Name: stenosis of the inferior vena cava: a murine model of deep vein thrombosis
Uploaded: 2017-12-22T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 37 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Stenosis of the Inferior Vena Cava: A Murine Model of Deep Vein Thrombosis at JoVE.com

Questo lavoro è stato supportato dalla British Heart Foundation (PG/13/60/30406) e l'Università di Birmingham.

Tutte le procedure di animali sono state approvate da Animal Welfare etico Review Body e l'ufficio di casa UK (Regno Unito, progetto licenza 40/3745). Vengono utilizzati topi su fondo C57BL/6, 8-12 settimane vecchia, 19-25 g di peso di corpo, di entrambi i sessi.
1. animale anestesia
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	<li>Posizionare il mouse in una camera di induzione e inducono anestesia da una miscela di 5% isoflurane con ossigeno al 100%. Uso una portata di 0,5 L/min attendere fino a quando il mouse si ferma completamente lo spostamento e la sua frequenza di respirazione diventa rara.</li>
	<li>Rimuovere il mouse dalla camera e Radere l'addome con una tosatrice elettrica. Rimuovere i capelli dall'addome nel miglior modo possibile per evitare la contaminazione della cavità addominale.</li>
	<li>Posizionare il mouse nella posizione supina e posizionare il naso del mouse in un cono collegato al sistema di anestesia. Ridurre la percentuale di isoflurane per 2-3% (la percentuale esatta potrebbe differire leggermente da animale ad animale). Assicurarsi che l'animale sta dormendo con il suo tasso respiratorio inferiori al solito ma evitando ansimante. Se ansimante si verifica, è possibile diminuire la percentuale di isoflurane dello 0,5%.
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		<li>Controllare il riflesso pedale per confermare la corretta amputate e iniziare chirurgia solo se è negativo. Applicare unguento veterinario sugli occhi per prevenire la secchezza.</li>
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	<li>Applicare una soluzione anti-battericida (1% Hibitane) del mouse addome e pulire l'area con un cotone sterile bud in modo escluse potenziali ricontaminazione del sito chirurgico (ad esempio, all'interno di fuori in modo circolare). Ripetere 3 volte.</li>
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2. applicazione della IVC stenosi e recupero del Mouse
Nota: Tutti gli strumenti anche come materiali (bastoncini di cotone, garza, saline ecc.), venendo in contatto con l'area di intervento devono essere sterile. L'operatore deve prima della chirurgia e usufruite e indossare guanti sterili e camice durante la procedura. Maniglie di microscopio devono essere avvolto in una pellicola sterile.
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	<li>Dare topi un trattamento anti-dolore prima dell'intervento e durante l'intero periodo sperimentale. Ad esempio, utilizzare buprenorfina 0,1 mg/kg per via sottocutanea 30 min prima della chirurgia e poi ogni 12 ore fino a quando l'animale è eutanasia. Come trombosi in questo metodo si sviluppa similmente ad infiammazione sterile, evitare di utilizzare farmaci anti-infiammatori come una premedicazione.</li>
	<li>Coprire il mouse con un telino sterile e fare un buco nel drappo per esporre il sito della chirurgia. Utilizzando le forbici, fare un'incisione lungo la linea mediana addominale, 1,5 cm giù dallo sterno. Utilizzando bastoncini ovattati esternare gli intestini al lato sinistro del mouse e coprire con garza sterile imbevuta di soluzione fisiologica tiepida (37 ° C) per evitare disidratazione.</li>
	<li>Identificare il IVC e suoi rami laterali (ci possono essere 0, 1 o 2 di loro) in direzione caudale dal sito di fusione del IVC con la vena renale di sinistra. Legare tutti i rami laterali visibili con i suturare Prolene inerti 7-0 come vicino il IVC come possibile.
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		<li>Cercare di non tenere i rami laterali con il forcipe direttamente, ma piuttosto li tirare verso l'alto tenendo il tessuto adiposo che li circonda con il forcipe in una mano e fare un tunnel sotto il ramo con il forcipe in altra mano. Non chiudere rami posteriore.</li>
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	</li>
	<li>Detenzione dei tessuti circostanti con il forcipe, tirare la IVC fino e sinistra producendo tensione nella piccola area tra il IVC e l'aorta esattamente all'angolo tra il IVC e la vena renale di sinistra. Tener conto che è praticamente impossibile separare l'aorta da IVC anche 2-3 mm di sotto (in direzione caudale).</li>
	<li>Utilizzando movimenti divergenti con punte di forcipe in vostra mano destra fanno un buco tra l'aorta e l'IVC. Tenete a mente che i movimenti più fatti, maggiore è la probabilità di danneggiare la nave. Idealmente, cercare di ridurre al minimo il numero di movimenti per 3-5.</li>
	<li>Preparare un pezzo di sutura in Prolene inerti 7-0 di circa 2 cm di lunghezza. Inserirlo nella cavità peritoneale del mouse sul lato sinistro dell'operatore nelle vicinanze di IVC.</li>
	<li>Tirare il IVC su e sinistra nuovamente. Inserire vostre punte della pinza destra nel foro fra l'aorta e l'IVC affinché i suggerimenti visualizzati sul lato opposto del IVC. Prendere la sutura e tirarlo indietro attraverso il foro (Figura 3A).</li>
	<li>Fare un nodo provvisorio con la sutura, ma non chiuderlo. Posizionare l'ago 30g ("un distanziatore") piegato come un gancio nel nodo e adesso chiudete (Figura 3B).</li>
	<li>Rimuovere il distanziale (Figura 3C).</li>
	<li>Restituire l'intestino torna alla cavità peritoneale con un cotone bud e distribuirli equamente in esso.</li>
	<li>Chiudere peritoneo con sutura vicryl 6-0 l'utilizzo di loop continuo. Chiudere il primo e l'ultimo loop come un nodo.</li>
	<li>Pelle vicina mediante graffe metalliche.</li>
	<li>Iniettare il mouse con 0,5 mL di caldo (37 ° C) soluzione fisiologica di glucosio per via sottocutanea a ripristinare l'equilibrio di liquido dell'organismo.</li>
	<li>Posizionare il mouse in una gabbia individuale in camera o camera calda (25 ° C) e mettere il cibo e acqua all'interno della gabbia del gel. Osservare fino a quando il mouse è completamente recuperato (in genere, circa 1 h).</li>
</ol>

