El objetivo del método es evaluar las consecuencias funcionales de la implantación de tejido cardíaco de ingeniería en un modelo de crioinfarmación animal pequeño. La ventaja de este método es que permite la inducción de infartos de miocardio relativamente reproducibles con tamaños de infarto estables. Después de confirmar la falta de respuesta al pellizco del dedo del grado, coloque el conejillo de indias anestesiado en una plataforma de calentamiento de 40 a 42 grados Celsius en la posición supina.
Aplicar pomada para los ojos y afeitar y depilar el tórax. Aplique gel de transductor de ultrasonido de 25 grados Celsius a la piel expuesta y coloque el transductor de un sistema de ecocardiografía en el tórax para adquirir vistas bidimensionales del eje largo parasternal en modo B desde el cuello derecho hacia la pierna izquierda en el plano de la válvula aórtica con una visualización simultánea del ápice del ventrículo izquierdo para investigar la función ventricular izquierda preoperatoria. A continuación, gire el transductor 90 grados para obtener una vista de modo B de eje corto en el nivel papilar medio.
Una vez obtenida la última imagen, transfiera el conejillo de indias a la mesa quirúrgica y pegue las extremidades en una posición de águila extendida. Desinfectar la piel expuesta con dos exfoliantes secuenciales a base de yodo y 80%etanol y hacer una incisión vertical de 1,5 centímetros en el área traqueal. Disecciona rotuela los músculos que cubren la tráquea.
Cuando se pueda observar la tráquea, perfore el tubo de aire con una cánula IV de calibre 18 e inserte la parte flexible de la cánula como tubo traqueal. Conecte el tubo traqueal a un respirador animal para una ventilación continua durante el procedimiento y cuente los espacios de las costillas a partir del primer espacio intercostal para localizar el quinto espacio intercostal. Haga una incisión horizontal de dos centímetros en el quinto espacio intercostal en el lado izquierdo del conejillo de indias y retire los tejidos subcutáneos antes de diseccionar los músculos con un electrocauterización hasta alcanzar los músculos intercostales.
Diseccione suavemente los músculos intercostales con pinzas y tijeras pequeñas hasta que se alcance el espacio pleural y se pueda visualizar el pulmón izquierdo. Inserte un retractor entre las costillas y abra el retractor cuidadosamente hasta obtener una buena vista del corazón. Abra el pericardio aproximadamente un centímetro en la región de la pared ventricular izquierda anterior y coloque una compresa en el pulmón izquierdo para proteger el pulmón del daño al inducir la crioinjuración del ventrículo izquierdo.
A continuación, enfríe la punta de un sello metálico erosionado con un diámetro transversal de 0,5 centímetros de nitrógeno líquido durante tres minutos antes de presionar la sonda en la pared anterior izquierda del corazón durante 30 segundos. A continuación, coloque un soldador eléctrico de 200 grados Celsius dentro del sello para calentar el sello de modo que el metal se pueda extraer del tejido. Después de la tercera aplicación de sello, retire el retractor del espacio intercostal y sujete el tubo de salida del respirador durante dos segundos para inflar los pulmones con la máxima presión para evitar la atelectasis del pulmón.
A continuación, cierre las costillas con dos suturas 4-0, los músculos sobre las costillas con una sutura de carrera de 5-0 y la piel con 5-0 sutura de sutura solo puntos. Después de retirar el tubo traqueal, utilice un solo 8-0 sutura para cerrar el sitio de punción en la tráquea y cerrar la herida con tres suturas de punto 5-0. Siete días después de la crioinjurina, retire las suturas y haga una incisión horizontal de la piel de dos centímetros en el área de la cicatriz del lado lateral izquierdo y use electrocauterización para diseccionar suavemente las adherencias pleurales extra.
Abra cuidadosamente el espacio pleural con tijeras e inserte un esparcidor de costillas para exponer el corazón. Identifique visualmente la región del infarto por su color pálido en comparación con el miocardio circundante saludable y coloque un parche de tejido cardíaco diseñado sobre la región del infarto. Asegure el parche con dos 8-0 suturas a ambos lados en la zona no infarta del corazón e inflar los pulmones con presión para evitar la atelectasis de los pulmones.
A continuación, retire el retractor del espacio intercostal y cierre el animal como se ha demostrado. Cuatro semanas después de la implantación del tejido cardíaco diseñado, realice la ecocardiografía transtorácica como se ha demostrado para evaluar los cambios en la función del ventrículo izquierdo horas extras. La tinción tricroma de masón cuatro semanas después de la crioinjurina revela cicatrices transmuros grandes sobre el 25% del miocardio ventricular izquierdo en promedio.
La tinción de distrofina demuestra grandes injertos miocárdicos que se han remuscular parcialmente en la cicatriz y manchas para el Ku80 humano que confirma el origen humano del miocardio recién formado. La monitorización de la ecocardiografía transtorácica del tejido cardíaco implantado revela una mejora en la fracción de eyección del ventrículo izquierdo, el acortamiento fraccionario del área y una disminución del diámetro ventricular izquierdo y diastólico. Es esencial abrir cuidadosamente la cavidad pleural en este tipo de operación de re-hacer, ya que las adherencias entre la pared torácica y el ventrículo izquierdo pueden estar presentes y existe un cierto riesgo de lesionar el miocardio ventricular izquierdo.
Después de la implantación del tejido cardíaco de ingeniería humana, se pueden utilizar varios métodos para monitorear los cambios en la fracción de eyección ventricular izquierda. Además de la ecocardiografía, se puede utilizar una medición invasiva de los bucles de volumen de presión para monitorear esos cambios. Este método permite investigar todos los aspectos de la implantación de tejidos de ingeniería humana.
Las consecuencias funcionales, así como los riesgos potenciales como las arritmias se pueden evaluar en este modelo animal pequeño.
