Seguimiento de linaje y análisis clonal en el desarrollo de la corteza cerebral mediante el análisis de mosaico con marcadores dobles (MADM)

El análisis de mosaico con tecnología Double Markers es un método potente que puede proporcionar información altamente cuantitativa sobre el comportamiento de proliferación y las salidas de bodega de las células madre de los individuos. Una característica única de esta técnica, es que permite el trazado de linajes y el análisis genético funcional de genes candidatos en el nivel de una sola célula.demontrating to procedure será, Carmen Streicher, su técnico, Nicole Amberge, post-doc, Gisselle Cheung, post-doc y Andy Hansen, una estudiante de doctorado de mi laboratorio. Para inducir eventos de recombinación MADM en ratones experimentales, utilice una jeringa de 1 ml equipada con una aguja de calibre 25 para administrar una sola inyección de tamoxifeno intraperitoneal en una presa de tiempo para embarazada. Desde el análisis clonal de MADM hasta los puntos de tiempo posnatales. En los días embrionarios 18 a 19, coloque un ratón embarazada en posición supina y desinfecte el pelaje con 70% de etanol. Haga una pequeña incisión en la piel en la parte inferior del abdomen por encima del útero y haga una segunda incisión a través de los músculos y la pared muscular abdominal para revelar el peritoneo. Use tijeras para separar el útero de los tejidos circundantes y coloque el útero intacto en un guante con agua tibia. A continuación, utilice tijeras y dedos de punta fina para abrir cuidadosamente las paredes uterinas para liberar los embriones. Limpie los cachorros presionando suavemente los pechos de vez en cuando para iniciar la respiración antes de transferir los animales prenatales a una madre adoptiva. Para recoger el tejido clon neuronal MADM coloque un animal anestesiado en la posición supina en una bandeja de cirugía de perfusión y desinfecte el pelaje con 70%etanol. Usa tijeras y fórceps para hacer una incisión a través de la piel y una incisión a través de la capa muscular. Cuando la cavidad torácica es visible, olfatee y levante el diafragma para revelar el corazón y recorte y fije cuidadosamente la caja torácica a la bandeja quirúrgica.inserte una aguja conectada a un tubo de bomba peristáltica lleno de PBS en el ventrículo izquierdo inferior del corazón y use pequeñas tijeras Iris para hacer una incisión en el extremo posterior de la aurícula derecha. Perca el sistema cardiovascular con el PBS seguido inmediatamente por perfusión con hielo frío recién preparado 4%paraformaldehído en PBS. Cuando la perfusión esté completa, retire el cerebro a través de una disección cuidadosa y coloque el órgano cosechado en al menos cinco veces el volumen cerebral de 4%paraformaldehído fresco durante la noche a las 4