<ol>
	<li>Heit, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+epidemiology+of+venous+thromboembolism+in+the+community.">The epidemiology of venous thromboembolism in the community.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 28 (3), 370-372 (2008).</li><li>Huang, W., Goldberg, R. J., Anderson, F. A., Kiefe, C. I., Spencer, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Secular+trends+in+occurrence+of+acute+venous+thromboembolism:+the+Worcester+VTE+study+(1985-2009).">Secular trends in occurrence of acute venous thromboembolism: the Worcester VTE study (1985-2009).</a> Am J Med. 127 (9), 829-839 (2014).</li><li>House of Commons Health Care Committee. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Prevention+of+Venous+Thromboembolism+in+Hospitalised+patients.">The Prevention of Venous Thromboembolism in Hospitalised patients.</a> The House of Commons. , (2005).</li><li>Kuipers, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Travel+and+venous+thrombosis:+a+systematic+review.">Travel and venous thrombosis: a systematic review.</a> J Intern Med. 262 (6), 615-634 (2007).</li><li>Lopez, J. A., Chen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiology+of+venous+thrombosis.">Pathophysiology of venous thrombosis.</a> Thromb Res. 123, 30-34 (2009).</li><li>Brill, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=von+Willebrand+factor-mediated+platelet+adhesion+is+critical+for+deep+vein+thrombosis+in+mouse+models.">von Willebrand factor-mediated platelet adhesion is critical for deep vein thrombosis in mouse models.</a> Blood. 117 (4), 1400-1407 (2011).</li><li>Payne, H., Ponomaryov, T., Watson, S. P., Brill, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mice+with+a+deficiency+in+CLEC-2+are+protected+against+deep+vein+thrombosis.">Mice with a deficiency in CLEC-2 are protected against deep vein thrombosis.</a> Blood. 129 (14), 2013-2020 (2017).</li><li>Brill, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+extracellular+traps+promote+deep+vein+thrombosis+in+mice.">Neutrophil extracellular traps promote deep vein thrombosis in mice.</a> J Thromb Haemost. 10 (1), 136-144 (2012).</li><li>von Bruhl, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monocytes,+neutrophils,+and+platelets+cooperate+to+initiate+and+propagate+venous+thrombosis+in+mice+in+vivo.">Monocytes, neutrophils, and platelets cooperate to initiate and propagate venous thrombosis in mice in vivo.</a> J Exp Med. 209 (4), 819-835 (2012).</li><li>Sevitt, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structure+and+growth+of+valve-pocket+thrombi+in+femoral+veins.">The structure and growth of valve-pocket thrombi in femoral veins.</a> J Clin Pathol. 27 (7), 517-528 (1974).</li><li>Witsch, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+hollow+and+perforated+flexible+wire+allows+the+safe+and+effective+local+application+of+thrombolytic+therapy+in+a+mouse+model+of+deep+vein+thrombosis.">A novel hollow and perforated flexible wire allows the safe and effective local application of thrombolytic therapy in a mouse model of deep vein thrombosis.</a> J Thromb Thrombolysis. 37 (4), 450-454 (2014).</li><li>Shaya, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+the+effect+of+dabigatran+and+dalteparin+on+thrombus+stability+in+a+murine+model+of+venous+thromboembolism.">Comparison of the effect of dabigatran and dalteparin on thrombus stability in a murine model of venous thromboembolism.</a> J Thromb Haemost. 14 (1), 143-152 (2016).</li><li>Ni, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persistence+of+platelet+thrombus+formation+in+arterioles+of+mice+lacking+both+von+Willebrand+factor+and+fibrinogen.">Persistence of platelet thrombus formation in arterioles of mice lacking both von Willebrand factor and fibrinogen.</a> J Clin Invest. 106 (3), 385-392 (2000).</li><li>Wrobleski, S. K., Farris, D. M., Diaz, J. A., Myers, D. D., Wakefield, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+complete+stasis+model+of+inferior+vena+cava+thrombosis.">Mouse complete stasis model of inferior vena cava thrombosis.</a> J Vis Exp. (52), (2011).</li><li>Diaz, J. A., Farris, D. M., Wrobleski, S. K., Myers, D. D., Wakefield, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inferior+vena+cava+branch+variations+in+C57BL/6+mice+have+an+impact+on+thrombus+size+in+an+IVC+ligation+(stasis)+model.">Inferior vena cava branch variations in C57BL/6 mice have an impact on thrombus size in an IVC ligation (stasis) model.</a> J Thromb Haemost. 13 (4), 660-664 (2015).</li><li>Siefert, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+venous+thrombus+resolution+in+plasminogen+activator+inhibitor+type-2+deficient+mice.">Enhanced venous thrombus resolution in plasminogen activator inhibitor type-2 deficient mice.</a> J Thromb Haemost. 12 (10), 1706-1716 (2014).</li><li>Schulz, C., Engelmann, B., Massberg, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crossroads+of+coagulation+and+innate+immunity:+the+case+of+deep+vein+thrombosis.">Crossroads of coagulation and innate immunity: the case of deep vein thrombosis.</a> J Thromb Haemost. 11, 233-241 (2013).</li><li>Day, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrovascular+thrombosis+is+driven+by+tissue+factor+derived+primarily+from+the+blood+vessel+wall.">Macrovascular thrombosis is driven by tissue factor derived primarily from the blood vessel wall.</a> Blood. 105 (1), 192-198 (2005).</li><li>Diaz, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+fibrinolytic+system+in+ApoE+gene-deleted+mice+with+hyperlipidemia+augments+deep+vein+thrombosis.">Impaired fibrinolytic system in ApoE gene-deleted mice with hyperlipidemia augments deep vein thrombosis.</a> J Vasc Surg. 55 (3), 815-822 (2012).</li><li>Zhou, J., May, L., Liao, P., Gross, P. L., Weitz, J. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inferior+vena+cava+ligation+rapidly+induces+tissue+factor+expression+and+venous+thrombosis+in+rats.">Inferior vena cava ligation rapidly induces tissue factor expression and venous thrombosis in rats.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 29 (6), 863-869 (2009).</li><li>Diaz, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrolytic+inferior+vena+cava+model+(EIM)+of+venous+thrombosis.">Electrolytic inferior vena cava model (EIM) of venous thrombosis.</a> J Vis Exp. (53), e2737 (2011).</li><li>Diaz, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+electrolytic+inferior+vena+cava+model+(EIM)+to+study+thrombogenesis+and+thrombus+resolution+with+continuous+blood+flow+in+the+mouse.">The electrolytic inferior vena cava model (EIM) to study thrombogenesis and thrombus resolution with continuous blood flow in the mouse.</a> Thromb Haemost. 109 (6), 1158-1169 (2013).</li><li>Brill, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extrahepatic+high-density+lipoprotein+receptor+SR-BI+and+apoA-I+protect+against+deep+vein+thrombosis+in+mice.">Extrahepatic high-density lipoprotein receptor SR-BI and apoA-I protect against deep vein thrombosis in mice.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 32 (8), 1841-1847 (2012).</li><li>Diaz, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+review+of+mouse+models+of+venous+thrombosis.">Critical review of mouse models of venous thrombosis.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 32 (3), 556-562 (2012).</li><li>Brandt, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deep+vein+thrombus+formation+induced+by+flow+reduction+in+mice+is+determined+by+venous+side+branches.">Deep vein thrombus formation induced by flow reduction in mice is determined by venous side branches.</a> Clin Hemorheol Microcirc. 56 (2), 145-152 (2014).</li><li>Geddings, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strengths+and+weaknesses+of+a+new+mouse+model+of+thrombosis+induced+by+inferior+vena+cava+stenosis:+communication+from+the+SSC+of+the+ISTH.">Strengths and weaknesses of a new mouse model of thrombosis induced by inferior vena cava stenosis: communication from the SSC of the ISTH.</a> J Thromb Haemost. 12 (4), 571-573 (2014).</li><li>Alvarado, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Male+mice+have+increased+thrombotic+potential:+sex+differences+in+a+mouse+model+of+venous+thrombosis.">Male mice have increased thrombotic potential: sex differences in a mouse model of venous thrombosis.</a> Thromb Res. 127 (5), 478-486 (2011).</li></ol>

