Este protocolo se puede utilizar para cuantificar el sueño y la actividad en cualquier población de peces y tiene el potencial de ampliar el número de sistemas modelo utilizados para estudiar la regulación del sueño. La ventaja de esta técnica es su flexibilidad. Por ejemplo, los peces pueden ser rastreados en una variedad de tamaños de arena o en experimentos alojados en grupo o solos.
Una fuerza de medición del sueño en este sistema es la capacidad de la aplicación del método para el cribado genético o de fármacos de alto rendimiento. Hemos aplicado este método al estudio de la evolución del sueño en dos poblaciones diferentes de peces cavernosos que demuestran fenotipos de sueño dramáticamente diferentes. Aunque puede ser difícil establecer un sistema de imágenes conductuales, nuestro sistema proporciona un método rentable para estudiar larvas y peces adultos.
Para construir el sistema para rastrear con precisión el comportamiento locomotor para estudiar el sueño y los ritmos circadianos en A.mexicanus larvarios, utilice acrílico de signo blanco de 0,33 centímetros de espesor para construir una plataforma para el sistema de rastreo larvario. Coloque la plataforma de grabación en la parte superior del disipador de calor cuadrado iluminado en el que residirán las arenas que contienen peces durante los experimentos de seguimiento del comportamiento, y coloque un segundo acrílico dentro de la caja entre las luces de la carcasa del animal para difundir el infrarrojo para una iluminación y contraste óptimos. Coloque toda la etapa de rastreo larval y la iluminación establecida dentro de un tubo de plástico cerrado.
Utilice una herramienta giratoria para quitar la lente de una cámara web experimentalmente adecuada. Retire los pequeños tornillos de la parte posterior de la cámara para quitar la carcasa interior y retire los pequeños tornillos dentro del cuerpo de la cámara para aflojar el resto de la lente. Utilice un destornillador pequeño para quitar cualquier porción de la carcasa de la lente que quede después de cortar la lente.
Y retire el diodo azul emisor de luz en la parte superior del dispositivo acoplado a carga o la carcasa CCD. A continuación, vuelva a colocar la carcasa interior en su orientación original antes de volver a atornillar los dos tornillos exteriores en sus posiciones originales. Utilice una pequeña sierra para enrutar el interior de la cámara para permitir que la cámara esté equipada con una broca de enrutamiento de plástico redondeada que suaviza el plástico adicional hasta que pueda acompañar a un adaptador de lente.
Instale un filtro de paso infrarrojo dentro de la cámara lo más cerca posible del CCD sin hacer contacto directo con la cámara, y atornille el adaptador de una lente fija de 35 milímetros en la parte delantera de la cámara en la parte posterior de la lente. A continuación, coloque la cámara y la lente en el orificio perforado en la tapa en la parte superior del tubo que alberga el escenario y las luces, y conecte el USB al ordenador en el que se grabarán los animales. Para construir un sistema de sueño para peces adultos, primero corte las tiras infrarrojas a intervalos de aproximadamente 46 centímetros.
Y coloque una lámina de acrílico de 46 por cinco por 0,32 centímetros 9%luz de paso de señal blanca directamente delante de cada tira de luz infrarroja para difundir la luz infrarroja. A continuación, coloque todos los tanques en un bastidor que admita iluminación infrarroja montada en la parte trasera, y utilice divisores de plástico opacos y tanques de vidrio de 10 litros para crear arenas individuales. Registrar la actividad locomotora del tetranes mexicanos colocar el día de cuatro a seis peces post-fertilización en pozos individuales de una placa de tejido de 24 pozos, y días 20 a 30 post-fertilización en pozos individuales de una placa de tejido de seis pozos.
Registrar el sueño y la actividad del tetra adulto en una casa social de hasta cinco adultos por tanque de 10 litros con o sin los divisores. En este experimento representativo, los peces larvales de tres poblaciones independientes de peces de cueva mostraron una reducción significativa en el sueño en comparación con los peces de superficie. Esta producción de sueño es consistente en todas las edades probadas, ya que el sueño también se redujo significativamente en los peces adultos de la cueva de Pachon, Molino y Tinaja en comparación con los peces de superficie.
En particular, la vivienda social redujo fuertemente el sueño en peces de superficie sin afectar el sueño en los peces de la cueva de Pacho probablemente debido a un efecto de sótano en las poblaciones de peces de la cueva. Al grabar el pescado se debe tener cuidado de asegurarse de que la iluminación de la cámara es óptima para mejorar la señal de los peces en relación con el fondo. Se requiere alguna codificación de línea de comandos básica para este protocolo que se describe completamente en el texto y debe ser amenable a cualquier configuración de laboratorio.
Este protocolo ha llevado a numerosas preguntas sobre la evolución del sueño y actualmente se utiliza para las pantallas de drogas, realizar un seguimiento del comportamiento del sueño, y entender cómo el comportamiento social afecta el sueño.
