Estudiamos la disponibilidad de solubilidad de micrometales como el zinc selenio con diferentes formas o fuentes químicas, como lo llamamos, en el contexto del cambio en la composición del alimento. En una suite de radionúclidos, pese aproximadamente 0,2 gramos de muestras de alimento de salmón del Atlántico molido y mézclelo con un radiotrazador de zinc de actividad específica conocida en un tubo de muestra de volumen de cinco mililitros. Prepare otras seis alícuotas del tampón y agregue uno de los aminoácidos que se muestran aquí a cada uno para alcanzar una concentración molar final de cinco milimolares.
Agregue un tampón luminal intestinal de agua dulce para alimentar la muestra. A continuación, agregue el tampón luminal intestinal de agua dulce a las alícuotas tampón que contienen los aminoácidos. Cierre los tubos y haga girarlos en un girador giratorio a 25 RPM durante 30 minutos.
Luego, centrifugar a 1, 157 x g durante 10 minutos, para separar las fracciones solubles y no solubles. Utilice un cajero gamma para medir los recuentos por minuto del radiotrazador de zinc en las fracciones solubles y no solubles. Lave la línea celular intestinal derivada de la trucha arco iris dos veces con un mililitro de solución de EDTA y desvía la solución después de cada lavado con una pipeta.
Trate las células lavadas con solución de tripsina al 0,25%. Gire suavemente el matraz en ángulos agudos durante dos minutos. Luego agregue 10 mililitros de medio L-15 que contenga 5% FBS para neutralizar la tripsina.
Usando una pipeta estéril, decantar la suspensión celular resultante en un tubo de centrífuga inferior cónico. Centrifugar a 130 x G durante tres minutos. Luego, utilizando un hemocitómetro, determine la densidad de las células cosechadas mediante el conteo manual.
Seme las células en placas de 24 pozos a una densidad celular de 50,000 células por mililitro, por pozo, e incube las placas a 19 grados Celsius bajo una atmósfera normal durante 48 horas antes de los experimentos. Después de alimentar a los peces durante 11 días y sacrificarlos, recolecte una muestra agrupada de las heces del pez despojándolas de la aleta ventral al ano y colóquela en un plato. Use una espátula para transferir las heces de la placa a un tubo cónico de 50 mililitros.
Almacene inmediatamente las muestras a 20 grados centígrados. En este estudio, la disponibilidad mineral de la alimentación para peces se evalúa utilizando una serie de métodos complementarios. El análisis representativo de la alimentación del salmón del Atlántico a través del método de espectrometría de masas de plasma acoplado inductivamente por cromatografía de tamaño proporciona datos sobre las especies químicas de zinc que se encuentran en la fracción soluble.
Cinco picos que contienen zinc se pueden ver en esta fracción, cada uno con un peso molecular diferente. Las especies químicas de zinc que se encuentran en la fracción soluble pueden tener diferentes fuentes, porque el alimento utilizado contiene ingredientes marinos y vegetales, y se complementa. El rango de peso molecular de estas especies sugiere que estos compuestos podrían ser metaloproteínas.
Mientras que la solubilidad del zinc suplementado 65 aumenta la presencia de todos los aminoácidos probados, se encuentra una mayor solubilidad con la histidina y la lisina. La absorción apical de zinc en las células GC de Arteca está significativamente influenciada por la presencia de L-Met o DL-Met a dos concentraciones milimolares. Además, el impacto de la metionina en la absorción de zinc se ve afectado negativamente por la presencia de BCH.
La principal ventaja de este protocolo es que intentamos combinar diferentes enfoques en estudios visuales, analíticos e invivo, para comparar y complementar entre sí cuando se trata de estudiar la disponibilidad de minerales.