Gli autori non hanno nulla a rivelare.

Qui, un protocollo della stenosi IVC, che imita la distorsione del flusso di sangue, un importante fattore scatenante per la TVP, è presentato. Stenosi del IVC induce lo sviluppo di trombi nel 65-100% dei topi C57BL/6 entro 48 h e 25-50% dei topi all'interno di 2-6 h6,8,23 (Brill A, dati non pubblicati, 2016). Una limitazione importante del metodo è la variabilità dell'embolo dimensioni24 (Figura 4), che si osserva dopo sia a breve termine (6 h) e a lungo termine (48 h) IVC stenosi. Le ragioni di tale variabilità (dato che le stesse condizioni, come ad esempio il distanziale, anestesia ecc., sono utilizzati) rimangono oscuri, ma si può speculare che anatomiche variazioni tra i topi (ad es., larghezza della IVC, numero e posizione di sia laterali e posteriori rami) sono alla base di questo fenomeno. La variabilità nella dimensione del trombo rende prevalenza di trombosi (per cento dei topi con un embolo) il risultato principale. Prevalenza di trombosi possa essere confrontata mediante una tabella di contingenza e test esatto di Fisher. Uno degli esperimenti è stata un'eccezione quando embolo ridotta dimensioni con la stessa prevalenza di trombosi dopo iniezione di anticorpi podoplanin-inibizione è stata osservata 7.
Questo metodo è particolarmente utile quando l'inizio di trombosi venosa è studiato. Essa consente di indagare gli eventi iniziali nella parete del vaso, come il reclutamento delle cellule, che conduce alla fine alla trombosi. Gli effetti pro - o anti - thrombotic di farmaci possono essere valutati utilizzando questo modello con prevalenza di trombosi essendo una lettura primaria. Stenosi per 48 h è applicabile per rivelare un fenotipo anti-trombotico, mentre la stenosi h 6 può essere utilizzata se è previsto un fenotipo protrombotico. L'analisi istologica del trombo e muro di cinta IVC può anche essere eseguita.
Rimane aperta la questione se rami laterali devono essere legati o lasciato brevetto. Un gruppo ha dimostrato che la legatura dei rami laterali non aumenta dimensione del trombo e posizione di un ramo laterale più vicina di 1,5 mm al sito IVC legatura altera drammaticamente embolo sviluppo25. Chiusura dei rami laterali può indurre la lesione endoteliale in loro e anche aumentare il tempo di chirurgia26. Nelle nostre mani, mancanza di chiusura ramo laterale diminuisce sostanzialmente prevalenza di trombosi (fino al 10-30% dopo stenosi 48h; Brill, inediti) e di conseguenza abbiamo legare tutti i rami laterali visibili.
Idealmente, littermate controlli devono essere usati come topi, anche sullo stesso sfondo ma da fonti diverse, possono avere la prevalenza di trombosi leggermente diverso. Se si è studiato l'effetto di DVT se stesso su tutti i parametri (ad esempio, biochimico), devono essere utilizzati animali falsità-azionati. Topi falsità-azionati subiscono la stessa procedura ma la legatura intorno l'IVC è chiuso senza bloccare e lasciata lì senza produrre stenosi.
L'errore più frequente (un passo critico) in questo protocollo è uno sforzo per separare l'aorta e l'IVC non proprio presso l'angolo tra i vasi ma leggermente inferiori, che di solito provoca sanguinamento. Quando una massiccia emorragia si verifica, buon recupero del mouse diventa improbabile e si raccomanda di interrompere l'esperimento ed eutanasia animale. Normalmente, i topi recupero bene, muovono all'interno della gabbia e sostanzialmente non perdere peso. Si consiglia utilizzando topi sopra 20 g per sia i maschi che le femmine e tenere animali (soprattutto maschi) in gabbie individuali dopo chirurgia fino alla fine dell'esperimento per evitare combattimenti e lesioni. È stato segnalato in un altro modello (elettrolitico) di DVT che topi maschi producono grandi emboli oltre le femmine27. Analisi dei nostri dati non ha rivelato la sostanza differenza nella prevalenza di trombosi tra topi maschi e femmine (Brill, inedito). Di conseguenza, i ricercatori sono incoraggiati a eseguire esperimenti utilizzando il modello di stenosi IVC sui topi di entrambi i sessi.
Dipanarsi di suture e/o graffette può non essere esclusa soprattutto in esperimenti lunghi (una settimana e più a lungo). Così, topi devono essere controllati almeno due volte al giorno in particolare per l'integrità di sutura e dovrebbe prestare una particolare attenzione alla comparsa di tracce di sangue sul letto gabbia.
Si deve osservare che, come qualsiasi altro modello animale, stenosi del IVC ha i suoi limiti in termini di traduzione in esseri umani. Ad esempio, murino IVCs non hanno valvole, mentre DVT umana si sviluppa all'interno di valvole venose. Inoltre, gli esseri umani hanno orientamento verticale spinale con la pompa muscolare essendo un meccanismo importante accelerazione del flusso sanguigno nelle vene. Al contrario, i topi hanno orientamento orizzontale spinale senza il ruolo della pompa muscolare nel sostenere sangue ritorno al cuore. Questi limiti dovrebbero essere considerati quando si traduce i dati del mouse alla malattia umana.

