El ensayo Flypub mide comportamientos desinhibidos bajo la influencia del alcohol. Facilitando así el estudio mecanicista del trastorno por consumo de alcohol. El alcohol es una de las drogas más fácilmente disponibles y ampliamente abusadas en el mundo.
El mecanismo neurobiológico subyacente al trastorno por consumo de alcohol, sin embargo, se entiende incompletamente. La mosca de la fruta, Drosophila melanogaster, se ha utilizado ampliamente para estudiar los efectos del etanol sobre la euforia, locomoción, desinhibición y sedación. También se utiliza para estudiar sus cambios largos y duraderos en el comportamiento relevante para la adicción como la tolerancia, sensibilización, y la búsqueda de etanol.
Muchos estudios en Drosophila y otros modelos animales se centran en los efectos de activación locomotora del etanol. El efecto distintivo del etanol es la desinhibición conductual. Sin embargo, su estudio está bastante subrepresentado.
Para abordar este tema clave, desarrollamos el ensayo Flypub para medir el comportamiento desinhibido bajo la influencia del etanol. Para montar la cámara Flypub, tome una botella redonda y corte su parte inferior de una marca de 25 mililitros con una cuchilla de afeitar. Cree un agujero en la marca de 50 mililitros utilizando un soldador caliente.
Este es el punto de acceso donde se introducirán las moscas. Coloque una malla redonda de 54 milímetros de diámetro en la marca de 75 mililitros y fíjela con pegamento caliente. Coloque una lámina de plástico transparente de 70 milímetros de diámetro en el extremo inferior abierto y fíjela con pegamento caliente.
Para asegurarse de que la ronda de plástico está firmemente unida a la parte inferior, presión hacia abajo usando pesas. Recoge moscas machos en un grupo de 33. Colóquelos en el lado de un vial de alimentos.
Colóquelos en una incubadora de 25 grados Celsius con al menos 50% de humedad relativa y una luz de 12 horas, 12 horas de ciclo oscuro durante 2 días antes de la exposición al etanol. Prepare la estación de ensayo Flypub encendiendo luces, un ordenador y una cámara para la grabación de vídeo. Prepara seis pubs para un conjunto de experimentos.
Etiquetarlos con números del uno al seis. Introduzca suavemente las moscas en el pub usando un pequeño embudo. Cierre el pub con una cinta.
Aclimatar a las moscas durante 10 minutos. Durante la aclimatación, ajuste el enfoque de la cámara y grabe los últimos cinco minutos de aclimatación. Durante la aclimatación preparar almohadillas de algodón para la entrega de etanol.
Corta una almohadilla de algodón en cuatro cuadrantes iguales y luego recorta las esquinas para que quepa en un plato de Petri. Agregue una almohadilla de algodón a un plato de Petri. Añadir un mililitro de 95% de etanol a la almohadilla de algodón.
Asegúrese de que la solución de etanol se distribuya uniformemente en toda el área de la almohadilla. Cubra rápidamente el plato Petri con toallitas de laboratorio. Coloque cuidadosamente un etanol que contenga un plato de Petri debajo de cada pub.
Alinee los pubs en el escenario. Comience a grabar e inicie simultáneamente un temporizador. Graba hasta que las moscas dejen de cortejar o se muevan.
Retire el etanol que contiene el plato Petri cuando más del 90% de las moscas estén sedadas. Transfiera suavemente las moscas sedadas de vuelta a los viales de alimentos. Colóquelos de nuevo en la incubadora.
Repita los pasos anteriores cada 24 horas durante seis días consecutivos. Abra el vídeo con un reproductor multimedia. A continuación, puntúe el número de hombres que participan en actividades de cortejo cada 10 segundos.
Las actividades de cortejo para puntuar incluyen: extensión unilateral del ala, cadena de cortejo, círculo de cortejo, flexión abdominal y montaje. Se muestran grabaciones representativas del comportamiento de la mosca. Durante la aclimatación donde los machos no muestran mucha actividad.
Durante la primera exposición donde los machos exhiben un cortejo esporádico. Y durante la sexta exposición donde los machos muestran un cortejo de actividad. Introduzca el número de machos que muestran el cortejo en un bloque de diez segundos.
Utilice el número máximo de machos cortejados en tres bloques consecutivos de 10 segundos de tiempo como punto de datos representativo. El promedio de 10 puntos de datos consecutivos que tienen el valor más alto representan el porcentaje de cortejo intermale por pub. El tipo salvaje Canton-S exhibe progresivamente mayores actividades de cortejo desinhibido tras la exposición repetida al etanol.
Esto representa la sensibilización conductual al efecto de desinhibición del etanol. Examinamos el papel de la octopamina en la sensibilización probando las moscas que carecen de tiramina beta-hidroxilasa, T beta H, por lo tanto deficiente en octopamina. Al igual que Canton-S, los mutantes T beta H mostraron respuestas escaladas a la exposición repetida al etanol, pero a un nivel reducido.
Cuando comparamos T beta H y Canton-S, observamos que los machos mutantes T beta H mostraban un cortejo menos desinhibido que los machos de Cantón-S en cada exposición indicando que la octopamina puede ser importante para la sensibilización. Ahora puede configurar, conducir y analizar comportamientos inducidos por etanol utilizando el ensayo Flypub. Los puntos clave a tener en cuenta incluyen, uno, el montaje adecuado del pub.
Dos, entrega constante de etanol, y tres, puntuación de comportamiento precisa e imparcial. El ensayo Flypub tiene muchas ventajas. Es simple, barato de configurar y fácil de aprender.
Además, se pueden ensayar simultáneamente múltiples grupos de moscas, facilitando este estudio para identificar los efectos de las manipulaciones genéticas o experimentales. El ensayo Flypub es altamente atractivo para los experimentadores en todos los niveles, incluyendo primaria a escuela secundaria, estudiantes de pregrado y posgrado, postdoctorados y profesores. En resumen, el ensayo Flypub le permitirá identificar jugadores moleculares, vías celulares, circuitos cerebrales y factores de riesgo que contribuyen al trastorno del consumo de alcohol.
