L’objectif de la méthode est d’évaluer les conséquences fonctionnelles de l’implantation de tissus cardiaques artificiels dans un petit modèle de cryoinfarction animale. L’avantage de cette méthode est qu’elle permet l’induction d’infarctus myocardiques relativement reproductibles avec des tailles d’infarctus stables. Après avoir confirmé un manque de réponse au pincement des pieds, placez le cobaye anesthésié sur une plate-forme de réchauffement de 40 à 42 degrés Celsius dans la position supine.
Appliquer l’onguent des yeux et raser et dépeter le thorax. Appliquer 25 degrés Celsius gel transducteur ultrasons à la peau exposée et placer le transducteur à partir d’un système d’échocardiographie sur le thorax pour acquérir des vues parasternal bidimensionnelles à long axe en mode B à partir du cou droit vers la jambe gauche au plan de la valve aortique avec une visualisation simultanée de l’apex ventricule gauche pour étudier la fonction ventriculaire gauche préopératoire. Tournez ensuite le transducteur à 90 degrés pour obtenir une vue courte en mode B de l’axe au niveau papillaire moyen.
Une fois la dernière image obtenue, transférez le cobaye à la table chirurgicale et collez les membres dans une position d’aigle écartée. Désinfectez la peau exposée avec deux gommages séquentiels à base d’iode et 80% d’éthanol et faites une incision verticale de 1,5 centimètre dans la zone trachéale. Disséquez brutalement les muscles qui recouvrent la trachée.
Lorsque la trachée peut être observée, perforer le tube d’air avec une canule IV de calibre 18 et insérer la partie flexible de la canule comme tube trachéal. Connectez le tube trachéal à un respirateur animal pour une ventilation continue pendant la procédure et comptez les espaces de nervures à partir du premier espace intercostal pour localiser le cinquième espace intercostal. Faire une incision horizontale de deux centimètres sur le cinquième espace intercostal sur le côté gauche du cobaye et enlever les tissus sous-cutanés avant de disséquer les muscles avec une électrocauterie jusqu’à ce que les muscles intercostals soient atteints.
Disséquez doucement les muscles intercostals avec des pinces à épiler et de petits ciseaux jusqu’à ce que l’espace pleural soit atteint et que le poumon gauche puisse être visualisé. Insérez un rétracteur entre les côtes et ouvrez soigneusement le rétracteur jusqu’à ce qu’une bonne vue du cœur soit obtenue. Ouvrez le péricarde d’environ un centimètre dans la région de la paroi ventriculaire gauche antérieure et placez une compresse sur le poumon gauche pour protéger le poumon contre les dommages lors de l’induisant le cryoinjury du ventricule gauche.
Ensuite, refroidissez la pointe d’un timbre métallique érodé avec un diamètre trans-sectionnel de 0,5 centimètre d’azote liquide pendant trois minutes avant d’appuyer sur la sonde sur la paroi antérieure gauche du cœur pendant 30 secondes. Ensuite, placez un fer à souiller électrique de 200 degrés Celsius à l’intérieur du timbre pour réchauffer le timbre afin que le métal puisse être retiré du tissu. Après la troisième application de timbre, retirez le rétracteur de l’espace intercostal et serrez le tube de sortie du ventilateur pendant deux secondes pour gonfler les poumons avec une pression maximale pour éviter l’atelectasie du poumon.
Ensuite, fermez les côtes avec deux sutures 4-0, les muscles sur les côtes avec une suture 5-0 en cours d’exécution et la peau avec 5-0 suture points simples. Après avoir enlevé le tube trachéal, utilisez un seul 8-0 suture pour fermer le site de perforation à la trachée et fermer la plaie avec trois sutures point unique 5-0. Sept jours après le cryoinjury, enlever les sutures et faire une incision horizontale de deux centimètres de la peau dans la zone de cicatrice du côté latéral gauche et utiliser l’électrocautery pour disséquer doucement les adhérences pleurales supplémentaires.
Ouvrez soigneusement l’espace pleural avec des ciseaux et insérez un éper répartiteur de nervures pour exposer le cœur. Identifiez visuellement la région de l’infarctus par sa couleur pâle par rapport au myocarde environnant sain et placez un patch machiné de tissu cardiaque au-dessus de la région d’infarctus. Sécurisez le patch avec deux 8-0 sutures des deux côtés dans la zone non infarctus du cœur et gonfler les poumons avec une pression pour éviter l’atelectasie des poumons.
Retirez ensuite le rétracteur de l’espace intercostal et fermez l’animal comme démontré. Quatre semaines après implantation machinée de tissu cardiaque, exécutez l’échocardiographie transthoracice comme démontré pour évaluer des changements dans la fonction gauche de ventricule heures supplémentaires. La coloration trichrome mason quatre semaines après cryoinjury révèle de grandes cicatrices transmurales plus de 25% du myocarde ventriculaire gauche en moyenne.
La coloration de dystrophine démontre de grandes greffes myocardiques qui ont partiellement re-musclé à la cicatrice et la coloration pour ku80 humain qui confirme l’origine humaine du myocarde nouvellement formé. La surveillance transthoracique d’échocardiographie du tissu machiné implanté de coeur indique une amélioration de la fraction gauche d’éjection de ventricule, du raccourcissement fractionnel de secteur, et d’une diminution du diamètre ventriculaire et diastolique gauche. Il est essentiel d’ouvrir soigneusement la cavité pleurale dans ce genre de re-faire opération que les adhérences entre la paroi thoracique et le ventricule gauche peut être présent et il ya un certain risque de blesser le myocarde ventriculaire gauche.
Après l’implantation du tissu cardiaque artificiel, plusieurs méthodes peuvent être employées pour surveiller des changements dans la fraction ventriculaire gauche d’éjection. Outre l’échocardiographie, une mesure invasive des boucles de volume de pression peut être utilisée pour surveiller ces changements. Cette méthode permet d’étudier tous les aspects de l’implantation de tissus d’ingénierie humaine.
Les conséquences fonctionnelles ainsi que les risques potentiels comme les arythmies peuvent être évalués dans ce modèle petit animal.