Trombosi venosa profonda (TVP) è lo sviluppo di trombi nelle vene profonde, solitamente (ma non solo) nelle gambe. In congiunzioni con embolia polmonare (PE; indicato insieme come tromboembolismo venoso, VTE) si sviluppa in circa 900.000 americani ogni anno e rappresenta un grave problema di salute e problemi economici1,2. PE, una complicazione della TVP, si verifica quando un embolo diventa indipendente dalla posizione iniziale e raggiunge i polmoni, che possono causare insufficienza respiratoria e la morte. Il tributo di morte dal VTE supera la mortalità da AIDS, incidenti di traffico e di cancro al seno, combinato3.
Il fattore principale che causa DVT oltre a noti motivi, come il cancro o trauma, è la mancanza di mobilità 4,5. Questo può derivare da interventi chirurgici (soprattutto ortopedici), paralisi, voli di lungo raggio o altri motivi. La pompa muscolare dipende dal flusso di sangue nelle vene e quindi risultati di immobilizzazione dell'arto nel sangue stagnante flusso in valvole venose, che conduce alla trombosi. Lo scopo del metodo descritto nel presente documento è di ricapitolare tali sangue flusso distorsione6,7. Restrizione di flusso parziale nella vena cava inferiore (IVC) simula condizioni create in umani valvole venose e risultati nella formazione di un trombo simile nella struttura a emboli umano6. La gran parte di un embolo è rossa ed è costituito da globuli rossi, fibrina e incorporazione delle piastrine. Gli emboli hanno un piccolo "parte bianca" arricchito in piastrine (Figura 1), che assomigliano a "linee di Zahn" descritti negli emboli venosi umani. Entrambe le parti dell'embolo contengono anche i neutrofili8, che sono tra le prime cellule ad essere reclutati presso il sito di futura embolo6,9. Neutrofili nella parte rossa espellono trappole extracellulari del neutrofilo (reti), considerando che i neutrofili nella parte bianca sembrano essere privi di reti8. Allo stesso modo per TVP umano, trombosi nei topi è accompagnata da livelli elevati del plasma del D-dimero (Figura 2). Eparina a basso peso molecolare (enoxaparina), usato per la profilassi della TVP in pazienti, inoltre previene trombosi nei topi. Un importante vantaggio di questo metodo è assenza di decumulazione endoteliale9, che è caratteristica della umana DVT10. Questa caratteristica rende la stenosi IVC un modello più clinicamente rilevante di TVP rispetto, ad esempio, induzione di trombosi di cloruro ferrico, che induce decumulazione endoteliale e in cui gli emboli sono costituiti principalmente di piastrine11, 12,13. Un modello di completa stasi nella VCI è preferito da diverse squadre14,15,16. In contrasto con stenosi, in cui flusso residuo viene mantenuta nel vaso, applicazione di stasi blocca completamente il flusso e quindi limita l'accessibilità delle sostanze sistematicamente amministrati per il sito di trombosi. Inoltre, sembra che i meccanismi sottostanti la trombosi indotta dalla stenosi e stasi sono diversi: stenosi provoca lo sviluppo di infiammazione locale (attivazione dell'endotelio, rilascio del contenuto del corpo di Weibel-Palade, reclutamento di cellule del sistema immunitario e le piastrine alla parete del vaso) causando "immunothrombosis"6,9,17, mentre stasi sembra indurre piuttosto trombosi basato, in particolare, il fattore del tessuto ed altre coagulazione e meccanismi correlati fibrinolisi18,19,20. Così, i modelli di stenosi e stasi riflettono leggermente diversi aspetti dello sviluppo di embolo venoso, anche se certamente si sovrappongono i loro meccanismi. Modello IVC elettrolitico (EIM) di DVT21,22 induce un embolo solo parzialmente che occlude la parete del vaso. Pertanto, è conveniente per testare gli effetti della somministrazione sistemica di diversi farmaci sulla crescita dell'embolo. Questo modello, tuttavia, presuppone la rottura dell'integrità della parete del IVC (inserimento di un ago) e l'induzione di trombosi da corrente elettrica rendendo la rilevanza fisiopatologica di questo meccanismo almeno discutibile.

