both deep vein thrombosis (DVT) and pulmonary embolism (PE).  In the United States (U.S.), the high morbidity and ...

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Graft-versus-host disease (GVHD) is the limiting barrier to the broad use of bone marrow transplant as a curative therapy for a variety of hematological deficiencies. GVHD is caused by mature alloreactive T cells present in the bone marrow graft that are infused into the recipient and cause damage to host organs. However, in mice, T cells must be added to the bone marrow inoculum to cause GVHD. Although extensive work has been done to characterize T cell responses post transplant, bioluminescent imaging technology is a non-invasive method to monitor T cell trafficking patterns in vivo. 
Following lethal irradiation, recipient mice are transplanted with bone marrow cells and splenocytes from donor mice. T cell subsets from L2G85.B6 (transgenic mice that constitutively express luciferase) are included in the transplant. By only transplanting certain T cell subsets, one is able to track specific T cell subsets in vivo, and based on their location, develop hypotheses regarding the role of specific T cell subsets in promoting GVHD at various time points. At predetermined intervals post transplant, recipient mice are imaged using a Xenogen IVIS CCD camera. Light intensity can be quantified using Living Image software to generate a pseudo-color image based on photon intensity (red = high intensity, violet = low intensity). 
Between 4-7 days post transplant, recipient mice begin to show clinical signs of GVHD. Cooke et al.1 developed a scoring system to quantitate disease progression based on the recipient mice fur texture, skin integrity, activity, weight loss, and posture. Mice are scored daily, and euthanized when they become moribund. Recipient mice generally become moribund 20-30 days post transplant. 
Murine models are valuable tools for studying the immunology of GVHD. Selectively transplanting particular T cell subsets allows for careful identification of the roles each subset plays. Non-invasively tracking T cell responses in vivo adds another layer of value to murine GVHD models.

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Murine bone marrow transplantation is a widely used technique to study immunological mechanisms governing graft-versus-host disease in humans. The ability to monitor T cell trafficking patterns in vivo allows for detailed analysis of the development and perpetuation of T cell responses during graft-versus-host disease.

אינדוקציה של מחלת שתל נגד מארח ו<em&gt; In Vivo</em&gt; ניטור תא T תוך שימוש במודל Murine MHC התאמה

Graft-versus-host disease (GVHD) is the limiting barrier to the broad use of bone marrow transplant as a curative therapy for a variety of hematological ...

Murine Model of Allergen Induced Asthma

Asthma is a major cause of morbidity and mortality, affecting some 300 million people throughout the world.1 More than 8% of the US population has asthma, with the prevalence increasing.2 As with other diseases, animal models of allergic airway disease greatly facilitate understanding of the underlying pathophysiology, help identify potential therapeutic targets, and allow preclinical testing of possible new therapies. Models of allergic airway disease have been developed in several animal species, but murine models are particularly attractive due to the low cost, ready availability, and well-characterized immune systems of these animals.3 Availability of a variety of transgenic strains further increases the attractiveness of these models.4 Here we describe two murine models of allergic airway disease, both employing ovalbumin as the antigen. Following initial sensitization by intraperitoneal injection, one model delivers the antigen challenge by nebulization, the other by intratracheal delivery. These two models offer complementary advantages, with each mimicking the major features of human asthma.5
The major features of acute asthma include an exaggerated airway response to stimuli such as methacholine (airway hyperresponsiveness; AHR) and eosinophil-rich airway inflammation. These are also prominent effects of allergen challenge in our murine models,5,6 and we describe techniques for measuring them and thus evaluating the effects of experimental manipulation. Specifically, we describe both invasive7 and non-invasive8 techniques for measuring airway hyperresponsiveness as well as methods for assessing infiltration of inflammatory cells into the airways and the lung. Airway inflammatory cells are collected by bronchoalveolar lavage while lung histopathology is used to assess markers of inflammation throughout the organ. These techniques provide powerful tools for studying asthma in ways that would not be possible in humans.

Experimental mouse models of allergic asthma offer new possibilities for studying disease pathogenesis and developing new therapeutics. These models are well suited to measuring factors governing the allergic immune response, airway inflammation, and pulmonary pathophysiology.

דגם Murine של אסטמה אלרגן מושרה

Asthma is a major cause of morbidity and mortality, affecting some 300 million people throughout the world.1 More than 8% of the US population has asthma, ...

Implantation of Inferior Vena Cava Interposition Graft in Mouse Model

Biodegradable scaffolds seeded with bone marrow mononuclear cells (BMCs) are often used for reconstructive surgery to treat congenital cardiac anomalies. The long-term clinical results showed excellent patency rates, however, with significant incidence of stenosis. To investigate the cellular and molecular mechanisms of vascular neotissue formation and prevent stenosis development in tissue engineered vascular grafts (TEVGs), we developed a mouse model of the graft with approximately 1 mm internal diameter. First, the TEVGs were assembled from biodegradable tubular scaffolds fabricated from a polyglycolic acid nonwoven felt mesh coated with &#949;-caprolactone and L-lactide copolymer. The scaffolds were then placed in a lyophilizer, vacuumed for 24 hr, and stored in a desiccator until cell seeding. Second, bone marrow was collected from donor mice and mononuclear cells were isolated by density gradient centrifugation. Third, approximately one million cells were seeded on a scaffold and incubated O/N. Finally, the seeded scaffolds were then implanted as infrarenal vena cava interposition grafts in C57BL/6 mice. The implanted grafts demonstrated excellent patency (&#62;90%) without evidence of thromboembolic complications or aneurysmal formation. This murine model will aid us in understanding and quantifying the cellular and molecular mechanisms of neotissue formation in the TEVG.

