Soy Martin Ryll de los laboratorios de investigación del Departamento de Cirugía General, Visceral y De Trasplante de la LMU en Múnich. Hoy vamos a mostrarles un modelo de trasplante aórtico heterotópico murino utilizando una técnica de manguito no sutura modificada. En primer lugar, anestesiar al animal receptor con una inyección intraperitoneal de midazolam, medetomidina y fentanilo.
Recorta todo el cabello de la región lateral cervical con un cortapelos eléctrico para animales pequeños y aplica un pomada oftálmica con hisopos de algodón para evitar que los ojos se sequen durante el procedimiento. Coloque al animal en posición supina en una almohadilla de calentamiento debajo del microscopio y pegue suavemente sus patas en la mesa de operaciones con tiras de yeso sensibles a la piel. Incline la cabeza hacia atrás y frote el campo operativo varias veces con alcohol.
Haga una incisión cutánea desde la incisión yugular hasta la mandíbula inferior derecha con tijeras pequeñas. Retire el lóbulo inferior derecho de la glándula submandibular a través de la cautela bipolar del pediculo del vaso y la posterior escisión con micro tijeras. Retire el músculo esternocleidomastoideo derecho a través de cautey bipolar de la parte superior e inferior y la posterior escisión con micro tijeras para acceder a la arteria carótida común.
Movilizar la arteria carótida común tan lejos y proximally como sea posible tirando del tejido conectivo circundante con fórceps finos. Ate dos ligaduras de seda 7-0 con una distancia mínima entre sí alrededor de la mitad de la arteria carótida común y transecte la arteria carótida común con micro tijeras finas entre las ligaduras. Pase el extremo ligado proximal a través del brazalete y arréglalo con una pequeña abrazadera de arteria.
Retire la ligadura con micro tijeras finas lo más cerca posible de la ligadura y enjuague el lumen con solución salina heparinizada con una aguja de calibre 30 mientras se cuida de no dañar las paredes del recipiente. Desensiare el lumen abierto usando dilatadores vasculares finos e invierta el muñón carótido sobre el manguito tirando suavemente sobre el tubo de poliamida. Fije inmediatamente la carótida invertida con un bucle de seda 7-0 preatado libremente.
Realice el mismo procedimiento en el otro extremo de la arteria carótida con el otro brazalete. Pase el extremo ligado distal a través del brazalete y arréglalo con una pequeña abrazadera de arteria. Retire la ligadura con micro tijeras finas lo más cerca posible de la ligadura y enjuague el lumen con solución salina heparinizada con una aguja de calibre 30 mientras se cuida de no dañar las paredes del recipiente.
Desensiare el lumen abierto usando dilatadores vasculares finos e invierta el muñón carótido sobre el manguito tirando suavemente sobre el tubo de poliamida. Fije inmediatamente la carótida invertida con un bucle de seda 7-0 preatado libremente. Deje a un lado el animal receptor e hidratar el dos tercio superior con solución salina hasta que se explante el segmento aórtico.
Anesthetizar el ratón donante de la misma manera que el animal receptor. Recorta todo el cabello de la región abdominal y torácica con un cortapelos eléctrico para animales pequeños y aplica un pomada oftálmica con hisopos de algodón para evitar que los ojos se sequen durante el procedimiento. Coloque al animal en posición supina en una almohadilla de calentamiento debajo del microscopio y pegue suavemente sus patas en la mesa de operaciones con tiras de yeso sensibles a la piel.
Frote el campo operativo varias veces con alcohol. Realiza una laparotomía abdominal de línea media con tijeras pequeñas y empuja los intestinos ligeramente hacia arriba para exponer la vena cava inferior. Inyecte el CIV con un cc de solución salina heparinizada con una aguja de calibre 30.
Corte la aorta abdominal y el CIV debajo de las arterias renales con tijeras pequeñas para exsanguinar al animal donante. Coloque una compresa en el abdomen para absorber la sangre. Realizar una toracotomía a través de la desviación bilateral de las costillas con tijeras e inclinar la pared anterior del pecho cranially con una abrazadera quirúrgica para exponer el mediastino.
Corte el CIV y el esófago directamente por encima del diafragma con micro tijeras. Retire el corazón y los pulmones titulando hacia arriba con fórceps sosteniendo el CCI cortado y el esófago y luego excisándolos con micro tijeras de la base para acceder a la aorta torácica y el mediastino dorsal. Movilizar la aorta torácica de su tejido circundante separando el tejido conectivo circundante y la grasa con fórceps finos mientras tiene cuidado de no dañar ninguna arteria intercostal.
Cauterizar todas las ramas de la aorta torácica con fórceps cautery bipolares e extirpar el segmento aórtico entre el diafragma y el arco aórtico utilizando micro tijeras. Enjuague el segmento aórtico extirpado con solución salina heparinizada con una aguja de calibre 30 mientras se cuida de no dañar las paredes del vaso para eliminar la sangre o los coágulos restantes y transferir el injerto al animal receptor. Tire del extremo proximal del segmento aórtico del donante sobre el manguito proximal en la parte superior de la arteria carótida invertida con fórceps finos e inmediatamente fije con un lazo de seda 7-0 ligeramente preatado.
Recorte el extremo libre distal del injerto aórtico con micro tijeras para que la longitud del injerto se ajuste a la distancia entre los dos puños. Tire del extremo distal del segmento aórtico del donante sobre el manguito distal en la parte superior de la arteria carótida invertida con fórceps finos e inmediatamente fije con un bucle de seda 7-0 ligeramente preatado. Retire primero la abrazadera distal para permitir la perfusión retrógrada.
Después de lograr la hemostasia, retire la abrazadera proximal para completar la anastomosis. Finalmente, cierre la herida con 6-0 sutura continua. Después de 28 días, los animales son sacrificados y los injertos preservados para la tinción histológica.
Como se muestra en estas manchas de secciones aórticas de Van-Gieson, los aortas aloingradas completamente MHC de donantes Balb/c a seis receptores negros desarrollaron una hiperplasia neointimal significativa que resultó en un estrechamiento luminal. Por otro lado, los trasplantes aórticos singénicos de seis donantes negros a seis receptores negros desarrollaron poca hiperplasia neointimal. La tinción por inmunofluorescencia contra SM22, un marcador para las células musculares lisas vasculares, como se muestra en esta imagen en fluorescencia verde, demuestra que la neotima consiste principalmente en células musculares lisas vasculares.
El trasplante aórtico murino sirve como modelo para la vasculopatía de trasplante crónico que es la causa más común de insuficiencia de injerto tardío. En comparación con el modelo abdominal ortotópico, nuestra técnica de manguito modificado es menos microquirúrgica exigente, lo que conduce a una alta tasa de éxito. Además, debido al diámetro constante del manguito, las variaciones de la anastomosis vascular como se ve en otros modelos de trasplante microquirúrgico pueden ser descuidadas.
Además, el tiempo isquémico cálido se mantiene constante en todos los grupos experimentales, ya que el animal receptor se prepara primero antes de que se explante el segmento aórtico. Nuestro modelo modificado debería ayudar a otros laboratorios a establecer un trasplante aórtico murino.