<table><tbody><tr><td>C57BL/6 mice</td><td>Charles River</td><td></td><td>8 - 10 weeks old, bothe genders</td></tr><tr><td>Scissors</td><td>WPI</td><td>15922</td><td></td></tr><tr><td>Scissors</td><td>WPI</td><td>14003</td><td></td></tr><tr><td>Dumont 5/45 forceps</td><td>FST</td><td>11251-35</td><td></td></tr><tr><td>7-0 Prolene suture</td><td>Ethicon</td><td>W8725</td><td></td></tr><tr><td>6-0 Vicryl suture</td><td>Ethicon</td><td>W9981</td><td></td></tr><tr><td>Cotton buds</td><td>Spar</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Millswabs sterile&amp;nbsp;</td><td>Millpledge veterinary&amp;nbsp;</td><td>611950</td><td></td></tr><tr><td>Drapes</td><td>Kruuse</td><td>141765</td><td></td></tr><tr><td>Glucose Saline-Aqupharm3</td><td>Animal Care</td><td>XVD589</td><td></td></tr><tr><td>Clear H&lt;span class=&quot;font6&quot;&gt;&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;&lt;/span&gt;&lt;span class=&quot;font5&quot;&gt;0 HydroGel 98% sterile water&amp;nbsp;&lt;/span&gt;</td><td>Clearh2o</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Buprenorphine</td><td>National Veterinary Supplies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane vaporizer</td><td>General Anaesthetic Services</td><td></td><td></td></tr><tr><td>IsoFlo 100% W/W inhalation vapour, liquid</td><td>National Veterinary Supplies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sterilizer Steri350</td><td>Inotech</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscope Olympus SZX10</td><td>Olympus</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

stenosis of the inferior vena cava: a murine model of deep vein thrombosis

Profondo della vena trombosi profonda (TVP) e la relativa complicazione devastante, embolia polmonare, sono un problema grave di salute con l'alta mortalità. Meccanismi di formazione di trombi nelle vene rimangono oscuri. Mancanza di mobilità (ad es., dopo la chirurgia o voli di lungo raggio) è uno dei principali fattori che portano a DVT. La conseguenza fisiopatologica della mancanza di mobilità è stagnazione del flusso di sangue in valvole venose. Qui, un modello viene descritto che imita tale dispersione di flusso come fattore di trombosi-guida. In questo modello, la restrizione di flusso parziale (stenosi) in vena cava inferiore (IVC) è creata. Chiusura di circa il 90% del lume IVC per 48 h provoca lo sviluppo di trombi strutturalmente simili a quelli in esseri umani. Le somiglianze sono: i) la maggior parte del volume dell'embolo è rosso, cioè, consiste di cellule rosse del sangue e fibrina, ii) la presenza di una parte bianca (linee di Zahn), iii) non-spogliati monostrato endoteliale, iv) livelli elevati del plasma del D-dimero e v) possibilità di prevenire trombosi da eparina a basso peso molecolare. Limitazioni includono dimensioni variabili degli emboli e il fatto che una certa percentuale di topi wild-type (0 - 35%) non può produrre un embolo. Oltre misura e osservazione visiva, gli emboli possono essere visualizzati da tecnologie non invasive, quali l'ecografia, che permette di monitorare le dinamiche di sviluppo di trombi. A intervalli di tempo più breve (1-6 h), microscopia intravital può essere applicata per osservare direttamente gli eventi (ad esempio, il reclutamento delle cellule alla parete del vaso) che precede la formazione dell'embolo. Utilizzo di questo metodo da diverse squadre di tutto il mondo ha reso possibile scoprire i meccanismi di base della iniziazione DVT e identificare potenziali bersagli che potrebbero essere utile per la sua prevenzione.

Qui, un modello di trombosi venosa profonda indotta da distorsione di flusso nella VCI è descritto. Induzione di stenosi nella VCI avvia distorsione e ristagno del flusso sanguigno e dopo un po' di tempo (in questo caso, 48 h) provoca lo sviluppo di un trombo, strutturalmente simile all'essere umano DVT emboli (Figura 1A). La presenza di un embolo all'interno l'IVC è facilmente rilevabile visivamente (Figura 1B). Un'importante somiglianza tra il modello e DVT umano è livelli elevati del plasma del D-dimero (Figura 2). D-dimero è un prodotto di degradazione della fibrina e la sua presenza nel sangue suggerisce che è in corso un processo trombotico attivo.
Il modello è presentato dettagliate in Figura 3A-C. L'IVC è accuratamente esposti, un buco tra il IVC e l'aorta è fatto e una sutura (Prolene 7-0) è tirata attraverso il foro sotto il IVC. Quindi l'IVC è legato dalla sutura sopra un distanziatore (ago 30g, Figura 3D), dopo che il distanziale viene rimosso. Questa procedura consente per circa il 90% chiusura del lume IVC lasciando il restante 10% brevetto. In questo modo la stagnazione del flusso di sangue alla fine che conduce alla trombosi.
Nella figura 4 viene illustrato lo svantaggio principale del modello, dimensione variabile dell'embolo. Tutti questi emboli sono stati ottenuti nell'esperimento stesso eseguiti su topi maschi della stessa origine, età e peso corporeo simile. Anche se tutti i topi hanno prodotto gli emboli (prevalenza di trombosi del 100%), la loro dimensione varia chiaramente in una vasta gamma.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56697/56697fig1.jpg"> 
Figura 1: Rappresentante dell'embolo dopo 48 h. restrizione/stenosi. (A), un tipico dell'embolo dopo 48 h IVC stenosi. Nota rossa (globuli rossi-arricchito) e bianco (della piastrina-arricchito) parti. (B) IVC con (a sinistra) o senza (a destra) un embolo. Scala bar = 2 mm. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56697/56697fig1large.jpg" target="_blank">per favore clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56697/56697fig2.jpg"> 
Figura 2 : Elevati livelli plasmatici del D-dimero dopo applicazione di stenosi IVC. Topi sono stati sottoposti a stenosi IVC. Prelievo presso i punti di tempo indicato, stabilizzato 1:9 con 3,8% sodio citrato, plasma è stato preparato mediante centrifugazione (2.300 x g, 5 min) e livelli di D-dimero sono stati determinati mediante un kit ELISA secondo le istruzioni del produttore. Cerchi designano topi falsità-azionati, croci designano stenosi IVC. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56697/56697fig2large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56697/56697fig3.jpg"> 
Figura 3: Flusso limitazione/stenosi nel modello della Vena Cava inferiore (IVC) della TVP in topi. Fasi successive del modello sono presentati. (A) un buco tra il IVC e l'aorta è fatto e una sutura è tirata attraverso di essa nei dintorni di IVC. (B), un nodo è chiuso sopra un distanziatore (ago 30g). (C) il distanziale viene rimosso: la visualizzazione finale che vede il chirurgo prima di chiudere il mouse. La linea gialla tratteggiata delimita il IVC. LRV sta per vena renale di sinistra. Scala bar = 0,2 mm (D) il distanziale (ago 30g). Scala bar = 2 mm. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56697/56697fig3large.jpg" target="_blank">per favore clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56697/56697fig4.jpg"> 
Figura 4 . Variabilità delle dimensioni dell'embolo. Topi sono stati sottoposti a stenosi IVC 48h. Presentati sono emboli ottenuti nell'esperimento stesso. Barre di scala di 2 mm. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56697/56697fig4large.jpg" target="_blank">per favore clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>

