우리는 공급 조성을 변경하는 맥락에서, 우리가 그것을 부르는 것과 같이, 다른 화학 양식 또는 근원을 가진 아연 셀레늄같이 마이크로 금속의 가용성을 공부했습니다. 방사성 핵종 스위트에서는 약 0.2 그램의 지상 대서양 연어 사료 샘플을 계량하고 5 밀리리터 볼륨 샘플 튜브에서 알려진 특정 활동의 아연 방사능 추적기와 혼합합니다. 완충제의 여섯 개의 다른 알리쿼트를 준비하고 5 밀리머의 최종 어금니 농도에 도달하기 위해 각각 에 표시된 아미노산 중 하나를 추가합니다.
담수 장 발광 버퍼를 추가하여 샘플을 공급합니다. 다음으로, 아미노산을 포함하는 완충 알리쿼트에 담수 장 발광 버퍼를 추가합니다. 튜브를 닫고 25 RPM의 회전 스피너에서 30 분 동안 회전 회전 스피너로 회전하십시오.
그런 다음 원심분리기는 1, 157 x g에서 10분 동안 수용성 및 불용성 분획을 분리합니다. 감마 점원을 사용하여 수용성 및 비 수용성 분획에서 아연 방사능 추적기의 분당 수를 측정합니다. EDTA 용액 1밀리리터로 내장 세포주에서 유래한 무지개 송어를 두 번 씻고, 파이펫을 사용하여 세척할 때마다 용액을 제거합니다.
세척된 셀을 0.25%의 트립신 용액으로 치료합니다. 플라스크를 급성 각도로 2분간 부드럽게 회전시다. 그런 다음 트립신을 중화시키기 위해 5 %의 FBS를 포함하는 L-15 배지 10 밀리리터를 추가합니다.
멸균 파이펫을 사용하여 결과 셀 서스펜션을 원뿔 형 원심 분리 튜브로 디포징합니다. 130 x G의 원심분리기는 3분간. 그런 다음 혈류계를 사용하여 수동 계수에 의해 수확 된 세포의 밀도를 결정합니다.
세포는 50, 밀리리터당 000세포의 세포 밀도로 24개의 우물 판에 시드하고, 실험 전에 48시간 동안 정상 대기하에서 19°C에서 플레이트를 배양한다. 11일 동안 물고기를 먹이고 안락사한 후, 복부 지느러미에서 항문까지 벗겨서 물고기 대변의 풀이 있는 샘플을 모아 접시에 놓습니다. 주걱을 사용하여 접시에서 대변을 50 밀리리터 원내 튜브로 옮기십시오.
샘플을 섭씨 20도에 즉시 보관하십시오. 이 연구에서는, 물고기 사료의 미네랄 가용성은 무료 방법의 번호를 사용하여 평가된다. 크기 배제 크로마토그래피를 통한 대서양 연어 사료의 대표적인 분석은 유도적으로 결합된 플라즈마 질량 분석 방법을 통해, 수용성 분획에서 발견되는 아연 화학 종에 대한 데이터를 제공한다.
피크를 포함하는 5개의 아연은 이 분수에서, 각각 다른 분자량을 가진 볼 수 있습니다. 수용성 분획에서 발견되는 아연 화학 종은 사용되는 사료가 해양 기반 및 식물 기반 성분을 모두 포함하고 보충되므로 다른 소스를 가질 수 있습니다. 이 종의 분자량 범위는 이 화합물이 금속 단백질일 지도 모른다는 것을 건의합니다.
보충 아연65의 용해도는 모든 테스트 된 아미노산의 존재를 증가하지만, 더 높은 용해도는 히스티딘과 리신으로 발견된다. 아르테카 GC 세포에서 Apical 아연 섭취량은 2밀리머 농도에서 L-Met 또는 DL-Met의 존재에 의해 크게 영향을 받습니다. 또한, 메티오닌이 아연 섭취량에 미치는 영향은 BCH의 존재에 의해 부정적인 영향을 받습니다.
이 프로토콜의 주요 장점은 우리가 시각적, 분석 및 생체 내 연구에서 서로 다른 접근 방식을 결합하여 광물 가용성을 연구할 때 서로를 비교하고 칭찬하려고 노력했다는 것입니다.
