Este método se puede utilizar para reproducir los eventos inflamatorios que ocurren en la pancreatitis biliar aguda. Es posible estudiar los cambios en el tejido pancreático en sus primeras etapas, lo que generalmente no es posible en la clínica. Las principales ventajas de esta técnica son que es rápida y fácil de reproducir para un investigador capacitado, y ofrece resultados similares a la pancreatitis aguda en humanos.
El método se puede utilizar para estudiar las respuestas inmunes farmacológicas de las moléculas de fármacos y otras intervenciones terapéuticas, ya que permite el estudio de las células mediadoras inflamatorias en el páncreas y los órganos adyacentes. Al intentar este protocolo, la localización de los órganos y el establecimiento de la región de canulación es crucial. Memorice la ubicación de los órganos y ejerza la aplicación de inyección primero utilizando una solución de color como el azul de metileno.
Después de verificar la profundidad de la anestesia con un pellizco en el dedo del pie, limpie el área abdominal de un ratón anestesiado con una solución de yodo de povidona al 5%. Con un recortador, retire el vello entre el pecho y la parte inferior del abdomen y limpie un área quirúrgica de aproximadamente dos centímetros cuadrados con 70% de alcohol. Inmovilice al animal en la tabla quirúrgica y use tijeras para cortar cinco milímetros de la piel horizontalmente en la parte superior del abdomen y un centímetro por debajo del proceso xifoide.
Repetir el corte en el peritoneo para realizar la laparotomía con una exposición mínima de la cavidad. Usando un retractor, tire del hígado hacia la cabeza a aproximadamente un centímetro del intestino y localice la región del páncreas y el duodeno. Usando fórceps, levante el hígado hacia la cabeza del animal.
Al tirar suavemente de la porción del intestino delgado, fije los dos extremos laterales con una sutura de polipropileno 6-0 para una mejor vista de la porción distal del conducto biliar común también. Usando un clip de microvasos, ocluya el conducto biliar común proximal temporalmente. Exponga el órgano fuera de la cavidad abdominal.
Luego haga una oclusión temporal del conducto biliar común distal con un 8-0 sutura. Para acceder al conducto biliar común, perfore la región periampular, que aparece como una parte blanquecina de la pared del intestino delgado. Con una aguja de 0,4 milímetros conectada a un tubo de polietileno de 0,54 milímetros, inicie la bomba de infusión para la infusión de solución de taurocolato de sodio al 2,5% a una velocidad constante de 10 microlitros por cada 10 gramos de peso corporal durante tres minutos.
Después de la infusión, retire el clip de microvasos, el temporal 8-0 sutura y la aguja de inyección del conducto biliar pancreático. Sutura el abdomen con una sutura de polipropileno monofilamento no absorbente 6-0. El tiempo entre la laparotomía y la sutura final no debe ser superior a 30 minutos.
Después de la cirugía, aloje a los animales en cajas de polietileno forradas con virutas de madera y agua y alimentos ad libitum. Sostenga suavemente al animal con la piel tirada hacia atrás, promoviendo una ligera protuberancia del globo ocular, y coloque al animal con el ojo hacia arriba. Inculque una gota de ungüento para los ojos que contenga anestésico local en el ojo del animal.
Coloque el extremo de un tubo capilar en la esquina medial del ojo e insértelo suavemente debajo del globo ocular en un ángulo de aproximadamente 30 a 45 grados. Gire el tubo capilar hasta que comience el flujo sanguíneo. Una vez que termine la recolección, asegure la homeostasis manteniendo los párpados cerrados con una ligera compresión.
Más tarde, usando una aguja de calibre 27, inyecte cuatro mililitros de PBS helado en la cavidad peritoneal del ratón. Después de la inyección, masajee suavemente el peritoneo durante 10 segundos para eliminar las células adheridas. Usando tijeras y pinzas, haz un pequeño corte de 0,5 centímetros en la piel interna y la musculatura para exponer la cavidad abdominal.
Inserte una pipeta de bulbo en el peritoneo y recoja la mayor cantidad de líquido posible, teniendo cuidado de no aspirar el tejido graso. Recoja una parte del páncreas de la región de la cabeza para su posterior procesamiento. Deposite el líquido recolectado en tubos mantenidos en hielo.
Luego centrifugue el líquido peritoneal a 250 veces G durante cinco minutos y almacene el sobrenadante para la dosificación de interleucina-6. Para obtener suero, centrifugue las muestras de sangre recolectadas a 700 veces G durante 15 minutos y almacene el sobrenadante para la dosis de amilasa e interleucina-6. El análisis del tejido pancreático 12 horas después de la inducción de la pancreatitis aguda mostró una inflamación intensa en el órgano afectado en comparación con las muestras de tejido del grupo simulado.
Resultados similares fueron representados por el examen histológico después de la tinción de hematoxilina eosina de muestras de tejido de simulación y APTA. El análisis de suero sanguíneo presentó un aumento significativo en la concentración sérica de amilasa e interleucina-6 en el grupo AP en comparación con el grupo simulado. Al mismo tiempo, la concentración de interleucina-6 fue significativamente mayor en el líquido de la cavidad peritoneal en el grupo AP.
La gravedad de la pancreatitis en este modelo depende proporcionalmente de la concentración, el volumen y la presión de la infusión, y el tiempo de inducción de la pancreatitis aguda. Con la ayuda de esta técnica, se pueden estudiar los efectos del lavado peritoneal continuo en la pancreatitis aguda grave.