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Stenosis of the Inferior Vena Cava: A Murine Model of Deep Vein Thrombosis

Descriviamo qui stenosi nella vena cava inferiore come un modello murino di trombosi profonda della vena. Questo modello racchiude in sintesi restrizione di flusso di sangue, uno dei principali fattori scatenanti di trombosi venosa in esseri umani.

Stenosi della Vena Cava inferiore: un modello murino di trombosi venosa profonda

Deep vein thrombosis (DVT) and its devastating complication, pulmonary embolism, are a severe health problem with high mortality. Mechanisms of thrombus ...

stenosis-inferior-vena-cava-murine-model-deep-vein

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

23.9K Views.  University of Birmingham. Descriviamo qui stenosi nella vena cava inferiore come un modello murino di trombosi profonda della vena. Questo modello racchiude in sintesi restrizione di flusso di sangue, uno dei principali fattori scatenanti di trombosi venosa in esseri umani.

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Murine Model of CD40-activation of B cells

Research on B cells has shown that CD40 activation improves their antigen presentation capacity. When stimulated with interleukin-4 and CD40 ligand (CD40L), human B cells can be expanded without difficulties from small amounts of peripheral blood within 14 days to very large amounts of highly-pure CD40-B cells (&gt;109 cells per patient) from healthy donors as well as cancer patients1-4. CD40-B cells express important lymph node homing molecules and can attract T cells in vitro5. Furthermore they efficiently take up, process and present antigens to T cells6,7. CD40-B cells were shown to not only prime na&iacute;ve, but also expand memory T cells8,9. Therefore CD40-activated B cells (CD40-B cells) have been studied as an alternative source of immuno-stimulatory antigen-presenting cells (APC) for cell-based immunotherapy1,5,10. In order to further study whether CD40-B cells induce effective T cell responses in vivo and to study the underlying mechanism we established a cell culture system for the generation of murine CD40-activated B cells. Using splenocytes or purified B cells from C57BL/6 mice for CD40-activation, optimal conditions were identified as follows: Starting from splenocytes of C57BL/6 mice (haplotype H-2b) lymphocytes are purified by density gradient centrifugation and co-cultured with HeLa cells expressing recombinant murine CD40 ligand (tmuCD40L HeLa)11. Cells are recultured every 3-4 days and key components such as CD40L, interleukin-4, -Mercaptoethanol and cyclosporin A are replenished. In this protocol we demonstrate how to obtain fully activated murine CD40-B cells (mCD40B) with similar APC-phenotype to human CD40-B cells (Fig 1a,b). CD40-stimulation leads to a rapid outgrowth and expansion of highly pure (&gt;90%) CD19+ B cells within 14 days of cell culture (Fig 1c,d). To avoid contamination with non-transfected cells, expression of the murine CD40 ligand on the transfectants has to be controlled regularly (Fig 2). Murine CD40-activated B cells can be used to study B-cell activation and differentiation as well as to investigate their potential to function as APC in vitro and in vivo. Moreover, they represent a promising tool for establishing therapeutic or preventive vaccination against tumors and will help to answer questions regarding safety and immunogenicity of this approach12.

In this video, we demonstrate the procedure of CD40-activation and expansion of murine B cells from splenocytes of C57BL/6 mice, which can be used as a model antigen-presenting cell (APC) to study induction of immunity.

Modello murino di CD40-attivazione delle cellule B

Research on B cells has shown that CD40 activation improves their antigen presentation capacity. When stimulated with interleukin-4 and CD40 ligand ...

Ricerca

Immunologia e infezioni

Electrolytic Inferior Vena Cava Model (EIM) of Venous Thrombosis

Animal models serve a vital role in deep venous thrombosis (DVT) research in order to study thrombus formation, thrombus resolution and to test potential therapeutic compounds (1). New compounds to be utilized in the treatment and prevention of DVT are currently being developed. The delivery of potential therapeutic antagonist compounds to an affected thrombosed vein has been problematic. In the context of therapeutic applications, a model that uses partial stasis and consistently generates thrombi within a major vein has been recently established. The Electrolytic Inferior vena cava Model (EIM) is mouse model of DVT that permits thrombus formation in the presence of continuous blood flow. This model allows therapeutic agents to be in contact with the thrombus in a dynamic fashion, and is more sensitive than other models of DVT (1). In addition, this thrombosis model closely simulates clinical situations of thrombus formation and is ideal to study venous endothelial cell activation, leukocyte migration, venous thrombogenesis, and to test therapeutic applications (1). The EIM model is technically simple, easily reproducible, creates consistent thrombi sizes and allows for a large sample (i.e. thrombus and vein wall) which is required for analytical purposes.

Electrolytic Inferior Vena Cava Model EIM of Venous Thrombosis

The electrolytic induction of endothelial activation to the internal surface of the Inferior Vena Cava results in venous type thrombus formation due to endothelial activation and partial blood stasis, two components of Virchow's triad.

Elettrolitico vena cava inferiore Model (EIM) della Trombosi Venosa

Animal models serve a vital role in deep venous thrombosis (DVT) research in order to study thrombus formation, thrombus resolution and to test potential ...

