El objetivo general de este paradigma es evaluar la eficacia de una posible droga antidroqueo utilizando modelos de roedores de trastorno por consumo de alcohol. El trastorno por consumo de alcohol representa una crisis de salud pública importante. Los tratamientos actuales son ineficaces y se necesita una investigación preclínica en curso.
Nuestro protocolo nos permite evaluar la seguridad y utilidad de un tratamiento potencial, así como echar un vistazo a la neurobiología subyacente del trastorno en sí. Comience el procedimiento calentando un cuchillo de utilidad en el quemador Bunsen. Con este cuchillo, corte aproximadamente una pulgada de los extremos superior e inferior de una pipeta serológica de plástico de 18 mililitros.
A continuación, caliente la pipeta bajo una pistola de calor. Inserte el tubo de cierre del rodamiento de bolas en el extremo inferior de la pipeta. Luego, usando una pistola de envoltura retráctil disponible comercialmente, selle el tubo de sipper en su lugar con envoltura retráctil.
Tapa la otra abertura con un tapón de silicona. Para la habituación animal, a su llegada, una sola casa cada ratón en la jaula estándar de polisulfono de policarbonato con ropa de cama, comida y agua y una tapa de la jaula de rejilla de metal. A partir del día cuatro de la aclimatación de una semana de vivienda individual, mida y registre el cuerpo diario del ratón y los pesos de los alimentos.
Mida la ingesta de agua con los aguafuertes junto a la botella invertida, para registrar el punto más alto del menisco. Una vez que la ingesta de agua se haya estabilizado a más o menos 10% de variabilidad desde la media de los últimos tres días, comience el acceso al etanol con TBC o DID. Para llevar a cabo TBS, prepare una solución de 10% de etanol en 1.000 mililitros añadiendo 105,3 mililitros de etanol de grano a prueba de 190 a 894,7 mililitros de agua y, a continuación, agítelo a fondo.
Dado que el etanol se evapora rápidamente, reemplace la solución dos veces por semana. El primer día de TBC, en cada jaula, vacíe una de las dos botellas de agua y llénelo hasta el borde con la solución de etanol recién preparada. Dado que el etanol y el agua son difíciles de distinguir visualmente, etiquete claramente las botellas con su contenido correspondiente.
Agregue más solución a la botella de agua según sea necesario. A continuación, vuelva a colocar la botella en la jaula, asegurándose de que la tapa esté cerrada de forma segura y carente de burbujas de aire o fugas de la boquilla. Retire cualquier burbuja de aire simplemente tocando en la botella para que el aire pueda escapar de la botella.
Alternar la posición de la botella cada dos días para corregir las influencias relacionadas con la preferencia de lugar acondicionado en la actividad de bebida. Registre el nivel de ingesta de etanol y analice la tasa de ingesta y preferencia de etanol del 10%. Tan pronto como la ingesta de etanol se haya estabilizado, administre una única inyección intraperitoneal de control a cada ratón durante la rutina de medición diaria, para acostumbrar el ratón a la inyección.
Una vez que se haya restablecido una línea de base de etanol con baja variabilidad, divida los ratones en grupos experimentales y de control utilizando los valores de ingesta de etanol para que todos los grupos tengan valores de ingesta de etanol promedio aproximadamente similares. Comenzar la dosificación diaria de medicamentos, ya sea para una duración aguda o de varios días. Para llevar a cabo DID, en cada día de acceso programado al etanol, registrar las mediciones para el volumen de agua, la ingesta de alimentos y el peso corporal y realizar la dosificación de drogas.
Realizar esto durante un tiempo preseleccionado durante el ciclo de luz que se elige de acuerdo con la farmacocinética de la droga para que el compuesto se está acercando a la concentración máxima del cerebro durante el período de bebida. A continuación, prepare una solución de 20% de etanol en 1.000 mililitros añadiendo 210,5 mililitros de etanol de grano a prueba de 190 a 789,5 mililitros de agua. A continuación, agítelo a fondo.
Llene la botella de etanol antes del inicio de la sesión de bebida para que tan pronto como se inicia el DID, la botella de agua pueda simplemente ser reemplazada por la botella de alcohol. Durante toda la sesión de DID, utilice un faro de luz roja para no molestar al animal. Al comienzo de la sesión de bebida DID, que está programada para comenzar tres horas en el ciclo oscuro antes del ciclo de luz, registre el volumen de agua para cada ratón.
A continuación, reemplace cada botella de agua con una botella de 20% solución de etanol y registre el volumen de etanol inicial. Lea y registre el volumen final de etanol dos horas más tarde al final de la sesión de bebida en los días uno a tres y cuatro horas más tarde en el cuarto día. A continuación, analice la ingesta de etanol al 20%.
Posteriormente, reemplace la botella de etanol con una botella de agua y registre el volumen del agua. Esta cifra muestra la evaluación de los efectos de una dosis aguda de moxidectina a cinco miligramos por kilogramo en la ingesta y preferencia de etanol. Una dosis única de moxidectina redujo significativamente la ingesta de alcohol por encima del 45%en comparación con las inyecciones de pre-moxidectina y la preferencia por encima del 30%10% de la ingesta de etanol y la preferencia permanecen significativamente más bajas que la solución salina en el día inmediatamente posterior al tratamiento con MOX.
Aquí, el consumo excesivo de alcohol se modeló mediante el procedimiento DID. A los ratones se les administró la solución salina en los días uno a cuatro con el 20% de etanol basal establecido en el cuarto día. En los días uno a tres del segundo ciclo semanal, todos los ratones recibieron otra inyección salina diaria.
Los valores de ingesta de etanol del tercer día se utilizaron para dividir los ratones en dos grupos que posteriormente recibieron una inyección de moxidectina a cinco miligramos por kilogramo o solución salina en el día cuatro. La semana siguiente, todos los ratones recibieron inyecciones salinas diarias en los días uno a cuatro y la ingesta de etanol se midió una vez más en el día cuatro. Se analizó la administración aguda de MOX y se encontró que se redujo significativamente la ingesta de alcohol por encima del 54% en comparación con las inyecciones previas a la droga.
Tenga en cuenta que los experimentos futuros que utilizan este protocolo deben realizarse para evaluar el mecanismo, dosificación y toxicidad de un fármaco potencial, así como para evaluar su eficacia en relación con las opciones de tratamiento actuales.