To improve our knowledge of cellular and molecular neotissue formation, a murine model of the TEVG was recently developed. The grafts were implanted as infrarenal vena cava interposition grafts in C57BL/6 mice. This model achieves similar results to those achieved in our clinical investigation, but over a far shortened time-course.

השתלה של וריד נבוב חציצת שתל נחותה בעכבר דגם

Biodegradable scaffolds seeded with bone marrow mononuclear cells (BMCs) are often used for reconstructive surgery to treat congenital cardiac anomalies. ...

בדיקת פקקת ורידית אופטימלית במודל סרטן עכבר באמצעות קליפסים וסקולריים

Venous Thrombosis Assay in a Mouse Model of Cancer

This methodology paper highlights the surgical nuances of a rodent model of venous thrombosis, specifically in the context of cancer-associated thrombosis (CAT). Deep venous thrombosis is a common complication in cancer survivors and can be potentially fatal. The current murine venous thrombosis models typically involve a complete or partial mechanical occlusion of the inferior vena cava (IVC) using a suture. This procedure induces a total or partial stasis of blood and endothelial damage, triggering thrombogenesis. The current models have limitations such as higher variability in clot weights, significant mortality rate, and prolonged learning curve. This report introduces surgical refinements using vascular clips to address some of these limitations. Using a syngeneic colon cancer xenograft mouse model, we employed customized vascular clips to ligate the infrarenal vena cava. These clips allow residual lip space similar to a 5-0 polypropylene suture after IVC ligations. Mice with the suture method served as controls. The vascular clip method resulted in a consistent reproducible partial vascular occlusion and greater clot weights with less variability than the suture method. The larger clot weights, greater clot mass, and clot to the IVC luminal surface area were expected due to the higher pressure profile of the vascular clips compared to a 6-0 polypropylene suture. The approach was validated by gray scale ultrasonography, which revealed consistently greater clot mass in the infrarenal vena cava with vascular clips compared to the suture method. These observations were further substantiated with the immunofluorescence staining. This study offers an improved method to generate a venous thrombosis model in mice, which can be employed to deepen the mechanistic understanding of CAT and in translational research such as drug discovery.

מחבר זרקור: קידום מחקר פקקת הקשורה לסרטן במודלים של מכרסמים 

This article aims to present an optimized method for assessing venous thrombosis in a mouse cancer model, using vascular clips to achieve venous ligation. Optimization minimizes variability in thrombosis-related measurements and enhances relevance to human cancer-associated venous thrombosis.

בדיקת פקקת ורידית במודל עכבר של סרטן

This methodology paper highlights the surgical nuances of a rodent model of venous thrombosis, specifically in the context of cancer-associated thrombosis ...

Cancer Research

Deep Vein Thrombosis Induced by Stasis in Mice Monitored by High Frequency Ultrasonography

Venous thrombosis is a common condition affecting 1 - 2% of the population, with an annual incidence of 1 in 500. Venous thrombosis can lead to death through pulmonary embolism or results in the post-thrombotic syndrome, characterized by chronic leg pain, swelling, and ulceration, or in chronic pulmonary hypertension resulting in significant chronic respiratory compromise. This is the most common cardiovascular disease after myocardial infarction and ischemic stroke and is a clinical challenge for all medical disciplines, as it can complicate the course of other disorders such as cancer, systemic disease, surgery, and major trauma.
Experimental models are necessary to study these mechanisms. The stasis model induces consistent thrombus size and a quantifiable amount of thrombus. However, it is necessary to systematically ligate side branches of the inferior vena cava to avoid variability in thrombus sizes and any erroneous data interpretation. We have developed a non-invasive technique to measure thrombus size using ultrasonography. Using this technique, we can assess thrombus development and resolution over time in the same animal. This approach limits the number of mice required for quantification of venous thrombosis consistent with the principle of replacement, reduction, and refinement of animals in research. We have demonstrated that thrombus weight and histological analysis of thrombus size correlate with measurement obtained with ultrasonography. Therefore, the current study describes how to induce deep vein thrombosis in mice using the inferior vena cava stasis model and how to monitor it using high frequency ultrasound.

The present protocol describes the steps to obtain venous thrombosis using a stasis model. In addition, we are using a non-invasive method to measure thrombus formation and resolution over time.

פקקת ורידים עמוקה שנגזרות Stasis בעכברים המנוטרת על-ידי בדיקת אולטרה סאונד בתדירות גבוהה

Venous thrombosis is a common condition affecting 1 - 2% of the population, with an annual incidence of 1 in 500. Venous thrombosis can lead to death ...

היצרות של הכלילי התחתון: מודל מאתר של פקקת ורידים עמוקה

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

דגם Murine של הפעלת-CD40 בתאי B

אלקטרוליטי נחותים הווריד הנבוב Model (EIM) של פקקת ורידים

עכבר דגם השלם הקיפאון של פקקת נחותים הווריד הנבוב

אינדוקציה של מחלת שתל נגד מארח ו

דגם Murine של אסטמה אלרגן מושרה

השתלה של וריד נבוב חציצת שתל נחותה בעכבר דגם

בדיקת פקקת ורידית במודל עכבר של סרטן

בדיקת פקקת ורידית במודל עכבר של סרטן

בדיקת פקקת ורידית במודל עכבר של סרטן

פקקת ורידים עמוקה שנגזרות Stasis בעכברים המנוטרת על-ידי בדיקת אולטרה סאונד בתדירות גבוהה