Medicina

Mouse Complete Stasis Model of Inferior Vena Cava Thrombosis

Venous thromboembolism (VTE) includes both deep vein thrombosis (DVT) and pulmonary embolism (PE). In the United States (U.S.), the high morbidity and mortality rates make VTE a serious health concern 1-2. After heart disease and stroke, VTE is the third most common vascular disease 3. In the U.S. alone, there is an estimated 900,000 people affected each year, with 300,000 deaths occurring annually 3. A reliable in vivo animal model to study the mechanisms of this disease is necessary.
The advantages of using the mouse complete stasis model of inferior vena cava thrombosis are several. The mouse model allows for the administration of very small volumes of limited availability test agents, reducing costs dramatically. Most promising is the potential for mice with gene knockouts that allow specific inflammatory and coagulation factor functions to be delineated. Current molecular assays allow for the quantitation of vein wall, thrombus, whole blood, and plasma for assays. However, a major concern involving this model is the operative size constraints and the friability of the vessels. Also, due to the small IVC sample weight (mean 0.005 grams) it is necessary to increase animal numbers for accurate statistical analysis for tissue, thrombus, and blood assays such as real-time polymerase chain reaction (RT-PCR), western blot, enzyme-linked immunosorbent (ELISA), zymography, vein wall and thrombus cellular analysis, and whole blood and plasma assays 4-8.
The major disadvantage with the stasis model is that the lack of blood flow inhibits the maximal effect of administered systemic therapeutic agents on the thrombus and vein wall.

The mouse complete stasis model of inferior vena cava thrombosis yields quantifiable amounts of vein wall tissue and thrombus. It has proven useful for evaluating interactions between the vein wall and the occlusive thrombus and in assessing the progression from acute to chronic inflammation.

Modello del mouse completa stasi della vena cava inferiore Trombosi

Venous thromboembolism (VTE) includes both deep vein thrombosis (DVT) and pulmonary embolism (PE).  In the United States (U.S.), the high morbidity and ...

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Graft-versus-host disease (GVHD) is the limiting barrier to the broad use of bone marrow transplant as a curative therapy for a variety of hematological deficiencies. GVHD is caused by mature alloreactive T cells present in the bone marrow graft that are infused into the recipient and cause damage to host organs. However, in mice, T cells must be added to the bone marrow inoculum to cause GVHD. Although extensive work has been done to characterize T cell responses post transplant, bioluminescent imaging technology is a non-invasive method to monitor T cell trafficking patterns in vivo. 
Following lethal irradiation, recipient mice are transplanted with bone marrow cells and splenocytes from donor mice. T cell subsets from L2G85.B6 (transgenic mice that constitutively express luciferase) are included in the transplant. By only transplanting certain T cell subsets, one is able to track specific T cell subsets in vivo, and based on their location, develop hypotheses regarding the role of specific T cell subsets in promoting GVHD at various time points. At predetermined intervals post transplant, recipient mice are imaged using a Xenogen IVIS CCD camera. Light intensity can be quantified using Living Image software to generate a pseudo-color image based on photon intensity (red = high intensity, violet = low intensity). 
Between 4-7 days post transplant, recipient mice begin to show clinical signs of GVHD. Cooke et al.1 developed a scoring system to quantitate disease progression based on the recipient mice fur texture, skin integrity, activity, weight loss, and posture. Mice are scored daily, and euthanized when they become moribund. Recipient mice generally become moribund 20-30 days post transplant. 
Murine models are valuable tools for studying the immunology of GVHD. Selectively transplanting particular T cell subsets allows for careful identification of the roles each subset plays. Non-invasively tracking T cell responses in vivo adds another layer of value to murine GVHD models.

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Murine bone marrow transplantation is a widely used technique to study immunological mechanisms governing graft-versus-host disease in humans. The ability to monitor T cell trafficking patterns in vivo allows for detailed analysis of the development and perpetuation of T cell responses during graft-versus-host disease.

Induzione di Graft-versus-host disease e<em&gt; In Vivo</em&gt; T monitoraggio cellulare Utilizzando un MHC-abbinato modello murino

Graft-versus-host disease (GVHD) is the limiting barrier to the broad use of bone marrow transplant as a curative therapy for a variety of hematological ...

Murine Model of Allergen Induced Asthma

Asthma is a major cause of morbidity and mortality, affecting some 300 million people throughout the world.1 More than 8% of the US population has asthma, with the prevalence increasing.2 As with other diseases, animal models of allergic airway disease greatly facilitate understanding of the underlying pathophysiology, help identify potential therapeutic targets, and allow preclinical testing of possible new therapies. Models of allergic airway disease have been developed in several animal species, but murine models are particularly attractive due to the low cost, ready availability, and well-characterized immune systems of these animals.3 Availability of a variety of transgenic strains further increases the attractiveness of these models.4 Here we describe two murine models of allergic airway disease, both employing ovalbumin as the antigen. Following initial sensitization by intraperitoneal injection, one model delivers the antigen challenge by nebulization, the other by intratracheal delivery. These two models offer complementary advantages, with each mimicking the major features of human asthma.5
The major features of acute asthma include an exaggerated airway response to stimuli such as methacholine (airway hyperresponsiveness; AHR) and eosinophil-rich airway inflammation. These are also prominent effects of allergen challenge in our murine models,5,6 and we describe techniques for measuring them and thus evaluating the effects of experimental manipulation. Specifically, we describe both invasive7 and non-invasive8 techniques for measuring airway hyperresponsiveness as well as methods for assessing infiltration of inflammatory cells into the airways and the lung. Airway inflammatory cells are collected by bronchoalveolar lavage while lung histopathology is used to assess markers of inflammation throughout the organ. These techniques provide powerful tools for studying asthma in ways that would not be possible in humans.

Experimental mouse models of allergic asthma offer new possibilities for studying disease pathogenesis and developing new therapeutics. These models are well suited to measuring factors governing the allergic immune response, airway inflammation, and pulmonary pathophysiology.

Modello murino di asma indotta da allergene

Asthma is a major cause of morbidity and mortality, affecting some 300 million people throughout the world.1 More than 8% of the US population has asthma, ...

