La pancreatitis crónica es una enfermedad compleja que involucra inflamación pancreática, fibrosis, dolor abdominal y otros síntomas. El modelo de infusión TNBS del conducto biliar replica el dolor neuropático observado en pacientes con pancreatitis crónica. Este protocolo de infusión de TNBS de conducto biliar ha sido optimizado para inducir la generación de un modelo de pancreatitis crónica en ratones.
Como la fusión de fármacos del conducto biliar en ratones es técnicamente desafiante, su visualización será útil para los investigadores nuevos en el método. Antes y dos y tres semanas después de la cirugía, use monofilamentos de Von Frey para aplicar diferentes niveles de fuerza en orden ascendente al área abdominal superior de un ratón negro C57 de ocho a 10 semanas de edad, 10 veces durante uno o dos segundos por aplicación. Considere elevar la retracción o lamer el abdomen como una respuesta positiva.
A continuación, cargue una jeringa de insulina equipada con una aguja de calibre 31 con 50 microlitros de una solución TNBS al 0,75 por ciento recién preparada. Cargue una segunda jeringa con 50 microlitros de etanol al 10 por ciento en solución salina como control del vehículo y coloque ambas jeringas en hielo protegido de la luz. Después de confirmar la falta de respuesta al reflejo del pedal, retire el vello de la región abdominal del ratón anestesiado afeitándose o aplicando crema depilación y coloque el ratón en una almohadilla quirúrgica calentada bajo un microscopio de disección.
Aplique ungüento veterinario en cada ojo y desinfecte el sitio quirúrgico con tres toallitas secuenciales de dos por ciento de yodo y tres toallitas de etanol al 70 por ciento use micro tijeras para hacer una incisión de 0.5 a un centímetro en un movimiento continuo y use hisopos de algodón para exponer suavemente el duodeno y localizar el conducto biliar común. Para evitar el flujo del tratamiento hacia el hígado y la vesícula biliar, use el microscopio para colocar un micro hemoclip recto sobre el conducto común proximal e inserte la aguja de la jeringa cargada con TNBS a través de la papila del vater en el conducto pancreático. Use un micro hemoclip curvo para asegurar la aguja e infunda la solución en el conducto pancreático en el transcurso de un minuto.
Cuando se haya entregado toda la solución, retire cuidadosamente las micro abrazaderas y confirme que el duodeno ha vuelto a su posición original. Antes del cierre de la cavidad abdominal, agregue 500 microlitros de solución salina estéril de 36 a 37 grados Celsius para ayudar a que el duodeno vuelva a su posición original y para ayudar con la recuperación de la peristalsis. Use una sutura continua con un punto de cinco O para cerrar la incisión en la capa muscular y cierre la piel con una sutura interrumpida con un punto de cuatro O.
Luego coloque el mouse en una jaula de recuperación en una almohadilla térmica con monitoreo hasta la recostación completa. Monitoree la salud y el comportamiento del ratón diariamente durante la primera semana después de la cirugía para detectar signos de angustia, como vocalizar, una postura de espalda encorvada o reducir la locomoción y medir el peso corporal cada dos días. Como se ha observado, la inyección de 50 microlitros de tinta como se ha demostrado da como resultado la infiltración de todo el páncreas, permitiendo la inducción de un fenotipo de enfermedad más homogéneo.
En este análisis representativo, en los primeros tres días después de la cirugía, los ratones en el grupo de control perdieron alrededor del seis por ciento de su peso corporal original antes de recuperarse gradualmente y ganar más del 100% de su peso corporal original para el día 21. En contraste, los ratones que recibieron TNBS perdieron alrededor del 15 por ciento de su peso corporal original durante los primeros cinco días después de la cirugía y recuperaron poco menos del 100 por ciento de su peso corporal original para el día 21. En comparación con los ratones de control, los animales inyectados con TNBS mostraron un aumento de la hipersensibilidad mecánica abdominal durante la segunda y tercera semana después de la cirugía.
El tamaño y el peso por peso corporal de los páncreas se redujeron significativamente en ratones TNBS en comparación con los páncreas cosechados de animales de control, lo que sugiere una marcada atrofia pancreática en animales tratados con TNBS consistente con los hallazgos en humanos con pancreatitis crónica grave y a largo plazo. El análisis histológico de las secciones de tejido pancreático de ratones tratados con etanol de control mostró una morfología normal, mientras que las secciones de tejido de ratones tratados con TNBS exhibieron una realización vacua con una pérdida masiva de células acinares que fueron reemplazadas por infiltración de células grasas y fibrosis. Evitar que el TNBS inyectado entre en la vejiga gal y el intestino es importante ya que un TNBS tiene efectos dañinos para el tejido.
Durante la infusión, mantenga la mano lo más estable posible para evitar la punción que actúa ese conducto biliar. Además de inducir el desarrollo de pancreatitis crónica, este arte de ratones de infusión de conductos biliares se puede utilizar para el desarrollo de otros modelos de enfermedad pancreática. Este modelo de ratón de pancreatitis crónica TNBS se puede utilizar para estudiar tanto la patogénesis como el tratamiento de la pancreatitis crónica, así como otras enfermedades pancreáticas.
