Çinko selenyum gibi mikro metallerin farklı kimyasal formlara veya kaynaklara sahip çözünürlüklerinin, dediğimiz gibi, yem bileşimini değiştirme bağlamında kullanılabilirliğini inceledik. Bir radyonüklid süitinde, yaklaşık 0,2 gram öğütülmüş Atlantik somon yem numunesi tartın ve beş mililitre hacimli bir numune tüpünde bilinen belirli aktivitenin çinko radyotracer'ı ile karıştırın. Tamponun diğer altı aliquot'unu hazırlayın ve beş milimolar son azı dişi konsantrasyonuna ulaşmak için burada gösterilen amino asitlerden birini ekleyin.
Numuneyi beslemek için tatlı su bağırsak ışık tamponu ekleyin. Daha sonra, amino asitleri içeren tampon aliquots tatlı su bağırsak ışık tamponu ekleyin. Tüpleri kapatın ve 25 RPM'de 30 dakika boyunca döner spinner üzerinde döndürün.
Daha sonra, çözünür ve çözünmeyen fraksiyonları ayırmak için 10 dakika boyunca 1, 157 x g'da santrifüjleyin. Çözünür ve çözünmeyen fraksiyonlarda çinko radyotracer'ın dakika başına sayılarını ölçmek için bir gama veznedar kullanın. Gökkuşağı alabalığı türetilmiş bağırsak hücre hattını bir mililitre EDTA çözeltisi ile iki kez yıkayın ve her yıkamadan sonra çözeltiyi bir pipet kullanarak sifonlayın.
Yıkanmış hücreleri% 0.25 tripsin çözeltisi ile tedavi edin. Matarayı iki dakika boyunca akut açılarda hafifçe döndürün. Daha sonra tripsin nötralize etmek için% 5 FBS içeren 10 mililitre L-15 ortamı ekleyin.
Steril bir pipet kullanarak, elde eden hücre süspansiyonu konik bir alt santrifüj tüpüne dekantüle edin. Üç dakika boyunca 130 x G'de santrifüj. Daha sonra bir hemositometre kullanarak, elle sayarak hasat edilen hücrelerin yoğunluğunu belirleyin.
Hücreleri mililitre başına 50.000 hücre yoğunluğunda 24 kuyu plakasına tohumlayın ve deneylerden önce 48 saat boyunca normal bir atmosfer altında 19 santigrat derecede tabakları kuluçkaya yatırın. Balıkları 11 gün besledikten ve ötenazi yaptıktan sonra, ventral yüzgecinden anüse kadar soyunarak balık dışkısının havuzlanmış bir örneğini toplayın ve bir tabağa yerleştirin. Dışkıyı plakadan 50 mililitrelik konik bir tüpe aktarmak için bir spatula kullanın.
Örnekleri hemen 20 santigrat derecede saklayın. Bu çalışmada, balık yeminin mineral mevcudiyeti bir dizi ücretsiz yöntem kullanılarak değerlendirilir. Atlantik somon yeminin boyut dışlama kromatografisi endüktif olarak bağlanmış plazma kütle spektrometresi yöntemi ile temsili analizi, çözünür fraksiyonda bulunan çinko kimyasal türleri hakkında veri sağlar.
Bu fraksiyonda her biri farklı moleküler ağırlığa sahip beş çinko görülebilir. Çözünür fraksiyonda bulunan çinko kimyasal türleri farklı kaynaklara sahip olabilir, çünkü kullanılan yem hem deniz bazlı hem de bitki bazlı bileşenler içerir ve takviye edilir. Bu türlerin moleküler ağırlık aralığı, bu bileşiklerin metalloproteinler olabileceğini göstermektedir.
Takviyeli çinko 65'in çözünürlüğü test edilen tüm amino asitlerin varlığını arttırırken, histidin ve lizin ile daha yüksek çözünürlük bulunur. Arteca GC hücrelerindeki apikal çinko alımı, iki milimolar konsantrasyonda L-Met veya DL-Met varlığından önemli ölçüde etkilenir. Ayrıca, methioninin çinko alımı üzerindeki etkisi BCH varlığından olumsuz etkilenir.
Bu protokolün en büyük avantajı, mineral kullanılabilirliğini incelemek söz konusu olduğunda birbirimizi karşılaştırmak ve iltifat etmek için görsel, analitik ve invivo çalışmalarında farklı yaklaşımları birleştirmeye çalışmamızdır.