Implantation of Inferior Vena Cava Interposition Graft in Mouse Model

Biodegradable scaffolds seeded with bone marrow mononuclear cells (BMCs) are often used for reconstructive surgery to treat congenital cardiac anomalies. The long-term clinical results showed excellent patency rates, however, with significant incidence of stenosis. To investigate the cellular and molecular mechanisms of vascular neotissue formation and prevent stenosis development in tissue engineered vascular grafts (TEVGs), we developed a mouse model of the graft with approximately 1 mm internal diameter. First, the TEVGs were assembled from biodegradable tubular scaffolds fabricated from a polyglycolic acid nonwoven felt mesh coated with &#949;-caprolactone and L-lactide copolymer. The scaffolds were then placed in a lyophilizer, vacuumed for 24 hr, and stored in a desiccator until cell seeding. Second, bone marrow was collected from donor mice and mononuclear cells were isolated by density gradient centrifugation. Third, approximately one million cells were seeded on a scaffold and incubated O/N. Finally, the seeded scaffolds were then implanted as infrarenal vena cava interposition grafts in C57BL/6 mice. The implanted grafts demonstrated excellent patency (&#62;90%) without evidence of thromboembolic complications or aneurysmal formation. This murine model will aid us in understanding and quantifying the cellular and molecular mechanisms of neotissue formation in the TEVG.

To improve our knowledge of cellular and molecular neotissue formation, a murine model of the TEVG was recently developed. The grafts were implanted as infrarenal vena cava interposition grafts in C57BL/6 mice. This model achieves similar results to those achieved in our clinical investigation, but over a far shortened time-course.

L&#39;impianto di Vena cava inferiore Interposizione Graft in modello murino

Biodegradable scaffolds seeded with bone marrow mononuclear cells (BMCs) are often used for reconstructive surgery to treat congenital cardiac anomalies. ...

Dosaggio ottimizzato della trombosi venosa in un modello di cancro murino utilizzando clip vascolari

Venous Thrombosis Assay in a Mouse Model of Cancer

This methodology paper highlights the surgical nuances of a rodent model of venous thrombosis, specifically in the context of cancer-associated thrombosis (CAT). Deep venous thrombosis is a common complication in cancer survivors and can be potentially fatal. The current murine venous thrombosis models typically involve a complete or partial mechanical occlusion of the inferior vena cava (IVC) using a suture. This procedure induces a total or partial stasis of blood and endothelial damage, triggering thrombogenesis. The current models have limitations such as higher variability in clot weights, significant mortality rate, and prolonged learning curve. This report introduces surgical refinements using vascular clips to address some of these limitations. Using a syngeneic colon cancer xenograft mouse model, we employed customized vascular clips to ligate the infrarenal vena cava. These clips allow residual lip space similar to a 5-0 polypropylene suture after IVC ligations. Mice with the suture method served as controls. The vascular clip method resulted in a consistent reproducible partial vascular occlusion and greater clot weights with less variability than the suture method. The larger clot weights, greater clot mass, and clot to the IVC luminal surface area were expected due to the higher pressure profile of the vascular clips compared to a 6-0 polypropylene suture. The approach was validated by gray scale ultrasonography, which revealed consistently greater clot mass in the infrarenal vena cava with vascular clips compared to the suture method. These observations were further substantiated with the immunofluorescence staining. This study offers an improved method to generate a venous thrombosis model in mice, which can be employed to deepen the mechanistic understanding of CAT and in translational research such as drug discovery.

Autore in primo piano: Avanzamento della ricerca sulla trombosi associata al cancro nei modelli di roditori 

This article aims to present an optimized method for assessing venous thrombosis in a mouse cancer model, using vascular clips to achieve venous ligation. Optimization minimizes variability in thrombosis-related measurements and enhances relevance to human cancer-associated venous thrombosis.

Test della trombosi venosa in un modello murino di cancro

This methodology paper highlights the surgical nuances of a rodent model of venous thrombosis, specifically in the context of cancer-associated thrombosis ...

Ricerca sul cancro

Deep Vein Thrombosis Induced by Stasis in Mice Monitored by High Frequency Ultrasonography

Venous thrombosis is a common condition affecting 1 - 2% of the population, with an annual incidence of 1 in 500. Venous thrombosis can lead to death through pulmonary embolism or results in the post-thrombotic syndrome, characterized by chronic leg pain, swelling, and ulceration, or in chronic pulmonary hypertension resulting in significant chronic respiratory compromise. This is the most common cardiovascular disease after myocardial infarction and ischemic stroke and is a clinical challenge for all medical disciplines, as it can complicate the course of other disorders such as cancer, systemic disease, surgery, and major trauma.
Experimental models are necessary to study these mechanisms. The stasis model induces consistent thrombus size and a quantifiable amount of thrombus. However, it is necessary to systematically ligate side branches of the inferior vena cava to avoid variability in thrombus sizes and any erroneous data interpretation. We have developed a non-invasive technique to measure thrombus size using ultrasonography. Using this technique, we can assess thrombus development and resolution over time in the same animal. This approach limits the number of mice required for quantification of venous thrombosis consistent with the principle of replacement, reduction, and refinement of animals in research. We have demonstrated that thrombus weight and histological analysis of thrombus size correlate with measurement obtained with ultrasonography. Therefore, the current study describes how to induce deep vein thrombosis in mice using the inferior vena cava stasis model and how to monitor it using high frequency ultrasound.

The present protocol describes the steps to obtain venous thrombosis using a stasis model. In addition, we are using a non-invasive method to measure thrombus formation and resolution over time.

Trombosi venosa profonda indotta dalla stasi in topi monitorati dall'ecografia ad alta frequenza

Venous thrombosis is a common condition affecting 1 - 2% of the population, with an annual incidence of 1 in 500. Venous thrombosis can lead to death ...

Stenosi della Vena Cava inferiore: un modello murino di trombosi venosa profonda

Riepilogo

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Capitoli in questo video

Modello murino di CD40-attivazione delle cellule B

Elettrolitico vena cava inferiore Model (EIM) della Trombosi Venosa

Modello del mouse completa stasi della vena cava inferiore Trombosi

Induzione di Graft-versus-host disease e

Modello murino di asma indotta da allergene

L'impianto di Vena cava inferiore Interposizione Graft in modello murino

Test della trombosi venosa in un modello murino di cancro

Test della trombosi venosa in un modello murino di cancro

Test della trombosi venosa in un modello murino di cancro

Trombosi venosa profonda indotta dalla stasi in topi monitorati dall'ecografia ad alta frequenza